高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒对4月龄莱芜黑猪的致病性分析

本试验旨在探讨高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)对地方品种猪的致病特点。将HP-PRRSV经滴鼻感染4月龄健康莱芜黑猪,观察接毒后的表现,于接毒不同时期颈静脉采血,ELISA试剂盒(IDEXX)检测外周血血清抗体水平的动态变化,定期剖杀,采集相关的器官组织制备组织切片,HE染色,观察不同组织的动态病理学变化,免疫组化染色检测病原在不同组织中的分布。结果表明,攻毒后第2天便出现一定的临床症状,但持续2d后症状就基本消失,感染猪未见死亡。攻毒后5d便可检测到抗体阳性(1/7),14d抗体达峰值。攻毒后3d便可见间质性肺炎,轻微的病毒性脑炎,实质器官颗粒变性;攻毒后7d出现典型的间质性肺炎、淋巴组织坏死、各段肠管大量嗜酸性粒细胞浸润及实质器官出现空泡变性。在攻毒后2～4周内,肺一直表现典型的间质性肺炎,病毒性脑炎逐渐加重,肾上腺变性坏死,胰腺轻微的炎性细胞浸润,甲状腺轻微充血、出血,实质器官出现严重的空泡变性。PRRSV抗原阳性信号出现在淋巴组织(淋巴结、脾、扁桃体)、气管、心、肝、肺、肾、胃、十二指肠、空肠、回肠、甲状腺、肾上腺、颌下腺、子宫、大脑及小脑内;盲肠、结肠、直肠、膀胱、胰腺、输卵管及卵巢均未见到阳性信号。阳性信号主要位于感染细胞的胞质中,偶尔出现在核内。试验结果表明:HP-PRRSV人工感染4月龄莱芜黑猪具有广泛的组织嗜性,并导致广泛的组织损伤,但临床症状表现轻微,未见死亡现象,4月龄莱芜黑猪对HP-PRRSV感染具有较强的抵抗力。试验结果为进一步研究HP-PRRSV对我国地方猪与外源品种猪的致病性差异提供了一定的理论依据。     

非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A羧基端蛋白的真核表达及在猪繁殖与呼吸综合征病毒感染Marc-145细胞中的作用

前期研究结果证明抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5蛋白的抗独特型抗体特异性结合Marc-145细胞上的非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A(Nonmuscle myosin heavy chainⅡ-A,NMHCⅡ-A)蛋白,其结合位点位于NMHCⅡ-A的羧基端。本研究通过真核表达NMHCⅡ-A的羧基端(PRA)蛋白,验证其对PRRSV感染Marc-145细胞的作用。通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达PRA蛋白。Western blot和间接免疫荧光鉴定PRA蛋白的表达及其与Marc-145细胞的结合。通过病毒中和试验、荧光聚焦中和试验和荧光定量PCR检测PRA蛋白对PRRSV感染Marc-145细胞的作用。Western blot和间接免疫荧光结果表明,PRA蛋白在真核细胞中得到成功表达,其最高表达量为接种1个MOI杆状病毒后96h时。PRA蛋白特异性结合Marc-145细胞,使PRRSV感染Marc-145细胞延迟24h并且感染效率降低60%。真核表达的NMHCⅡ-A羧基端蛋白能特异性结合Marc-145细胞并有效降低PRRSV的感染。这些结果为进一步阐明NMHCⅡ-A在PRRSV感染细胞过程中的作用提供了新的依据。     

猪NMMHC-ⅡA基因功能区的克隆及表达特征分析

为了解NMMHC-ⅡA是否与不同品种猪对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的抗性差异有关,本研究克隆了对PRRSV易感的三元杂交猪(杜大长)、抗PRRSV的我国优良地方品种莱芜猪和大蒲莲猪NMMHC-ⅡA基因中含PRRSV结合区(23个氨基酸)在内的羧基端954 bp的cDNA序列,并分析了其在物种间的同源性和在不同品种间的差别,通过RT-PCR法检测了该基因在猪体内的表达特征.结果表明,NMMHC-ⅡA的cDNA序列在哺乳动物中的保守性较高,猪与人、大鼠、小鼠、牛、猴、狗等物种的核苷酸及氨基酸序列同源性均较高；莱芜猪、大蒲莲猪及杜大长杂交猪NMMHC-ⅡA蛋白羧基端的氨基酸序列完全相同,而NMMHC-ⅡA基因的核苷酸序列有3处不同.猪NMMHC-ⅡA基因在猪肝脏、肾脏、脾脏、肺脏、淋巴结、扁桃体、大肠、小肠、胃和肌肉中均有明显的表达,而在心脏和大脑中有弱表达,在小脑及子宫中几乎检测不到其表达.结果显示,对蓝耳病呈现不同抗性的杜大长杂交猪和莱芜猪、大蒲莲猪NMMHC-ⅡA基因的功能区没有区别,该基因在除小脑和子宫外的多种组织中均表达,NMMHC-ⅡA与猪抗蓝耳病的关系需进一步研究.     

非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A羧基端在PRRSV感染Marc-145细胞中的作用

为研究非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A(NMHCⅡ-A)羧基端在猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染Marc-145细胞中的作用,本实验通过提取Marc-145细胞总RNA,RT-PCR方法扩增NMHCⅡ-A羧基端930 bp基因PRA,并进行核苷酸序列测定。将该基因连接到pEGFP-N1载体中,采用双酶切和PCR方法对重组质粒pEGFP-N1-PRA进行鉴定。将pEGFP-N1-PRA转染至Marc-145细胞后感染PRRSV,测定TCID50值及间接免疫荧光(IFA)检测PRA对PRRSV感染Marc-145细胞的影响。TCID50及IFA结果显示,与未转染的Marc-145细胞相比,转染pEGFP-N1-PRA的Marc-145细胞的PRRSV感染能力降低50%。本研究初步证明了PRA编码蛋白在PRRSV感染细胞中的作用,为PRRSV感染机制的研究提供了一定的依据。     

miR-let-7基因家族在金华猪和长白猪中的组织表达分析

mi R-let-7基因广泛参与动物组织器官的发育调控,其表达具有组织特异性。本研究选用70 d的金华猪和长白猪公猪(各3头),采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测了let-7基因家族6个成员(let-7a、let-7c、let-7d-3p、let-7e、let-7f、let-7g)在心脏、肝、脾、肺、肾、小肠中的表达量,分析它们在组织间及品种间的表达差异,重点分析了在小肠中的表达差异。结果表明:let-7基因家族在长白猪肝组织中表达量显著高于其他组织(P0.05),在金华猪小肠和心脏中显著高于其他组织(P0.05);在小肠中,金华猪let-7a和let-7c基因表达量极显著高于其他成员(P0.01),长白猪let-7a基因表达量极显著高于其他成员(P0.01),let-7在小肠的表达存在品种间差异,金华猪的let-7a和let-7d-3p基因表达量极显著高于长白猪(P0.01),let-7c基因显著高于长白猪(P0.05),而let-7e基因却显著低于长白猪(P0.05)。本研究结果为探究mi R-let-7基因在金华猪和长白猪生长和脂肪形成方面的分子作用机制提供了参考。     

确山黑猪种质资源的亲缘关系研究

基于线粒体DNA的D-loop区段的多态性,通过与主流商业猪种杜洛克猪、长白猪、大白猪,以及邻近地区的淮南黑猪、南阳黑猪、豫西黑猪、二花脸猪、莱芜猪相比较,探讨确山黑猪现存38头公猪个体的亲缘关系。结果表明,与参考序列(NC_000845.1NCBI)相比,确山公猪存在17个单核苷酸位点变异,转换数(si)与颠换数(sv)的比值(R)为10,碱基替换尚未饱和。确山黑猪共有9种单倍型,聚为7个分支,其中,Hap 1为优势单倍型,存在于21个个体中。同时,提示确山黑猪品种内存在母系血缘分离,但与临近地区猪种相比,则相对集中。河南地方猪种南阳黑猪与Hap1相同。河南地方猪种淮南黑猪及豫西黑猪和Hap4相同。确山黑猪关系整体与中国地方猪较近,与西方商业猪种关系较远。相对于莱芜黑猪,确山黑猪与二花脸关系稍近;相对于杜洛克猪和长白猪,确山黑猪与大白猪关系稍近。     

南阳黑猪与长白猪肉品质的差异性研究

为了研究南阳黑猪与长白猪肉品质的品种间差异,试验选择28日龄断奶南阳黑猪与长白猪各18头,按品种分为2组,每组设3个重复,每个重复6头猪(公母各半),进行为期180 d的饲养试验,经屠宰后测定两品种猪肉品质的差异。结果表明:南阳黑猪背最长肌L*值、b*值、胴体瘦肉率、眼肌面积、滴水损失均显著低于长白猪(P0.05),熟肉剪切力极显著低于长白猪(P0.01);a*值、肉色评分、大理石纹评分、胴体脂肪率、肌内脂肪含量均显著高于长白猪(P0.05);pH1值、pH24值二者之间差异不显著(P0.05)。说明南阳黑猪肉品质优于长白猪。     

基于RNAscope~?原位杂交技术对PRRSV感染组织样本的检测分析

为扩大RNAscope~?原位杂交技术(RNAscope~?ISH)在猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基础研究中的应用范围,本研究将该技术与免疫组织化学技术(IHC)相结合,通过条件优化建立了RNAscope~?ISH-IHC双重染色技术。经检测不同病毒感染的组织切片中的PRRSV表明该技术具有良好的特异性。采用该双重染色技术检测PRRSV感染的猪淋巴结组织切片中巨噬细胞感染PRRSV情况,结果显示PRRSV核酸主要存在于巨噬细胞胞浆中,在胞核中也有分布,但在一些非巨噬细胞中也散在PRRSV阳性信号,表明PRRSV不仅在猪淋巴结巨噬细胞中复制。利用该双重染色技术检测PRRSV感染后不同时间点猪胸腺组织切片中凋亡相关调节基因Bid、Bcl-xl表达水平,结果显示一段时间内Bid基因转录水平上调、Bcl-xl基因转录水平下调,与同条件下荧光定量PCR结果一致。综上,本研究建立的RNAscope~?ISH-IHC双重染色技术结合了RNAscope~?ISH与IHC各自的优势,不仅能够检测病毒感染后在组织中的定位,还可以分析病毒感染后宿主内源性基因转录的变化趋势,实现了在同一组织切片中对核酸与蛋白的双重检测。经验证该检测方法适用于PRRSV实验室研究,为PRRSV的相关基础研究提供新的检测手段。     

汉沽黑猪和北京黑猪肌肉组织学特性的研究

用冰冻切片测定了汉沽黑猪和北京黑猪背最长肌单位面积内肌纤维所占比例、单根肌纤维横截面积和肌纤维密度,并与大约克夏猪和长白猪做对照。结果：单根肌纤维横截面积,北京黑猪小于长白猪和大约克夏猪（Ｐ＞００５）;汉沽黑猪接近于长白猪和大约克夏猪;肌纤维密度北京黑猪大于长白猪和大约主克夏猪（Ｐ＜００５）,汉沽黑猪小于大约克夏猪而与长白猪相近;单位面积内肌纤维所占比例从大到小依次为长白猪、大约克夏猪、汉沽黑猪和北京黑猪。用剪纸称量法测定了它们肌肉肌纤维、结缔组织和脂肪组织所占面积比。结果表明：肌肉结缔组织所占面积比,汉沽黑猪明显小于大约克夏猪和长白猪,北京黑猪小于大约克夏猪和长白猪;肌纤维所占面积比汉沽黑猪明显大于大约克夏猪（Ｐ＜００１）和长白猪（Ｐ＜００５）,北京黑猪大于大约克夏猪和长白猪（Ｐ＞００５）;肌肉脂肪组织所占面积比四个猪种间结果相近。     

山东猪种mtDNA D-loop区部分序列遗传多样性及系统进化研究

为了解山东省猪种的遗传资源状况,阐明猪种间的亲缘关系,对山东省猪种(莱芜黑猪、大蒲莲黑猪、里岔黑猪、烟台黑猪、沂蒙黑猪、五莲黑猪、昌潍白猪和鲁烟白猪)及引进猪种(杜洛克、大约克和长白猪)共165个样本的mtDNA D-loop区部分序列(1 102 bp)进行PCR扩增和序列测定,并采用现代生物信息学软件进行了数据处理分析,结果表明:山东各猪种之间遗传距离较小(0.000 5～0.004 6),远小于国外猪种杜洛克、长白与山东各猪种间的遗传距离(>0.14),但大约克与山东各猪种的平均遗传距离较小(0.005).构建的NJ分子系统进化树将所测样本分为2个独立的支系,第一支由山东各猪种和部分大约克构成,另一支全部为引进猪种.莱芜黑猪和大蒲莲黑猪在NJ系统树上分布集中,各自聚为一小类,其它6个猪种都很分散,说明莱茺黑猪和大蒲莲黑猪母源血统单一,其它6个猪种母源血统遗传复杂,彼此之间基因交流多.     

PRRSV感染致断奶仔猪肺脏和外周免疫器官的病理损伤

用PRRSV ATCC VR-2332株感染8头28日龄仔猪,同时设立2头健康对照猪.PRRSV单独感染猪分别于感染后7,17,25 d各剖杀2,3,3头,对照组于17,25 d各剖杀1头.剖杀后采集脾脏、肺脏和全身主要淋巴结(颌下淋巴结、肺门淋巴结、腹股沟淋巴结和肠系膜淋巴结)等免疫器官,用甲醛溶液固定,组织石蜡切片以观察显微病理变化.试验组猪的抗体和抗原检测结果均表明,感染后7 d血清PRRSV抗体和免疫器官组织PRRSV抗原部分呈阳性;剖检和石蜡切片结果均显示,试验猪于攻毒后,随着病程的发展,发生了不同程度的间质性肺炎及相应的显微病变,PRRSV单独感染能引起免疫器官以淋巴细胞及巨噬细胞变性坏死为特征的急性炎症变化,造成免疫损伤,进而引起免疫抑制.     

金华猪和长白猪背最长肌不同肌纤维类型表达差异

为揭示国内外猪种肌纤维组成差异及其对肉质的影响,本实验以肉质优良的地方品种金华猪和肉质欠佳的外来良种长白猪为研究对象,在比较了180 d两猪种胴体性能及肉质差异的基础上,利用荧光定量PCR方法探讨了两猪种背最长肌4种肌球蛋白重链(MyHC)亚型基因(Ⅰ、ⅡA、ⅡX、ⅡB)mR NA表达量在30、90、150、180 d的差异。结果表明:180 d金华猪活体重、瘦肉率、眼肌面积、滴水损失极显著低于长白猪(P<0.01);背膘厚、肌内脂肪含量极显著高于长白猪(P<0.01)。金华猪背最长肌中含有更多的氧化型肌纤维,特别是Ⅰ型肌纤维,酵解型肌纤维特别是ⅡB型肌纤维含量极显著地低于长白猪(P<0.01)。本研究初步揭示了两猪种在生长发育过程中肌纤维组成的品种差异,为进一步通过营养调控肌纤维类型及组成,进而改善肉质提供基础数据。     

不同猪种ADIPOQ基因外显子2多态性及其与山西白猪体重和体尺性状的关联分析

本研究旨在检测猪脂联素(adiponectin,ADIPOQ)基因外显子2的多态性,并分析其对山西白猪体重和体尺性状的影响。采用PCR-SSCP技术检测了长白猪、大白猪、杜洛克猪、山西白猪、山西黑猪和马身猪6个猪种392个个体ADIPOQ基因外显子2的多态性,并采用GLM程序分析了ADIPOQ基因外显子2多态性与山西白猪体重和体尺性状的关联性。结果显示,在ADIPOQ基因外显子2的89bp处检测到G→A错义突变,引起缬氨酸(Val)向异亮氨酸(Ile)的转变。ADIPOQ基因外显子2存在3种基因型:AA、AB、BB,2个等位基因:A和B。杜洛克猪中只有BB基因型,长白猪、大白猪、山西白猪和山西黑猪中BB基因型为优势基因型,马身猪中AA基因型频率最高。在引入品种长白猪、大白猪和杜洛克猪中B等位基因为优势等位基因,基因频率分别为0.96、0.96和1.00;在地方品种马身猪中A等位基因频率(0.52)略高于B等位基因(0.48);在培育品种山西白猪和山西黑猪中B等位基因频率分别为0.76和0.78,介于引入猪种和地方品种之间。基因型频率分布在马身猪、山西白猪和山西黑猪之间无显著差异(P0.05),杜洛克猪与长白猪、大白猪间差异均不显著(P0.05),而长白猪和大白猪间差异显著(P0.05),任意一个引入品种与马身猪、山西白猪和山西黑猪之间的差异均达到极显著水平(P0.01)。ADIPOQ基因外显子2多态性对断奶重有显著影响,其中BB基因型个体28日龄断奶重显著高于AA和AB基因型(P0.05),AA和AB基因型间无显著差异(P0.05),但对其他性状无显著影响,说明该位点只在个体发育早期阶段起作用。     

Ⅱ型PCV和PRRSV单独与共同感染未吃初乳猪病例人工复制

3周龄剖腹产不吃初乳(CD／CD)猪分别感染Ⅱ型猪圆环病毒(PCV—2)，猪繁殖—呼吸综合征病毒(PRRSV)，PCV—2和PRRSV共同感染，比较这些病毒的单独或联合作用。并于接种后不同日龄及猪濒死时剖检。接种后第10天(10DPI)，PCV—2和PRRSV共同感染猪出现严重的呼吸困难、昏迷，偶尔出现黄疽，10DPI后，91％死亡，20DPI时，全部死亡。PCV—2单独感染猪出现昏迷，散发性黄疽，42％出现渗出性皮炎，死亡率26％。PRRSV感染猪出现呼吸困难和昏迷，至28DPI时恢复。PCV—2感染猪和PCV—2／PRRSV共同感染猪皆出现与断奶后仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)相同的组织病变。PCV—2／PRRSV共同感染猪亦出现严重的增生性间质肺炎和更相似的肝病变，出现极大量的含有PCV—2抗原的细胞。PRRSV感染猪出现中等程度的增生性间质肺炎，但未出现支气管或肝病变以及淋巴组织萎缩。研究结果表明：①PCV—2共感染能加重PRRSV对CD／CD猪引起的间质性肺炎的严重程度；②是PCV—2而不是PRRSV引起PMWS的淋巴组织萎缩，肉芽肿性炎症，坏死性肝炎等特征病变。     

THBS3基因在长白猪和通城猪不同组织和不同时期骨骼肌中的表达分析

本研究主要探究血小板反应蛋白3 (thrombospondin-3,THBS3)基因在不同组织及不同时期骨骼肌生长发育过程中的表达规律。利用实时荧光定量PCR方法对THBS3基因在长白猪和通城猪中的组织表达谱,以及在胚胎期(33、45、65、70和90 d)和出生后阶段(0、9、30、60、120和160 d)骨骼肌中的差异表达进行了比较分析。结果表明,THBS3基因广泛表达于长白猪和通城猪各个组织器官,除胃和肠中的表达存在差异外,其在两个猪种中的组织表达谱基本一致,在肺脏中表达量最高。THBS3基因在长白猪和通城猪胚胎期骨骼肌中的表达水平均显著高于出生后阶段(P<0.05),但胚胎期骨骼肌中的表达模式在两个猪种间存在一定差异,THBS3基因表达峰值出现在长白猪胚胎期45 d,而其在通城猪中表达峰值出现在胚胎期65 d。结果提示,THBS3基因参与了猪骨骼肌生长发育过程及不同类型猪种骨骼肌生长发育异步性的调控。     

长白猪、北京黑猪及东北民猪脂肪酸及氨基酸组成

本文测定了长白猪、北京黑猪及东北民猪背最长肌脂肪酸及氨基酸的组成。结果表明：１，长白猪总饱和脂肪酸含量显著高于北京黑猪（Ｐ＜０．０５）及民猪（Ｐ＜０．０５），北京黑猪显著高于民猪（Ｐ＜０．０５）；民猪的总不论和脂肪酸含量显著高于长白猪（Ｐ＜０．０５），与北京黑猪差异不显著（Ｐ＞０．０５）；不同性别猪各脂肪酸含量差异不显著，２，３个猪种中１５种氨基酸及衍生物含量有显著差异（Ｐ＜０．０５）。民猪和北京黑猪赖氨酸的含量显著高于长白猪，北京黑猪苏氨酸含量低于长白猪（Ｐ＜０．０５）。不同性别个体间游离氨基酸组成除丝氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸外，没有显著差异（Ｐ＞０．０５）。     

猪宰后肌肉SOD与MDA的变化及其对肉质特性的影响

以莱芜猪(24头)、鲁莱黑猪(24头)和大约克夏猪(12头)共60头去势公猪为试验对象,研究宰后肌肉SOD活性与MDA含量的变化及其对肉质特性的影响。结果表明:①猪宰后肌肉随贮存时间的延长,肌肉SOD活性逐渐下降,MDA含量则逐渐上升;不同品种猪间的SOD活性和MDA含量,除MDA5 d差异不显著外(P0.05),其余均具有极显著的差异(P0.01),并且SOD活性始终是莱芜猪鲁莱黑猪大约克夏猪,MDA含量则是莱芜猪鲁莱黑猪大约克夏猪。②在肉质特性方面,不同品种猪间的肉色、滴水损失、系水率、烹饪损失、肌内脂肪(IMF)和多不饱和脂肪酸(PUFA)含量具有极显著的差异(P0.01),与大约克夏猪相比,莱芜猪和鲁莱黑猪肌肉具有鲜红的肉色、良好的持水性能、较丰富的IMF含量和较低的PUFA含量。③猪宰后肌肉SOD、MDA与持水性能、肉色、嫩度等重要肉质性状间存在不同程度的显著相关,证明SOD活性越高和MDA含量越低的肌肉,其系水力越高、肉色越鲜艳,并且肉质越细嫩。研究结果提示:猪宰后肌肉SOD通过消除或降低氧自由基而抑制脂质氧化,参与调控了肉质特性的形成。     

II型PCV和PRRSV单独与共同感染未吃初乳猪病例人工复制

3周龄剖腹产不吃初乳(CD/CD)猪分别感染II型猪圆环病毒(PCV-2),猪繁殖-呼吸综合征病毒(PRRSV),PCV-2和PRRSV共同感染,比较这些病毒的单独或联合作用。并于接种后不同日龄及猪濒死时剖检。接种后第10天(10DPI),PCV-2和PRRSV共同感染猪出现严重的呼吸困难、昏迷,偶尔出现黄疸,10DPI后,91%死亡,20DPI时,全部死亡。PCV-2单独感染猪出现昏迷,散发性黄疸,42%出现渗出性皮炎,死亡率26%。PRRSV感染猪出现呼吸困难和昏迷,至28DPI时恢复。PCV-2感染猪和PCV-2/PRRSV共同感染猪皆出现与断奶后仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)相同的组织病变。PCV-2/PRRSV共同感染猪亦出现严重的增生性间质肺炎和更相似的肝病变,出现极大量的含有PCV-2抗原的细胞。PRRSV感染猪出现中等程度的增生性间质肺炎,但未出现支气管或肝病变以及淋巴组织萎缩。研究结果表明:1PCV-2共感染能加重PRRSV对CD/CD猪引起的间质性肺炎的严重程度;2是PCV-2而不是PRRSV引起PMWS的淋巴组织萎缩,肉芽肿性炎症,坏死性肝炎等特征病变。     

猪肠道钠氢交换载体(NHE3)mRNA表达的肠段特异性和发育性变化

旨在探讨猪肠道钠氢交换载体（NHE3）mRNA表达的肠段特异性和发育模式,为NHE在养猪生产中的应用提供理论依据。选取遗传背景相同的1、7、26、30、60、90和150 d蓝塘和长白公猪各5头,测体质量后屠宰,取十二指肠、空肠、回肠和结肠组织样品;以18S rRNA为内标基因,用实时荧光定量PCR法检测NHE3 mRNA在60 d长白猪表达的肠段特异性及其在蓝塘和长白猪肠道表达的发育模式。结果显示：长白猪肠道NHE3 mRNA的表达丰度为结肠、十二指肠、空肠和回肠依次降低,且结肠显著高于空肠和回肠（P〈0.05）。不同猪种NHE3mRNA在十二指肠和空肠的表达模式相似;蓝塘和长白猪NHE3 mRNA的表达丰度分别在7和30 d（十二指肠）、7和26 d（空肠）达最高水平（P〈0.05）。不同猪种结肠NHE3 mRNA的表达模式不同,分别与其在十二指肠和空肠的发育呈现不同的模式;蓝塘猪结肠NHE3 mRNA的表达丰度在26、90和150 d时显著低于长白猪（P〈0.05）。以上结果说明,猪肠道NHE3 mRNA的表达受到发育阶段、品种和肠段的调控,且在十二指肠和空肠间具有品种稳定性。     

应用荧光定量PCR方法研究RPL29基因在通城猪和长白猪不同时期胚胎骨骼肌中的表达

为了研究蛋白合成相关基因RPL29在骨骼肌发育中的作用,采用SYBRGreen染料建立该基因的实时荧光定量PCR（QPCR）分析方法,并分析该基因在猪胚胎骨骼肌中的表达变化。以不同浓度稀释样本为标准品,建立标准曲线方程：y=-3.303X＋43．077（决定系数R^2=0．999）。分析表明：该方法具有较大的检验范围（PCR扩增Q值13～35）,很好的扩增效率为100％,熔解曲线显示产物特异的单峰,其Tm值为86．5℃。本研究以H3F3A基因为内参,用所建立的实时定量PCR方法,分析RPL29在妊娠33、65和90d的通城猪和长白猪胚胎骨骼肌中的表达变化。研究发现：RPL29基因在通城猪和长白猪胚胎骨骼肌发育过程中分别呈现下调和上调表达模式;妊娠33d时,通城猪中的表达水平高于长白,而妊娠90d时在长白猪中高表达;妊娠65d时两品种间无显著差异。结果显示RPL29基因可能与猪骨骼肌的生长发育有关,并可能影响产肉性状。