拟南芥AtTTG1基因的克隆及用于转化花生的MAR调控表达载体构建

黄曲霉毒素污染对花生产业危害巨大,通过基因工程改变花生果种皮结构以提高花生抗黄曲霉能力。根据GenBank中拟南芥AtTTG1基因的cDNA编码区设计引物,通过RT-PCR克隆AtTTG1基因,结果显示,克隆获得的片段长1026bp,与基因库中数据比对相同,该片段编码341个氨基酸,预测其蛋白分子量为86.96KDa,等电点为4.85。结合实验室已获得的花生果种皮特异启动子S19和MAR序列调控的植物表达载体pLMAR,构建了植物高效表达载体pLMAR-S19-TTG1,并将其导入根癌农杆菌EHA105。为进一步对花生进行遗传转化,获得转基因高抗黄曲霉花生奠定基础。     

花生Δ12脂肪酸脱氢酶基因FAD2的克隆及反义表达载体的构建

从花生的幼嫩叶片中提取总DNA,应用PCR方法分离到了两个FAD2基因片段,分别命名为FAD2-1和FAD2-2,将反向的FAD2-1和FAD2-2片段分别与所克隆的大豆油体蛋白基因启动子片段oleosin-a与oleosin-b相连,在中间表达载体pSPROK中构建了三个带T-nos的融合基因,进而把融合基因构建到植物表达载体pCAMBIA1300中,酶切鉴定后进行测序,结果表明,所构建的三个植物表达载体均分别带有Oleosin启动子和反义FAD2基因序列,FAD2-2的长度为593bps,与引用序列的同源性达到97%,包含一个起始密码子;FAD2-1的长度为1175bp,与引用序列的同源性达到99%,包含一个起始密码子与一个终止密码子。将构建好的植物表达载体已经转化农杆菌LBA4404并用于侵染花生外植体。     

花生球蛋白基因片段的克隆

为克隆花生贮藏蛋白基因建立了花生未成熟种子的cDNA文库。根据大豆贮藏蛋白的保守区设计特异引物，从花生cDNA文库中扩增出450bp的特异性产物。经过测序分析表明与大豆球蛋白各亚基基因的同源性均达90％以上，说明已得到花生球蛋白基因的cDNA片段。该片段可以作为探针从cDNA文库中筛选花生球蛋白基因的cDNA全序列。     

花生△12脂肪酸脱氢酶基因FAD2的克隆及反义表达载体的构建

从花生的幼嫩叶片中提取总DNA，应用PCR方法分离到了两个FAD2基因片段，分另4命名为FAD2-1和FA192-2，将反向的FAD2-1和FAD2-2片段分别与所克隆的大豆油体蛋白基因启动子片段oleosin-a与oleosin-b相连，在中间表达载体pSPROK中构建了三个带T-nos的融合基因，进而把融合基因构建到植物表达载体pCAMBIA1300中，酶切鉴定后进行测序，结果表明，所构建的三个植物表达载体均分别带有Oleosin启动子和反义FAD2基因序列，FAD2-2的长度为593bps，与引用序列的同源性达到97％，包含一个起始密码子；FAD2—1的长度为1175bp，与引用序列的同源性达到99％，包含一个起始密码子与一个终止密码子。将构建好的植物表达载体已经转化农杆菌LBA4404并用于侵染花生外植体。     

光叶花生两个重要基因片段的克隆和序列测定

从不亲和野生花生Arachis glabrata Benth中提取DNA，在多重序列比对的基础上设计PCR引物，成功扩增出约350、750bp的两个片段，与DES和RS基因片段预期分子量相符。PCR产物与T栽体连接，转化受体菌XL1-Blue，获得了白色菌落，挑取白色菌落在液体培养基中过夜培养，经TTE溶液和热处理后进行PCR扩增，获得了载有目的基因片段的阳性重组子，测序和序列比对分子的结果说明，DES和RS基因片段克隆成功。这是首次从不亲和野生花生A.glabrata Benth中克隆出的基因片段，该片段可用作探针克隆相关基因全编码区。     

花生区组间杂种未成熟籽仁cDNA PCR库的构建与初步筛选

从不亲和野生花生Arachis glabrata Benth与栽培种种间杂种中提取mRNA,反转录成cDNA双链并连接上接头,用接头上的引物进行PCR高保真扩增,成功建立了花生cDNA PCR库.用光敏生物素标记的探针与链亲和素包被的磁珠进行杂交筛库,与探针杂交的片段经洗脱、高保真扩增并加A后与T载体连接,转化受体菌XL1-Blue,获得白色阳性克隆菌落.用PCR快速鉴定的方法进行阳性菌落筛选,得到目的阳性克隆后测序,将可得到cDNA全编码区序列.本研究为改良花生品质与抗性奠定了基础.     

玉米淀粉分支酶基因的克隆和反义载体的构建

应用聚合酶链式反应技术(PCR)扩增了玉米淀粉分支酶的cDNA基因片段,并将其克隆到pMD18-Tvector载体上,对重组子进行PCR检测和限制性内切酶分析,并测定了DNA全序列.结果表明:克隆片段全长为1 698 bp.将该基因反向插入到pCAMBIA1301的CaMV35S启动子之后,构建了反义表达载体.     

花生FAD2-RNAi载体基因AFLP标记的克隆及序列分析

以花生高油酸品种Sunolic95R和低油酸品种汕油162杂交组合的F1为试验材料,采用AFLP分子标记,用 100 对AFLP引物筛选出20个与△12-脂肪酸脱氢酶-RNAi载体基因遗传连锁距离为3. 87～8.91cm的差异片段,并回收纯化、克隆测序及NCBI上进行序列比对,最终获得了5个FAD2-RNAi载体基因的全序列(长度为589～763bp),通过分析得出:所获得的5个FAD2-RNAi载体基因的遗传连锁距离为3.87～6.59cm,序列间同源性达到88%～97%,与GenBank中已知的FAD2-RNAi载体基因序列相似性均达到85%以上,分别包含一个起始密码子与一个终止密码子,结果表明本试验采用AFLP技术获得的5个序列均为△12-脂肪酸脱氢酶-RNAi载体基因.     

花生白藜芦醇研究进展

在花生体内,白藜芦醇合成酶是白藜芦醇生物合成途径中的关键酶之一,也是最主要的限速酶。将花生或葡萄中的白藜芦醇合成酶基因转化到其它植物中,可以有效提高植物的抗病性。本文简要介绍了白藜芦醇一般特性,对花生中白藜芦醇的分布、诱导因素作了相关介绍,并阐述了白藜芦醇在植物体内的生物合成途径及白藜芦醇合成酶基因的克隆、诱导表达及转化。     

花生CpTI基因转化——花粉介导法

利用花粉作为外源基因的载体将抗虫基因(CpTI基因)转入花生中。以花生仲恺01号为受体,以PCB302-3质粒外源基因为供体。在花生开花期,收集花粉与质粒DNA混合并附加超声波处理,然后以人工授粉的方法将外源基因导入受体中。利用花粉作为载体介导外源基因转化,避免了传统的基因枪法和农杆菌转化所要求的组织培养技术,转化方法简单、易操作,具有很强的实用性。     

花生野生种及其在花生抗病中的利用

花生是世界上重要的油料作物之一。与栽培种相比,花生野生种具有较高的遗传多样性,能够适应一系列复杂环境,是抵抗生物胁迫和非生物胁迫的重要基因来源。多项研究表明,花生野生种对根结线虫病、晚斑病和锈病具有较高抗性。本文综述了野生花生的种类以及花生栽培种起源种相关研究进展,总结了野生花生对花生病害的抗性以及在育种中应用。结合花生基因组学最新研究,展望了花生野生资源的利用前景。     

论我国花生品种改良与花生生产的发展

论述了我国花生品种改良的主要成就及存在问题,阐述了品种改良对花生生产的影响,提出了今后花生品种改良及花生生产发展的对策。     

花生感染条纹病毒(PStV)后叶片细胞超微结构研究

花生接种PStV后30d取叶片进行超薄切片置于电镜下观察,在花37和白沙1016两个品种发病叶片的叶肉细胞中均发现有多种形状的内含体和病毒粒子的存在;内含体多发现于细胞核周围,有风轮状、柬状、管状和环状等;病毒粒子以柬状或拟晶格状存在,且以高感品种白沙1016叶肉细胞内的含量较多。PStV对叶绿体和线粒体等细胞器的结构有破坏作用,表现为叶绿体畸形,类囊体片层减少,基粒缩小且排列不整齐,并有大量淀粉粒累积,部分线粒体出现肥大和自溶。此外,感病细胞的膜系统松弛,有膜溶解现象,上述病理结构变化均以高感品种白沙1016表现的更为明显。     

花生高产群体特征研究

大田条件下，研究了产量为9225kg／hm2高产花生群体特征，结果为：(1)花生LAI符合Y=0．2354—0．0489x 0．003x-0．00002X3。LAl峰值出现在7月下旬～8月上旬，峰值期LAI在5以上。3以上LAI维持60d，4以上LAI维持40d。(2)全生育期LAD为331．7m2／d／m2，其中产量形成期LAD为263．5m2／d／m2，占全生育期的79．4％。(3)LIR在幼苗期一般不超过50％。结荚期前后是光截获的高峰期，LIP在90％以上。(4)群体和荚果干物质积累符合Logistic方程，y群体=1600／(1 247．8937e^-0.0857x)，y荚果=920／(1 456343．0006e^-0.1545x)；群体干物质积累高峰出现在出苗后64d，最高速率为35．5g／m2／d，荚果干物质积累高峰出现在出苗后84d，最高速率为35．5g／m2／d。     

高产花生理想株型的研究

粮食安全是涉及国家稳定和发展的重大战略问题。花生作为重要的油料作物,对解决我国油料供应矛盾具有重要作用。近年来,我国花生产业得到稳步提高,花生育种工作也得到了长足发展,但以目前花生生产状况而言,若要进一步发挥花生生产潜力、提高花生产量,须要借鉴小麦、水稻和玉米三大作物的理想株型研究。本文以花生往年高产创建的株型等相关参数,提出了花生高产理想株型以期指导花生育种工作和花生高产攻关,进一步促进我国花生高产。     

吉林地区花生叶部病害的消长规律及不同花生品种(系)的抗病性评价

本研究以30个花生品种(系)为试验材料,探究了花生叶部病害的消长规律及不同花生品种(系)的抗病性.从2020年8月初至9月中上旬收获,每隔7d调查一次,采用双对角线的5点法进行取样调查,共计调查6次,计算病情指数及相对抗病指数.通过调查可知:褐斑病发病最早,在8月初即有病斑发生;黑斑病发病最晚,8月末才零星发生.通过对...     

花生生产技术规程

本规程规定了花生生产的产地环境、管理措施、病虫害防治、收获及贮藏，适用于广州市地区花生的生产。     

阿根廷花生科技考察报告

阿根廷位于南美洲东南部，年均种植花生约240hm^2，单产1551kg/hm^2，总产380kt，出口250kt，居世界第三位，是主要的花生输出国，花生主要分布在科尔多瓦省，占全国总种植面积的96.3%，主栽品种为1～3个佛罗兰娜型小果，匍匐型花生，O/L比值为1.4～1.5，于11月上旬机械播种，来年4月上旬机械收获。肥料以牲畜粪便和作物秸杆还田为主，不喷施农药，属于无公害有机农业生产，花生农场主，加工厂和外贸出口实现了生产，加工和销售一体化，其花生制品在国际市场上有较强的竞争力。     

花生出口形势分析

中国是世界最大花生出口国,在国际市场上具有举足轻重的地位,与其他出口国家比较,具有出口品种多样,产品结构合理,产品深加工能力强,出口价格竞争力较强等特点。本文概括了主要花生出口国的出口特点和主要进口国的市场特点,对中国花生出口提出四点建议。     

花生种子老化过程中的生理生化变化及对田间性状的影响

研究了花生种子人工老化与自然老化过程中的生理生化变化。结果表明，随着老化程度的加深，种子的各项发芽指标逐渐降低，电导率逐渐升高，种子老化后其出苗率降低，出苗速度缓慢，幼苗的健壮度降低，根系数量体积减少，根干重降低，各生育期相差2～5d，总生育期差别不大。