嗜酸乳杆菌抗氧化活性评价及其对小鼠单核巨噬细胞氧化应激的影响

本试验旨在评价嗜酸乳杆菌抗氧化活性及其对小鼠单核巨噬细胞(RAW 264.7细胞)氧化应激的影响。制备嗜酸乳杆菌培养物上清液、完整细胞和胞内提取物,比较其对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、羟自由基和亚油酸的清除能力。筛选抗氧化能力较强的嗜酸乳杆菌培养物上清液,设置4个剂量(5、25、50和125μL)分别作用于RAW 264.7细胞,对照组加入1 mL完全培养液,检测RAW 264.7细胞中一氧化氮(NO)含量、活性氧(ROS)水平以及超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,并进一步探究其对脂多糖(LPS)诱导的RAW 264.7细胞氧化应激的保护作用。结果表明:1)嗜酸乳杆菌培养物上清液的DPPH、羟自由基和亚油酸清除率均显著高于嗜酸乳杆菌培养物完整细胞和胞内提取物(P0.05)。2)将嗜酸乳杆菌培养物上清液作用于正常RAW 264.7细胞,与对照组相比,25、50和125μL嗜酸乳杆菌培养物上清液显著提高了RAW 264.7细胞的细胞活力(P0.05),125μL嗜酸乳杆菌培养物上清液显著提高了RAW 264.7细胞中NO含量(P0.05),25和50μL嗜酸乳杆菌培养物上清液显著提高了RAW 264.7细胞中SOD活性(P0.05),125μL嗜酸乳杆菌培养物上清液显著降低了RAW 264.7细胞中GSH-Px活性(P0.05)。3)将嗜酸乳杆菌培养物上清液作用于LPS诱导的RAW 264.7细胞,与LPS组相比,25、125μL嗜酸乳杆菌培养物上清液显著降低了LPS诱导的RAW 264.7细胞中NO含量(P0.05),25μL嗜酸乳杆菌培养物上清液显著提高了LPS诱导的RAW 264.7细胞中SOD和GSH-Px活性(P0.05)。综上所述,嗜酸乳杆菌培养物各组分均具有DPPH、羟自由基和亚油酸清除能力,作为其中抗氧化活性较好的嗜酸乳杆菌培养物上清液可调节LPS诱导引起的RAW 264.7细胞氧化应激。     

母乳乳清蛋白抗氧化活性肽的研究

母乳是婴幼儿的最佳食物来源,而乳清蛋白是营养和活性物质的基础,其中生物活性肽对人体健康具有重要促进作用.为研究母乳乳清蛋白抗氧化活性肽,采用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶4种酶制备抗氧化活性多肽,通过单因素试验和响应面分析对乳清蛋白酶解工艺进行优化.结果表明:中性蛋白酶最适于母乳乳清蛋白抗氧化肽的制备,此时的最佳工艺参数为pH 7.21、反应温度50.03℃、酶与底物比(E/S)4 486.68 U/g、酶解时间5h;影响1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率的因素大小为:酶与底物比＞温度＞pH值.利用大孔树脂、葡聚糖凝胶过滤色谱G-25、G-15分析得出组分峰Ⅰ抗氧化活性最强,其DPPH自由基清除率达到了60.31％.     

成骨生长肽对体外培养奶牛成骨细胞增殖分化的影响

体外培养奶牛成骨细胞,用10-12,10-11,10-10,10-9和10-8mol/L成骨生长肽干预5 d后,噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞增殖,紫外分光光度法检测细胞上清液中碱性磷酸酶(ALP)。结果显示:10-12~10-8mol/L的成骨生长肽均能促进成骨细胞的增殖,并且呈现剂量依赖方式,10-12mol/L试验组即可促进成骨细胞增殖,与对照组比较差异不显著(P>0.05),10-11~10-8mol/L试验组与对照组比较均有极显著差异(P<0.01),以10-10mol/L试验组差异最为显著;成骨生长肽对细胞上清液中ALP活性起抑制作用,其中在10-10mol/L时抑制作用最为显著(P<0.01)。结果表明成骨生长肽对体外培养奶牛成骨细胞增殖作用明显,对碱性磷酸酶起轻微抑制作用而且呈双向性。     

牦牛奶渣蛋白肽的提取及其抗氧化活性研究

以香格里拉牦牛奶渣为原料,经贯筋藤蛋白酶水解后,在单因素实验的基础上,利用响应面法优化提取牦牛奶渣蛋白肽的工艺条件,并研究牦牛奶渣蛋白肽的抗氧化活性。牦牛奶渣蛋白肽的提取工艺为:牦牛奶渣超微粉碎→加水溶解→超声波破碎→振荡水浴酶解→离心→取上清液→冷冻干燥;最佳酶解条件:时间70min、温度65℃、料液比1:110(g/mL)、酶的添加量为底物质量的12%;抗氧化活性:DPPH自由基清除能力(61.63±1.12)μg/g, ABTS自由基清除能力(195.13±1.83)μg/g,还原能力(108.6±0.49)μg/g。研究表明,牦牛奶渣蛋白肽具有一定的抗氧化功能,本研究为其应用于生物制剂、保健食品及医药品等相关产品的研发提供了科学依据。     

发酵牦牛乳蛋白肽的分离纯化及抗氧化活性研究

以牦牛乳为原料,从6株乳酸菌中筛选出对发酵牦牛乳具有较高水解度及肽得率的罗伊氏乳杆菌和约氏乳杆菌,并与保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌和发酵乳杆菌按1:1:1:1:1复配发酵剂制备牦牛乳蛋白肽。通过离心提取发酵牦牛乳蛋白肽,经超滤和Sephadex-25柱层分离纯化蛋白肽,并测定各分离组分的体外抗氧化活性。结果表明,发酵牦牛乳蛋白肽的Sephadex-25分离纯化的最优工艺条件为:洗脱液浓度0.2mol/L,上样质量浓度50mg/mL,洗脱流速2mL/min,在此条件下一共分离出峰1、峰2两个组分。随着蛋白肽各分离组分浓度的增加,其抗氧化活性显著增强,分离组分峰1、峰2对ABTS自由基清除率的IC_(50)为1.778mg/mL、3.844mg/mL,对DPPH自由基清除率的IC_(50)为1.801mg/mL、3.286mg/mL,还原能力IC_(50)为0.571mg/mL、1.365mg/mL,对羟自由基清除率的IC_(50)为0.913mg/mL、2.466mg/mL。     

蛹虫草抗氧化肽的发酵制备及对小鼠辐射氧化损伤的防护作用

抗氧化肽是蛹虫草的重要活性成分之一。以蚕蛹虫草子实体制备的纳米蛹虫草粉为基质,利用地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)E-30菌株进行液态发酵,在接种量为3%、碳氮比0.4、发酵基质质量浓度25 g/L的条件下,蛹虫草初级抗氧化肽的得率为6.4 g/L。体外试验检测该抗氧化肽在质量浓度为1 mg/m L时,对DPPH、·OH以及O-2的清除率分别为68.12%、79.40%和82.30%。辐射氧化损伤(60Co-γ照射总剂量8 Gy)模型小鼠按80 mg/(kg·d)的剂量灌胃蛹虫草抗氧化肽3 d后,小鼠血液中的白细胞、淋巴细胞含量均显著增加(P0.01);灌胃10 d后,小鼠血液中的白细胞、淋巴细胞含量趋于正常水平,超氧化物歧化酶活性上升,丙二醛含量降低。采用DEAE-52、Sephadex G-25对制备的蛹虫草抗氧化肽逐级纯化,得到的抗氧化肽单峰经质谱检测含有分子质量为2 237 D、3 372 D的2个组分,是富含芳香族氨基酸和碱性氨基酸的2个寡肽的混合物。研究结果提示,蛹虫草抗氧化肽对小鼠因辐射引起的血象变化及氧化损伤具有修复作用。     

玉米黄粉免疫活性肽的制备工艺

试验以玉米黄粉蛋白为原料,采用小鼠脾淋巴细胞增殖试验检测小鼠胃蛋白酶、胰蛋白酶、复合蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶等5种酶的免疫活性。结果表明,胰蛋白酶酶解物对小鼠脾淋巴细胞刺激显著(P0.05),小鼠脾淋巴细胞的增殖指数(SI)为1.679,可作为制备玉米黄粉免疫活性肽的最适水解酶。以加酶量(E/S)、p H和底物质量浓度作为研究对象,在单因素试验的基础上,采用正交试验进行4因素3水平分析,得到最佳酶解条件:加酶量2.0 g/L、pH 8.0、底物质量浓度80.0 g/L和酶解温度40℃;酶解90 min;在这个条件下,玉米黄粉免疫活性肽水解度可达12.50%。     

成骨生长肽对体外培养奶牛成骨细胞碱性磷酸酶和骨钙素的影响初探

体外培养奶牛成骨细胞,用10^-12mol／L、10^-11mol／L、10^-10mol／L、10^-9mol／L和10^-8mol／L成骨生长肽（OGP）干预5d后．紫外分光光度法检测细胞上清液中碱性磷酸酶（ALP）活性,以放射免疫法检测细胞上清液中骨钙素（OC）含量。结果显示：成骨生长肽对细胞上清液中ALP活性起抑制作用,其中在10^-10mol／L时抑制作用最为显著（P〈0．01）;对细胞上清液中OC亦起抑制作用,且该抑制呈现剂量双向性．在10^-10mol／L时抑制作用显著。结论：成骨生长肽对体外培养奶牛成骨细胞碱性磷酸酶和骨钙素起轻微抑制作用而且呈双向性。     

家蚕丝素蛋白抗氧化肽的制备及其稳定性研究

利用碱性蛋白酶水解家蚕丝素蛋白制备抗氧化肽,考察水解pH、水解时间、加酶量、底物浓度、水解温度5个因素对水解产物DPPH自由基清除率的影响,在此基础上采用响应面试验优化水解工艺条件,并调查家蚕丝素蛋白抗氧化肽对热、酸、碱和体外肠道消化的稳定性,测定不同分子质量范围的家蚕丝素蛋白水解产物组分的抗氧化活性.结果 表明,碱性蛋白酶水解制备家蚕丝素蛋白抗氧化肽的最优工艺条件为水解pH 8.69、水解时间60 min、加酶量3035 U/g、底物(丝素蛋白)质量浓度26.80 g/L、水解温度53.89℃,在此条件下制备获得的家蚕丝素蛋白抗氧化肽对DPPH自由基的清除率为55.16％.家蚕丝素蛋白抗氧化肽具有良好的热稳定性;在中性环境中抗氧化活性很稳定,但在强酸和强碱环境中抗氧化活性明显降低;经体外模拟胃肠道消化后,对DPPH自由基的清除率比未消化处理对照组提高了9.43百分点.分子质量小于5 kD组分是家蚕丝素蛋白抗氧化肽的主要活性组分.研究结果为家蚕丝素蛋白功能产品的开发提供了试验依据.     

蛹虫草多糖对四氯化碳诱导大鼠原代肝细胞损伤的保护作用研究

蛹虫草是一种药用真菌。从人工培养的蛹虫草中提取蛹虫草多糖(CMPS),采用Ⅳ型胶原酶灌流法分离大鼠肝细胞进行原代培养,研究蛹虫草多糖对CCl4诱导大鼠原代肝细胞损伤的保护作用。结果表明:蛹虫草的子实体和基质都含有丰富的多糖,其中基质中的多糖含量最高,约为子实体的2～4倍;CMPS可明显降低由CCl4诱导的损伤肝细胞培养上清液中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)的活性水平和丙二醛(MDA)的含量水平,显著提高由CCl4诱导的损伤肝细胞培养上清液中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和诱导损伤肝细胞的存活率。试验结果提示CMPS对大鼠原代培养肝细胞损伤有直接保护作用,该作用可能与其抗氧化作用有关。     

枯草芽孢杆菌对Caco-2细胞抗氧化功能的影响研究

本试验旨在研究枯草芽孢杆菌对氧化应激状态下Caco-2细胞抗氧化功能的影响。将Caco-2细胞分为4组,对照Ⅰ(空白对照组,0μmol/L H2O2)和对照Ⅱ(氧化应激组,100μmol/L H2O2),处理Ⅰ和处理Ⅱ分别在对照Ⅱ条件下添加枯草芽孢杆菌B1和B10(终浓度为0.3×108CFU/mL),分别于12、48h测定氧化应激状态下Caco-2细胞上清液和裂解液的抗氧化活性。结果表明:与空白对照组和氧化应激组相比,添加2株枯草芽孢杆菌均极显著提高了Caco-2细胞培养上清液12、48 h时的总抗氧化能力(P<0.01)。其中,菌株B1可显著提高上清液中抗超氧阴离子(O2-)(P<0.01)、超氧化物歧化酶(SOD)(P<0.01)和过氧化氢酶(CAT)(P<0.01)以及48h的过氧化物酶(POD)活性(P<0.01),而菌株B10除提高了Caco-2细胞上清液中抗O2-、SOD和CAT活性(P<0.01)外,还提高了细胞抑制羟自由基(.OH)能力(P<0.01)和POD活性(P<0.01或P<0.05);添加枯草芽孢杆菌组细胞上清液中12 h时的乳酸脱氢酶(LDH)活性和丙二醛(MDA)含量与氧化应激组相比差异不显著(P>0.05),48 h时则均极显著降低(P<0.01)。细胞培养12 h时,氧化应激组细胞裂解液中SOD活性和GSH含量比空白对照组低(P<0.05)而POD活性高(P<0.01),48h时结果与之相反,此时添加枯草芽孢杆菌组均极显著提高了细胞裂解液中POD的活性(P<0.01)。结果提示,2株枯草芽孢杆菌均提高了氧化应激状态下细胞的抗氧化功能。     

生物活性肽制备方去的研究进展

生物活性肽具有许多重要的生理功能,如抗氧化、抗菌、抗癌、降血压、提高人体免疫力等,因此对活性肽的制备、结构与功能的研究具有重要的理论与应用价值.本文综述了生物活性肽的多种制备方法,包括溶剂提取法、酶解法、微生物发酵法、膜法分离技术、固相合成法和重组DNA技术生物合成法,旨在为深入研究活性肽及药品、保健品的开发利用提供条...     

水牛乳β-酪蛋白基因多态性与消化性能及抗氧化性能的关联研究

本研究以水牛乳β-酪蛋白(β-CN)基因多态性分析结果为依据,从水牛乳中分离并纯化出具有活性的β-酪蛋白亚型.采用体外消化模型分析其在胃肠道中的消化性能;根据水解液的抗氧化活性来分析生物活性肽的释放.高效液相色谱法(HPLC)结果显示,水牛乳中β-CN有A和B两种等位基因.消化性能结果显示A等位基因更利于β-酪蛋白在肠...     

两种新合成生物活性肽对肉鸡生长性能和血清生化指标及抗氧化功能的影响

本试验研究2种新合成活性肽对肉鸡生长性能、血清生化指标及抗氧化功能的影响,旨在了解其生物活性。1 620只1日龄AA肉鸡随机分为9个处理组,分别为2种肽低、中、高(10、20、40μg/kg体重)剂量组、混合肽组、空白及杆菌肽锌对照组,每组设6个重复,每重复30只,试验期42 d。结果表明:20、40μg/kg体重肽I和肽Ⅱ可显著提高22~42日龄肉鸡平均日增重(P0.05),降低饲料增重比(P0.05);40μg/kg体重肽I和20、40μg/kg体重肽Ⅱ及混合肽(肽I和肽Ⅱ各10μg/kg体重)可显著提高42日龄肉鸡血清白蛋白含量(P0.05),20、40μg/kg体重肽I和40μg/kg体重肽Ⅱ可显著提高21日龄肉鸡血清碱性磷酸酶的活性(P0.05)。肽I、肽Ⅱ各组肉鸡血清超氧化物歧化酶活性显著提高(P0.05),21日龄血清丙二醛含量显著降低(P0.05)。20、40μg/kg体重肽I和肽Ⅱ可显著提高21日龄谷胱甘肽过氧化物酶活性(P0.05)。可见2种活性肽具有提高肉鸡生长性能和抗氧化功能的作用,对机体生理代谢亦有一定影响。     

发酵红三叶草对肉仔鸡公鸡生产性能的研究

<正>红三叶(red clover)为豆科多年生草本植物,属车轴草属(Trifolium L.),在我国新疆、吉林、云贵高原、北鄂西山地都有野生,江淮流域、华北、华南、西南等地均有栽培[1],主要含异黄酮、维生素、氨基酸、糖类等多种生物活性成分,其中异黄酮是红三叶草中特殊的活性成分[2]。异黄酮具有多种生理活性,概括起来主要有两个方面,即植物雌激素功能和抗氧化功能[3]。米曲霉固态发酵红三叶草培养物富含异黄酮、各     

金雀异黄酮对鸡骨骼肌卫星细胞脂质过氧化和抗氧化酶活性的影响

为了探明大豆异黄酮主要成分金雀异黄酮(GEN)对鸡骨骼肌卫星细胞的抗氧化保护效应,试验研究了GEN对离体培养的鸡骨骼肌卫星细胞脂质过氧化、抗氧化酶活性和基因表达的影响。试验采用岭南黄羽肉鸡骨骼肌卫星细胞接受不同浓度的GEN处理48h后,测定细胞培养上清液中谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性以及丙二醛含量,应用TaqMan实时荧光定量PCR法测定GEN对骨骼肌卫星细胞中谷胱甘肽过氧化物酶基因表达的影响。结果表明:与空白对照组相比,添加金雀异黄酮组骨骼肌卫星细胞培养上清液中丙二醛含量显著降低(P<0.05),添加1μmol/L和16μmol/L金雀异黄酮显著提高了鸡骨骼肌卫星细胞培养上清液中超氧化物歧化酶活性(P<0.05),添加4μmol/L和16μmol/L金雀异黄酮显著提高了谷胱甘肽过氧化物酶活性(P<0.05),细胞培养液中添加金雀异黄酮具有提高谷胱甘肽过氧化物酶mRNA拷贝数的趋势(P>0.05)。     

一株仔猪肠道益生菌抗TGEV作用初探

为了分离并筛选出1株抗传染性胃肠炎病毒(TGEV)的益生菌菌株,研究采用形态观察、生化反应和16S rRNA鉴定等试验,并运用TCID50和MTT比色方法,在PK-15细胞水平上分别检测益生菌活菌、灭活菌体、菌体碎片及培养上清液在不同作用时间上对TGEV感染力和抑制率的影响。结果表明:从健康仔猪肠道内容物分离、鉴定出1株益生菌,属于德氏乳杆菌德氏亚种(暂命名为L1菌株),此菌株的活菌、灭活菌体、菌体碎片及培养上清液均有降低TGEV感染力和活性的作用,其中活菌降低TGEV感染力及对TGEV的抑制效果最明显,灭活菌体和培养上清液次之,菌体碎片最差。     

浅谈蚕蛹生物活性肽的保健功效

蚕蛹是家蚕吐丝结茧的过渡形态,其中分离提取出的生物活性肽被认为具有很高的医疗保健价值,对蚕蛹生物活性肽保健功效的开发也逐渐成为现代生物医学研究的焦点。文章首先对蚕蛹的生物营养成分进行了归纳,其次重点探究了蚕蛹生物活性肽在降血压血脂、抗氧化疲劳及增强机体免疫力等方面的保健功效,最后对蚕蛹生物活性肽保健功能开发应用途径进行了展望。     

胡椒碱抑制金黄色葡萄球菌α溶血素的表达研究

为了测定胡椒碱对金黄色葡萄球菌USA300α溶血素(α-Hemolysin, Hla)溶血活性的抑制作用并初步阐明其机制,为胡椒碱治疗金黄色葡萄球菌感染提供依据,试验选择Hla为靶标,通过溶血活性试验测定不同浓度胡椒碱对金黄色葡萄球菌USA300共培养物上清液溶血活性的影响,通过最低抑菌浓度(MIC)试验及生长曲线试验考察胡椒碱对金黄色葡萄球菌生长的影响,通过免疫印迹分析试验初步阐明胡椒碱抑制金黄色葡萄球菌USA300溶血活性的机制,通过乳酸脱氢酶(LDH)试验考察胡椒碱对共培养物上清液介导的细胞损伤的抑制作用。结果表明:胡椒碱可显著降低金黄色葡萄球菌Hla的表达,抑制金黄色葡萄球菌USA300培养物上清液的溶血活性,不同浓度胡椒碱均不影响金黄色葡萄球菌USA300生长,且可保护A549细胞免于培养物上清液介导的细胞损伤。说明胡椒碱能够通过抑制Hla的表达而缓解培养物上清液介导的A549细胞损伤,可用于治疗金黄色葡萄球菌感染。     

家蝇蛹的营养成分分析及抗氧化肽制备工艺研究

研究着力于分析家蝇蛹的成分,探索比较家蝇蛹抗氧化肽的制备方法,考察酶解法制备抗氧化肽的工艺条件。实验用水提醇沉法(WAM)、热变性法(TDM)和酶解法(EHM)制备得到家蝇蛹抗氧化肽,检测了三种方法制备产物的得率、应用OPA法测得多肽的含量、聚丙烯酰胺凝胶电泳—银染法表征其分子量分布、比较抗氧化肽在五种体外抗氧化体系(ABTS自由基清除、DPPH自由基清除、羟基自由基清除、FRAP法测还原、亚铁离子螯合)中的抗氧化能力;最后通过单因素试验优化酶解法制备工艺。实验结果显示:水提醇沉法、热变性法和酶解法制备抗氧化肽的得率分别是(18.35±0.43)%、(25.11±0.49)%、(70.80±0.36)%;OPA法检测的多肽含量分别为(53.87±2.74)%、(43.33±1.07)%、(66.50±9.02)%;热变性法制备的抗氧化肽的自由基清除能力和还原能力均较强,酶解法制备抗氧化肽的亚铁离子螯合能力最优,而水提醇沉法的各项指标值均较低。单因素实验结果显示,最佳酶解条件为温度60℃、酶解时间30 min、加酶量6 000 U/g。以上结果提示,家蝇蛹营养成分丰富,酶解法和热变性法均能有效制得强抗氧化活性物质,具有开发成饲料或饲料添加剂的潜力。