棱角山矾叶片愈伤组织的诱导及其细胞形态学观察

以棱角山矾叶片为外植体进行愈伤组织的诱导与增殖研究,并利用扫描电镜和透射电镜对愈伤组织进行细胞形态学观察。研究结果表明:叶基和叶中是棱角山矾叶片愈伤组织诱导的最佳部位,且宜选择远轴面向上的接种方式。棱角山矾叶片表面灭菌最适方法为70%酒精灭菌30~90 s,再用2%次氯酸钠灭菌3 min。愈伤组织诱导的最适培养基为B5+0.5 mg/L 6-BA+0.3 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L NAA+30 g/L蔗糖,该培养基上诱导率达到最高,为91.11%。愈伤组织增殖的最适培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L NAA+30 g/L蔗糖,该培养基上愈伤组织的增殖系数达到最高,为1.12,褐变率为14.29%。棱角山矾愈伤组织最佳的继代周期为20 d,以继代1~3次为宜。光暗交替有利于棱角山矾叶片愈伤组织的诱导,而暗培养促进愈伤组织的增殖。5 g/L活性炭对防止棱角山矾叶片愈伤组织褐化的效果最佳。胚性愈伤组织细胞呈球形、大小均一,多以细胞团形式存在,内容物丰富;非胚性愈伤组织细胞形状不规则,内含一大液泡,细胞器较少。     

杉木愈伤组织诱导及植株再生

以杉木成熟合子胚为起始外植体,研究了基本培养基、植物激素、凝固剂种类、有机附加物等因素对杉木愈伤组织的诱导、愈伤组织的继代培养及不定芽分化的影响。结果表明:1/2MS+2,4D2mg/L+6-BA1mg/L+KT1mg/L+糖30g/L是成熟合子胚诱导愈伤组织的最佳培养基;1/2MS+2,4-D1mg/L+6-BA0.5mg/L+KT0.5mg/L+糖30g/L适于杉木愈伤组织继代增殖;改良MS+6-BA0.5mg/L+KT1.5mg/L+蔗糖30g/L是诱导不定芽发生的最佳培养基。     

二穗短柄草植株再生体系的建立

以成熟种子为外植体建立二穗短柄草植株再生体系,结果表明:二穗短柄草成熟种子经1%次氯酸钠消毒液处理20min,接种于MS+4%蔗糖(pH 5.5)培养基中培养5d,萌发率为90%,褐化率为10%,污染率为0;萌发种子转入到愈伤组织诱导培养基MS+1mg/L 6-BA+1mg/L 2,4-D+0.5mg/L NAA+4%蔗糖(pH 5.5)上继代培养,光照条件下愈伤组织诱导率为86%,黑暗条件下愈伤组织诱导率为64%;二穗短柄草愈伤组织在MS+2mg/L 6-BA+0.1mg/L 2,4-D+0.5mg/L NAA+4%蔗糖(pH 5.5)进行不定芽诱导,不定芽发生率为90%;无根丛生芽继代转入到不定根诱导培养基1/2MS+0.5mg/L IBA+0.25mg/L NAA+4%蔗糖(pH 5.5)中,5d以后可以见到不定根的形成,15d后不定根发生率为91%;在研究中还发现,二穗短柄草种子萌发后可直接继代转入不定芽分化培养基形成健壮不定芽,不定芽诱导率为94%。     

丝棉木松散型胚性愈伤组织的诱导与增殖

通过建立丝棉木松散型胚性愈伤组织培养体系,为丝棉木组培快繁、体细胞离体诱变育种及遗传转化等研究奠定基础。本试验以丝棉木幼嫩茎段为外植体,研究植物生长调节剂不同种类和浓度对丝棉木松散型胚性愈伤组织诱导与增殖的影响。结果显示,丝棉木茎段在MS+1.0 mg/L 2,4-D培养基上可诱导出松散型愈伤组织,愈伤组织诱导率达100%;将松散型愈伤组织转接到MS+0.5 mg/L BA+0.5 mg/L 2,4-D的培养基上可获得胚性愈伤组织;将胚性愈伤组织转接到MS+0.25 mg/L BA+0.5 mg/L 2,4-D的培养基上,每15 d继代培养一次,继代时选择结构松散、质地硬脆的愈伤组织,继代培养2～3次后可获得均质的丝棉木松散型胚性愈伤组织。本研究表明,丝棉木茎段理想的松散型愈伤组织诱导培养基为MS+1.0 mg/L 2,4-D;最适松散型愈伤组织诱导培养基为MS+0.5 mg/L BA+0.5 mg/L 2,4-D;最适胚性愈伤组织增殖培养基为MS+0.25 mg/L BA+0.5 mg/L 2,4-D。     

香蕉薄切片愈伤组织再生体系的建立研究

以巴西香蕉品种的薄切片为外植体高频地诱导出愈伤组织,并诱导出了不定芽,获得了再生植株。在实验过程中,利用正交实验中筛选出愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+2,4-D 4.0 mg.L-1+KT 1.0 mg.L-1+NAA 1.0 mg.L-1+活性炭200 mg.L-1,诱导率可达100%,愈伤组织增殖的最佳培养基是MS+2,4-D 2.0 mg.L-1+6-BA 0.5 mg.L-1+NAA 0.5 mg.L-1+活性炭100 mg.L-1,继代3-4次的愈伤组织在6-BA浓度为5.0 mg.L-1的分化培养基上能分化出不定芽,继代10次之后愈伤组织在继代培养基上开始出现褐化现象,愈伤组织增殖明显受到抑制,褐化的愈伤组织逐渐死亡。     

红花萱草的花茎花蕾组织快繁技术的研究

取红花萱草的花蕾、花茎外植体,在MS培养基上用不同浓度的细胞分裂素BA和生长素NAA进行培养。结果表明:花茎的分化率比花蕾高,而最适合的培养基配方是:MS+BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂8 g/L。可诱导分化出愈伤组织,继代培养愈伤组织增埴的同时可获得健壮的再生植株。最适的生根培养基为:MS+NAA 0.3 mg/L+活性碳0.3 g/L+蔗糖30 g/L+琼脂8 g/L。     

短柄五加愈伤组织诱导及再生体系的建立

以短柄五加(Acanthopanax brachypus Harms)当年生嫩枝为材料,选择叶片、叶柄为外植体,使用6-BA、NAA、IBA、2,4-D等激素,配制成不同质量浓度的培养基,进行短柄五加愈伤组织诱导,同时分析愈伤组织诱导丛生芽和丛生芽增殖培养基的最佳配方,建立短柄五加植株的再生体系。结果表明,短柄五加叶片是较适宜诱导愈伤组织的外植体,愈伤组织诱导的培养基是MS+0.3mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA,诱导率为75.0%;愈伤组织诱导不定芽形成的适宜培养基为MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L,不定芽诱导率为100%;适宜不定芽增殖的培养基为MS+6-BA3.0mg/L+NAA 0.2mg/L,增殖系数为5.80;同时活性炭能够有效防止愈伤组织诱导过程中的褐化问题。     

湿地松愈伤组织的诱导研究初报

取湿地松成熟胚作为外植体,在添加不同BA、NAA浓度配比的MS培养基上,诱导愈伤组织的最适培养基是MS+BA0.5mg/L+NAA0.5mg/L+0.6%琼脂+25g/L蔗糖。实验同时证明,NAA是胚诱导愈伤组织的必需因子。     

牡丹愈伤组织诱导和继代培养体系的建立

以牡丹为材料,研究了不同外植体、激素对愈伤组织诱导和继代增殖的影响,结果表明:①牡丹子叶、胚轴是诱导愈伤组织的最佳外植体;②牡丹子叶愈伤组织诱导的最佳培养基为:MS+Ca2+;③牡丹愈伤组织增殖的最佳培养基为:MS+2,4-D 0.5 mg.L-1+NAA 1.5 mg.L-1+Vc 500 mg.L-1;④在培养基中添加500 mg.L-1Vc或去除Cu2+,具有较好的抗褐化效果。     

珍稀濒危植物异形玉叶金花组织培养初步研究

以异形玉叶金花幼嫩茎段为外植体,研究不同组合的激素组合及外源物对异形玉叶金花愈伤组织诱导及分化的影响。结果表明:诱导愈伤组织的最佳培养基组合为MS+6-BA 0.2 mg/L+2,4-D 1.5 mg/L;愈伤组织分化的最佳培养基组合为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+5 g/L椰乳,诱导生根的最佳培养基组合为1/4 MS+0.5mg/L NAA+0.2 mg/L IBA。     

苎麻品种“赣苎3号”下胚轴愈伤组织诱导及分化的研究

以苎麻品种"赣苎三号"种子萌发的无菌苗的下胚轴为外植体,通过研究不同培养基、不同生长调节物质对苎麻种子萌发、下胚轴愈伤诱导、不定芽的发生和生根的影响,筛选出以"赣苎3号"下胚轴为外植体的组织培养再生体系。结果表明:1/2 MS+TDZ 0.5 mg/L+IAA 0.01 mg/L+2,4-D 0.03 mg/L+CH 500 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂7 g/L为最佳种子萌发培养基,种子萌发率为77%。1/2 MS+TDZ 0.3 mg/L+IAA 0.03 mg/L+2,4-D 0.02 mg/L+CH 300 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂7 g/L为愈伤组织诱导及分化最佳培养基,愈伤率为98%,出芽率为51%。1/2 MS+蔗糖15 g/L+琼脂7.5 g/L为愈伤苗的最佳生根培养基,生根率为100%。     

欧洲水仙鳞片组织培养与快速繁殖

以欧洲水仙‘Dutch Master’为研究材料,通过对鳞片取材部位、培养光照、激素配比以及组培苗移栽基质的研究发现,欧洲水仙初代培养的较适外植体为内层鳞片下部,合适光照度为1 000 lx。愈伤组织诱导培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+2,4-D 0.3 mg/L+蔗糖30 g/L,小鳞茎的诱导分化培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2mg/L+蔗糖30 g/L,小鳞茎继代增殖培养基为MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.3 mg/L+蔗糖30 g/L,生根培养基为1/2MS+6-BA 0.3 mg/L+NAA 0.5 mg/L+蔗糖20 g/L。炼苗移栽基质配比为V(蛭石)∶V(泥炭土)∶V(园土)=1∶1∶2。     

山杏体细胞胚胎发生及其组织学观察

为了建立山杏体细胞胚胎发生再生体系,以山杏茎尖为外植体,研究山杏体细胞胚胎发生及其主要影响因子。结果表明:山杏茎尖在MS+6-BA(0.5 mg/L)+NAA(0.2 mg/L)培养基中愈伤组织诱导率达100%,胚性愈伤组织增殖的最佳培养基为MS+6-BA(0.5 mg/L)+2,4-D(0.2 mg/L)+水解酪蛋白(0.5 g/L)。山杏体细胞胚胎发生过程中能明显看出球形胚、心形胚、鱼雷胚、子叶胚等阶段。     

植物生长调节剂对黑果枸杞愈伤组织诱导、增殖及分化的影响

为建立黑果枸杞高频再生体系及进行细胞突变体筛选、遗传转化奠定基础,以黑果枸杞叶片、茎段和腋芽为外植体,以MS为基本培养基,附加不同浓度的植物生长调节剂进行愈伤组织的诱导、增殖及不定芽分化研究。结果表明:诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+2,4-D 2.0mg/L+6-BA 0.5mg/L;在愈伤组织的继代培养过程中,高浓度的2,4-D有利于愈伤组织的诱导,但对愈伤组织的生长有一定的抑制作用,最佳培养基为MS+2,4-D 1.0mg/L+6-BA 0.5mg/L;在愈伤组织的再分化过程中,6-BA对再生芽的分化效果最好,出芽率高,且多诱导出丛芽,最佳培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.10mg/L。试验表明:黑果枸杞叶片、茎段和腋芽均可诱导愈伤组织,茎段诱导率最高;筛选出了茎段愈伤组织诱导、增殖及再生芽分化的适宜培养基,为其细胞工程育种及规模化生产提供支撑。     

樟叶越桔愈伤组织诱导及其细胞悬浮培养体系建立

以樟叶越桔组培苗幼嫩叶片为外植体,研究了植物生长调节剂对其愈伤组织诱导和增殖的影响,建立樟叶越桔的细胞悬浮培养体系。结果表明,樟叶越桔的愈伤组织诱导的适宜培养基为WPM+2.0mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA+2.0 mg/L 2,4-D+30%蔗糖。樟叶越桔愈伤组织增殖的最佳植物生长调节剂组合为2.0mg/L ZT+0.4mg/L NAA,得到的蓬松愈伤组织适宜进行其悬浮培养。WPM 3/5有机为适宜的改良培养基,通过细胞悬浮生长曲线的测定,确定樟叶越桔细胞悬浮培养较适宜的继代周期为14d,最长不宜超过21d。     

白玉兰离体培养和快速繁殖

试验建立了白玉兰离体繁殖体系。种子为外植体 ,初代培养基为 :B5 +BA0 .5mg/L +NAA0 .0 5mg/L + 30g/L糖 +琼脂 6g/L ,萌发率 85 %。继代培养基为 :B5 +BA1.5mg/L +NAA0 .15mg/L + 30g/glucose/sucrose + 6g/Lagar+Vco0 .5g/L ,月增殖率可达 5 .0± 0 .1。生根培养为 :1/2B5+NAA0 .5mg/L +AC1.0mg/L +VB2 0mg/L。以试管苗茎段、根段做外植体 ,培养基B5 +BA2mg/L+ 2 .4 -D0 .5mg/L +VC0 .5g/L ,可获得少量愈伤组织 ,继代存活率仅为 30 %。没有再分化成苗     

中华结缕草愈伤组织诱导和再生的影响因素研究

以中华结缕草成熟胚为外植体,研究预处理温度、时间以及不同碳源、氮源、pH值、琼脂浓度、培养温度、激素配比对中华结缕草成熟胚愈伤组织诱导及植株再生的影响。结果表明:成熟胚预处理使用30℃的30%NaOH处理60min可显著提高愈伤组织的诱导率。最佳诱导培养基为MS+酶水解酪蛋白500mg/L、蔗糖3%、葡萄糖2%、琼脂6.5/L,附加2,4-D2mg/L、6-BA0.1mg/L、VB11mg/L、VB21mg/L,灭菌前pH值调至6.0~6.1,最佳培养温度为25℃±2℃。最佳分化培养基为MS,附加6-BA0.3mg/L、NAA0.5mg/L、蔗糖3%、琼脂6.5g/L。     

中荷64杨组织培养快繁技术研究

以中荷64杨叶柄为外植体,通过对比试验确定中荷64杨组织快繁体系。结果表明:愈伤组织诱导与继代培养基为MS+6-BA 0.5 mg·L~(-1)+2,4-D 0.5 mg·L~(-1)+蔗糖20 g·L~(-1)+琼脂5 g·L~(-1);不定芽分化与继代培养基为MS+6-BA 0.1 mg·L~(-1)+NAA 0.02 mg·L~(-1)+蔗糖30 g·L~(-1)+琼脂5 g·L~(-1);生根培养基为1/2MS+IBA 0.2 mg·L~(-1)+蔗糖20 g·L~(-1)+琼脂5 g·L~(-1),将组培苗进行了移栽,成活率90%以上,为中荷64杨的推广和应用提供了保障。     

不同激素浓度配比对贯叶连翘茎段离体培养不定芽形成和生长的影响

为规模化工厂化快速繁殖贯叶连翘(Hypericum perforatum),满足国际市场日益增长的需求,保护贯叶连翘野生种质资源,用野生贯叶连翘嫩梢带节茎段诱导形成愈伤组织,将愈伤组织作为外植体,继代增殖;以MS(MuraShige and Skoog)为基本培养基,采用随机区组试验设计,3次重复。研究6-BA 3.0mg/L+2,4-D 2.0mg/L、6-BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L、6-BA 1.0mg/L+IBA 0.2mg/L对贯叶连翘嫩茎切段愈伤组织诱导形成不定芽数量和高生长的影响,结果显示:3种处理诱导形成不定芽数量、不定芽高生长处理间差异均达显著水平,其中:6-BA 3.0mg/L+2,4-D 2.0mg/L诱导愈伤组织形成不定芽数量最多,平均为6.971 7±3.463 8个,最高可达24个;6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5mg/L对促进不定芽高生长最有利,平均芽长3.333 3±0.738 2cm。     

油茶胚组织离体培养实验

采用油茶上胚轴、下胚轴和子叶作外植体进行油茶组织离体培养诱导愈伤组织发生和不定芽分化的实验.实验结果表明,0.2％的HgCl2消毒处理油茶种胚外植体10 min效果较好;油茶上胚轴、下胚轴和子叶组织在MS+2,4-D2mg/L+KT0.5 mg/L的培养基上,愈伤组织诱导率分别为95.0％、66.7％和30.0％;在MS+6- BA2.5 mg/L+ KT0.1 mg/L+ NAA0.5 mg/L培养基上,不定芽诱导率分别是66.7％、33.3％和11.1％;以MS+6- BA 2 mg/L+ NAA 0.2 mg/L继代培养,上胚轴、下胚轴和子叶所形成愈伤组织芽增殖系数40天时为5.8、5.6和5.3.