杀菌性/通透性增加蛋白对感染绵羊肺炎支原体的盘羊杂交羊的免疫调节作用研究

为研究重组杀菌性/通透性增加蛋白(r BPI)对感染绵羊肺炎支原体(MO)后的盘羊杂交羊的细胞因子变化情况,本研究以6只巴什拜羊为A组,12只盘羊杂交羊随机分为B和C两组,全部人工感染MO(ccu=106),感染4 d后C组每天肌肉注射r BPI 150 mg/只,A和B组注射生理盐水,并采用荧光定量PCR方法及ELISA检测实验羊不同时间外周血中BPI、IL-1β、IL-4及IL-6的表达水平。结果显示,B对照组死亡率为33.3%。BPI的表达水平在感染后第7 d,C组显著低于A和B组(p0.05),第14 d~21 d C组极显著高于B组(p0.01),而在第7 d~21 d,A组极显著高于B组(p0.01)。IL-1β表达水平在感染后第7 d~21 d,C组极显著低于A和B组(p0.01),第21 d,A组显著低于B组(p0.05)。IL-4的表达水平在感染后第7 d~21 d,C组极显著高于A和B组(p0.01),第14 d~21 d,A组显著高于B组(p0.05)。IL-6表达水平在感染第14 d~21 d,C组极显著低于A和B组(p0.01),A组显著低于B组(p0.05)。以上结果表明r BPI对感染MO后的盘羊杂交羊具有一定的免疫调节作用。     

感染绵羊肺炎支原体前后绵羊血清中相关细胞因子的动态检测

为研究绵羊感染绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,MO)前后体内细胞因子含量的变化,将6只盘羊杂交羊和6只巴什拜羊人工感染MO,在感染前后采集静脉血,分离血清,用ELISA方法检测IL-5、IL-9、IL-12及IL-13含量。结果显示:2组羊在感染后IL-5浓度均升高,第7(P0.05)、14(P0.01)和21天(P0.01)盘羊杂交羊IL-5含量显著和极显著高于巴什拜羊;感染后第7(P0.01)、14(P0.01)和21天(P0.05)盘羊杂交羊的IL-9浓度极显著和显著地高于巴什拜羊;在感染后的第7(P0.05)、14(P0.01)和第21天(P0.01),盘羊杂交羊的IL-12浓度显著和极显著地高于巴什拜羊;在感染后的第5(P0.05)、7(P0.05)、14(P0.01)和21天(P0.01),IL-13浓度巴什拜羊显著和极显著低于盘羊杂交羊。结果表明:绵羊感染MO前后血清中IL-5、IL-9、IL-12及IL-13的浓度有明显变化,巴什拜羊和盘羊杂交羊的上述细胞因子变化也有显著差异,这对研究支原体肺炎发病机理及临床诊断有指导意义。     

BPI蛋白对感染绵羊肺炎支原体的盘羊杂交羊细胞因子水平的影响

研究重组BPI蛋白(rBPI)对感染绵羊肺炎支原体(MO)的盘羊杂交羊的免疫应答分析。将6只巴什拜羊作为A组,将12只盘羊杂交羊随机分为B、C组,全部人工感染MO,感染第4天开始,C组每天分别注射rBPI,A和B组注射生理盐水。采用ELISA方法检测试验羊不同时间血清中IL-8、IL-10、IFN-γ及TNF-α的含量。在试验结束后宰杀各组6只羊,取肺组织做病理切片,进行治疗效果评价。结果:在感染初期,3个组IL-8、TNF-α及IFN-γ含量都升高,而IL-10有降低趋势。在感染后第7天,C组IL-8浓度显著低于A组(P0.05);在第14—21天,B组极显著高于A组(P0.01)。在第5天,C组IL-10显著高于A组(P0.05),极显著低于B组(P0.01);在第14天,C组极显著低于A组(P0.01),显著高于B组(P0.05);在第21天,C组显著低于A组(P0.05),极显著高于B组(P0.01)。在第14天,C组IFN-γ含量显著高于A组(P0.05);在第21天,C组显著低于B组(P0.05),但极显著高于A组(P0.01)。在感染第14天,C组TNF-α显著低于B组(P0.05),显著高于A组(P0.05);在第21天,C组的TNF-α显著低于B组(P0.05),但极显著高于A组(P0.01)。组织病理学评分结果:A组平均分为9.4,B组平均分19.9,C组平均分为12.8,B组评分显著高于A、C组(P0.05、P0.05)。rBPI对MO感染的杂交羊有治疗作用,对细胞因子有调节作用。     

感染绵羊肺炎支原体后绵羊SPLUNC1 mRNA表达水平监测

为检测绵羊感染绵羊肺炎支原体(MO)前后的短腭、肺及鼻咽上皮克隆基因1(SPLUNC1)表达水平变化,对6只巴什拜羊和6只盘羊杂交羊分别人工感染MO,在感染前(第0天)和感染后第5、14、21天,采集口腔喉咽部的上腭组织,用Real-time PCR方法检测SPLUNC1mRNA的表达水平。结果:感染后两组羊SPLUNC1 mRNA的相对表达水平均升高,在感染后第14~21天,巴什拜羊SPLUNC1 mRNA水平均极显著高于盘羊杂交羊(P001)。该结果说明在临床上表现为抗MO感染的巴什拜羊,体内可表达高水平的SPLUNC1 mRNA,这为巴什拜羊抗MO感染的机理研究提供一定的参考依据。     

绵羊肺炎支原体感染羊细胞因子的动态变化

为检测绵羊在感染绵羊肺炎支原体(MO)前后细胞因子的含量变化情况,将6只巴什拜羊和6只盘羊杂交羊人工感染MO,在感染前后分别采集静脉血,分离血清,用ELISA方法检测IL-1β、TNF-α、IL-8、IL-10及IFN-γ含量。结果显示:两组羊在感染后IL-1β浓度均升高,第21天巴什拜羊的IL-1β含量降低,且显著低于杂交羊(P0.05);感染后两组的TNF-α含量逐渐升高,第14~21天巴什拜羊TNF-α含量开始下降,且第14天显著低于杂交羊(P0.05),第21天极显著低于杂交羊(P0.01);感染后第14和21天,巴什拜羊的IL-8含量开始下降,而杂交羊则继续升高,且杂交羊IL-8含量均极显著高于巴什拜羊(P0.01);两组羊的IL-10含量在第5天达到最高,且杂交羊极显著高于巴什拜羊(P0.01),而第14和21天巴什拜羊显著(P0.05)和极显著(P0.01)高于杂交羊;感染后两组羊的IFN-γ含量逐渐升高,第14~21天,巴什拜羊的IFN-γ含量开始下降,而杂交羊则继续升高,第14和21天巴什拜羊显著(P0.05)和极显著(P0.01)低于杂交羊。结果提示:绵羊感染MO前后细胞因子变化明显,巴什拜羊和杂交羊细胞因子变化也有差异,这对研究支原体肺炎发病机理及免疫治疗有指导意义。     

巴什拜羊、盘羊杂交羊重组SP-A蛋白对体外培养MO增殖的影响

为研究巴什拜羊和盘羊杂交羊的重组肺表面活性物质相关蛋白A(rSP-A)对体外培养的绵羊肺炎支原体(MO)增殖的影响,本研究利用不同浓度(10μg/mL、20μg/mL和40μg/mL)巴什拜羊和盘羊杂交羊的rSP-A添加于MO培养液中进行体外培养,采用平板菌落计数和荧光定量PCR方法检测其对MO增殖的影响。平板菌落计数结果显示,巴什拜羊的3个rSP-A浓度组菌落数分别比对照组减少了8.35%(p>0.05)、23.04%(p<0.05)和40.03%(p<0.01);盘羊杂交羊的3个rSP-A浓度组菌落数分别比对照组减少了6.73%(p>0.05)、21.74%(p<0.05)和37.11%(p<0.01)。荧光定量PCR检测结果显示,添加rSP-A培养4h后MO16SrRNA基因拷贝数降至最低,巴什拜羊3个rSP-A浓度组16SrRNA基因拷贝数比对照组下降了72.15%(p<0.05)、78.81%(p<0.01)、81.48%(p<0.01);盘羊杂交羊的3个rSP-A浓度组的MO16SrRNA基因拷贝数比对照组下降了26.26%(p>0.05)、76.62%(p<0.01)、80.83%(p<0.01)。研究表明,巴什拜羊和盘羊杂交羊的rSP-A对体外培养的MO具有明显的抑制作用。本研究比较了不同品种羊SP-A蛋白在抗MO感染中的作用,为进一步研究盘羊杂交羊易感MO的分子作用机制奠定基础。     

感染肺炎支原体绵羊外周血单核细胞细胞因子和ISG15 mRNA表达水平动态观察

探讨绵羊感染肺炎支原体后相关细胞因子和干扰素刺激因子15(ISG15)的变化及其意义。应用Real-time PCR方法检测了18只经人工感染肺炎支原体的巴什拜羔羊和盘羊杂交羔羊的外周血单核细胞中IFN-γ、IL-12和ISG15 mRNA的表达水平。结果:在感染后的第7天与第14天,巴什拜羊ISG15的表达量显著高于盘羊杂交羊和对照组(P<0.05);盘羊杂交羊和巴什拜羊的IFN-γ表达水平显著高于对照组(P<0.05);在感染后的第14天,盘羊杂交羊的IL-12表达水平显著高于巴什拜羊(P<0.01)。证实IFN-γ、IL-12和ISG15在肺炎支原体感染过程中起重要作用,对研究支原体肺炎发病机理及提供免疫治疗有指导意义。     

绵羊感染支原体后杀菌通透性增加蛋白(BPI)mRNA表达水平的变化

为了检测巴什拜羊和盘羊杂交羊在感染绵羊肺炎支原体(MO)前后杀菌通透性增加蛋白(BPI)表达水平的变化,对试验羊攻毒MO,在感染前(第0天)及感染后的第2、5、7、14及21天,颈静脉采血分离中性粒细胞,采用Real-time q PCR方法检测BPI的表达水平。结果显示,感染后第5天,2组BPI相对表达量升高。巴什拜羊BPI持续升高,杂交羊在第7天表达水平最高,在14-21天则逐渐降低。在第7天,巴什拜羊高于杂交羊(P0.05),在第14-21天,巴什拜羊极显著高于杂交羊(P0.01)。说明绵羊感染MO后初期BPI有明显升高趋势,在后期巴什拜羊和杂交羊的BPI变化有差异,这对研究支原体肺炎发病机理提供参考。     

人工感染绵羊肺炎支原体后绵羊血清中细胞因子的动态变化

为探讨人工感染绵羊肺炎支原体后绵羊相关细胞因子的变化,将18只试验羊分为A、B、C三组,A组为盘羊杂交羊,B、C组为巴什拜羊,其中A、B组气管内感染绵羊肺炎支原体2 mL/只(106CCU/mL),C组为对照,气管内注射生理盐水2 mL只。应用ELISA方法检测绵羊血清中IL-2、IL-4和IL-6的浓度。结果表明,IL-2的浓度在感染后第1天,A、B两组显著高于C组(P<0.05);在第7¹4天,B组显著高于A组和C组(P<0.05);在第14天,A组显著高于C组(P<0.05);在第21天,B组极显著高于A组和C组(P<0.01)。IL-4的浓度分别在感染后第1、7与14天,A组极显著高于B组和C组(P<0.01),其中C组显著高于B组(P<0.05)。IL-6的浓度在感染后第1天,A组和B组显著高于C组(P<0.05);在感染后第7天,A组显著高于B组和C组(P<0.05),其中B组显著高于C组(P<0.05);第1414天,B组显著高于A组和C组(P<0.05);在第14天,A组显著高于C组(P<0.05);在第21天,B组极显著高于A组和C组(P<0.01)。IL-4的浓度分别在感染后第1、7与14天,A组极显著高于B组和C组(P<0.01),其中C组显著高于B组(P<0.05)。IL-6的浓度在感染后第1天,A组和B组显著高于C组(P<0.05);在感染后第7天,A组显著高于B组和C组(P<0.05),其中B组显著高于C组(P<0.05);第14²1天,A组极显著高于B组和C组(P<0.01)。说明不同品种的羊对肺炎支原体感染引起的细胞因子的变化有差异,这对研究支原体肺炎发病机理及提供免疫治疗有指导意义。     

巴什拜羊与其杂交羊对绵羊肺炎支原体感染的比较

为了比较巴什拜羊与其杂交羊对绵羊肺炎支原体(MO)感染的差异,将6只巴什拜羊和6只杂交羊人工感染MO,分别观察其临床症状和病理解剖变化,用ELISA方法分别检测血清中IL-1β、IL-6、IL-9及IFN-γ的浓度,制作肺部组织切片观察组织病理学变化,并进行组织病理学评分。结果显示,感染后杂交羊比巴什拜羊表现出更严重的、典型的支原体肺炎的临床症状和病理剖检变化。组织病理学评分结果显示,杂交羊的评分显著高于巴什拜羊。相关细胞因子检测结果显示,杂交羊血清中IL-1β、IL-6、IL-9及IFN-γ的浓度均显著高于巴什拜羊。结果表明,巴氏拜羊对MO感染具有一定的抗性,而杂交羊对MO较易感。     

巴什拜羊OLA-DRB3基因多态性与绵羊肺炎支原体感染相关性研究

本研究旨在分析巴什拜羊DRB3基因遗传多态性与MO感染的相关性。采用PCR-RFLP方法分析巴什拜羊OLA-DRB3基因第2外显子多态性,并计算基因杂合度、多态信息含量和有效等位基因数等遗传参数;通过分析和差异性检验MO阴性和阳性巴什拜羊OLA-DRB3基因型频率和等位基因频率,初步判定MO的抗性或易感性基因。结果表明:巴什拜羊OLA-DRB3第2外显子在第122、154、168和241碱基处表现出多态性;在Taq I、Pst I位点达到Hardy-Weinberg平衡,根据基因杂合度和多态信息含量,表明巴什拜羊具有较为丰富的遗传多样性。在巴什拜羊的24种基因型中,HaeⅢBC(P0.05)为MO抗性基因,HaeⅢDD(P0.05)为MO易感基因型;Pst I A(P0.01)和Pst I B(P0.01)、HaeⅢC(P0.01)分别是巴什拜羊MO易感和抗性相关等位基因。此结果可为绵羊抗病育种研究提供理论支持。     

巴什拜羊SPLUNC1基因的克隆与真核表达

为了克隆巴什拜羊SPLUNC1基因并表达该蛋白,本试验从巴什拜羊肺脏组织中提取总RNA,利用RT-PCR方法扩增出SPLUNC1基因开放阅读框序列,将该基因片段插入到真核表达质粒pPIC9K中构建pPIC9K-SPLUNC1重组质粒,然后将pPIC9K-SPLUNC1重组质粒线性化并电击转化入毕赤酵母GS115中,经甲醇诱导蛋白表达后用SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定目的蛋白。结果表明,经RT-PCR扩增成功获得大小为748 bp的SPLUNC1基因;构建的pPIC9K-SPLUNC1重组质粒经PCR、酶切及测序鉴定与预期结果一致;SDS-PAGE及Western blotting检测鉴定结果表明获得大小为25.53 ku的SPLUNC1蛋白。本试验结果为进一步研究巴什拜羊SPLUNC1蛋白的生物学活性奠定基础。     

盘羊、巴什拜羊及其杂交羊重组ISG15蛋白对绵羊外周血淋巴细胞转化的影响

为比较不同品种羊的重组干扰素刺激基因15（IFN-stimulated gene,ISG15）蛋白对淋巴细胞转化效果影响的差异,试验比较了5种浓度的盘羊、巴什拜羊及其杂交羊重组ISG15蛋白对培养的绵羊外周血淋巴细胞转化的影响。结果表明,添加盘羊重组ISG15蛋白浓度为10～80 μg/mL时,D_{570 nm}值均显著高于PBS对照组（P＜0.05）;添加巴什拜羊重组ISG15蛋白浓度为40～80 μg/mL时,D_{570 nm}值均显著高于PBS对照组（P＜0.05）;而各种浓度的杂交羊ISG15组与PBS对照组相比差异均不显著（P＞0.05）。提示,盘羊和巴什拜羊的重组ISG15蛋白在一定浓度下能有效地刺激淋巴细胞转化,且随蛋白浓度的增加对淋巴细胞转化作用增强,而杂交羊重组ISG15蛋白对外周血淋巴细胞转化无显著影响。     

香菇多糖对大肠杆菌攻毒大鼠空肠形态结构、上皮细胞数量和紧密连接蛋白表达的影响

本研究旨在探讨香菇多糖对大肠杆菌攻毒大鼠空肠形态结构、上皮细胞数量和紧密连接蛋白表达的影响。将24只SD大鼠随机分成4个组(A、B、C、D组),每组6个重复,每个重复1只。A、B组饮用蒸馏水,C、D组饮用蒸馏水中添加20μg/m L的香菇多糖;试验第15天B、D组灌服2 m L浓度为1×1010CFU/m L大肠杆菌K88,A、C组灌服等量生理盐水。试验第18天心脏采血处死,取空肠固定和冻存,制作石蜡切片,苏木精-伊红(HE)染色和高碘酸雪夫氏(PAS)染色,测定绒毛高度、隐窝深度、绒毛宽度、上皮内淋巴细胞(IEL)数量和上皮杯状细胞(GC)数量,计算绒毛高度与隐窝深度的比值(V/C);并采用蛋白质印迹(Western-blot)法测定空肠紧密连接蛋白Occludin的表达水平。结果表明:各组绒毛高度和绒毛宽度无显著差异(P0.05)。C组隐窝深度极显著低于A、B组(P0.01),显著低于D组(P0.05)。C组V/C极显著高于A、B、D组(P0.01)。C组IEL数量极显著低于B、D组(P0.01),显著低于A组(P0.05)。C组上皮GC数量极显著高于A、D组(P0.01),与B组差异不显著(P0.05)。D组Occludin表达水平明显高于A、B和C组,B组Occludin表达水平高于A组。综上,大鼠饮用水中添加香菇多糖可改善大鼠空肠形态结构,并提高其抵抗大肠杆菌感染能力,促进Occludin的表达。     

野生盘羊×巴什拜羊回交二代的脂尾形态变异分析

试验旨在研究野生盘羊×巴什拜羊回交二代的脂尾形态特征以及脂尾大小对体尺指数的影响。以216只饲养条件相同、体况良好的75日龄野生盘羊×巴什拜羊回交二代为研究对象,计算脂尾性状的变异系数,再根据脂尾性状采用R语言K-mean聚类分析方法对野生盘羊×巴什拜羊回交二代进行分析,研究脂尾的分离分化情况,并用SPSS 19.0对回交二代各类型脂尾羊的7个体重体尺指数（体重、体长指数、胸围指数、管围指数、体躯指数、肢长指数和胸指数）进行差异比较分析。结果发现,根据聚类分析结果可将野生盘羊×巴什拜羊回交二代分为4个类型：小尾型、中尾型、大尾型和肥尾型;肥尾型体长指数极显著大于小尾型（P<0.01）,大尾型体躯指数极显著大于小尾型（P<0.01）,大尾型和肥尾型胸围指数、胸指数极显著大于小尾型（P<0.01）,各尾型间的体重、管围指数、肢长指数差异不显著（P>0.05）。综合以上试验结果,回交二代的脂尾出现了性状分离,脂尾越大其体型越大,但体重无明显变化;结合野生盘羊与巴什拜羊的体型外貌特征及生产性能的特点,大尾型和肥尾型在体型上更趋近于巴什拜羊,小尾型则在尾型上更趋近于野生盘羊。     

不同类型脂肪对重庆黑山羊瘤胃消化代谢的影响

选择9只18月龄左右安装永久性瘤胃瘘管的重庆黑山羊羯羊,随机分成A、B、C 3组,分别在基础日粮中添加4%百事美脂肪粉、4%菜籽油、0%脂肪饲喂,研究不同形式脂肪对山羊瘤胃消化代谢的影响。结果表明:B组DM降解率极显著高于A、C组(P0.01);但其CP降解率极显著低于A、C组(P0.01),A组极显著低于C组(P0.01)。B组NDF、ADF、ADL降解率极显著低于A、C组(P0.01),A组ADF降解率极显著低于C组(P0.01)。B组pH极显著高于A、C组(P0.01),A组极显著高于C组(P0.01);B组瘤胃液NH3-N浓度极显著低于A、C组(P0.01)。B组血糖浓度极显著高于A、C组(P0.01);B组血清胆固醇浓度极显著低于A、C组(P0.01)。从以上指标来看,在重庆黑山羊日粮中添加百事美脂肪粉效果最好。     

盘羊及其杂交一代羊绒纤维细度的测定与形态学的显微观察

通过对盘羊、盘羊与巴什拜羊杂交一代羊及其回交羊、巴什拜羊、山羊的羊绒和新疆军垦型美利奴细毛羊毛纤维细度的测定和形态学的显微观察,结果显示:盘羊绒毛的纤维平均细度12.500μm<山羊绒细度15.595μm<盘羊杂交一代羊绒毛细度15.825μm<新回交羊绒毛细度19.385μm<新疆军垦型美利奴细毛羊羊毛细度19.800μm<巴什拜羊绒毛细度23.319μm;盘羊及其杂交一代羊绒毛的鳞片排列结构和形状与山羊绒毛十分相似,与细毛羊的毛纤维有明显的区别,其中盘羊绒毛、盘羊杂交一代羊绒毛的纤维平均细度的标准差和变异系数明显小于山羊绒。     

基于mt DNA D-loop区序列的野绵羊与新疆地方绵羊的系统发育研究

为研究新疆绵羊的起源以及野生绵羊对新疆地方绵羊品种的遗传贡献,采用生物信息学的方法研究野生绵羊与新疆地方家绵羊的亲缘关系,结果表明:塔什库尔干羊、巴什拜羊、哈萨克羊均起源A、B、C三个世系,与东方盘羊关系较近,而和田羊、阿勒泰羊单独聚为一类,可能为D进化支,且与盘羊关系较近。     

不同青贮替代小麦秸秆对东乡贡羊生长性能、营养物质表观消化率及血清生化指标的影响

试验旨在研究不同青贮替代小麦秸秆对东乡贡羊生长性能、营养物质表观消化率及血清生化指标的影响。选择30只东乡贡羊随机分为3组，每组10个重复，每个重复1只羊。A组（对照组）羊饲喂小麦秸秆+精料，B组羊饲喂50%小麦秸秆+50%玉米青贮+精料，C组羊饲喂50%小麦秸秆+50%甜高粱青贮+精料。试验期82 d。结果显示，A组、C组东乡贡羊的末重、平均日增重显著高于B组（P<0.05）。A组东乡贡羊的平均日精料采食量显著高于B组（P<0.05）。B组总饲喂成本、每千克增重饲喂成本显著高于C组（P<0.05）。B组羊的粗蛋白质、粗脂肪表观消化率极显著高于A组（P<0.01）,C组羊的粗蛋白质、粗脂肪表观消化率显著高于A组（P<0.05）;B组羊的酸性洗涤纤维、中性洗涤纤维表观消化率显著高于C组（P<0.05）。试验初期，C组羊中间细胞比率显著低于其他组（P<0.05）,A组羊的血红蛋白含量显著低于其他组（P<0.05）,B组羊的血小板总数显著低于其他组（P<0.05）,B组羊血清葡萄糖含量极显著高于其他组（P<0.01）。试验末期，各组...     

中药合剂对雏鸡淋巴细胞培养的免疫抑制效果研究

60只健康雏鸡随机分为A、B、C、D四组,每组15只。9日龄时,C、D两组人工感染传染性法氏囊炎病毒(IBDV),复制动物免疫抑制模型;B、D组同时饲喂中药;A组设为对照组。结果表明:免疫抑制的D组和A组在给药3 d后淋巴细胞转化率显著高于C组(P<0.01);喂药7 d后,B组转化率显著高于A组(P<0.05);中药合剂直接刺激A、C组的淋巴细胞,中药浓度为1:1000细胞转化率最高,显著高于0、1:100、1:500(P<0.01),略高于1:2000(P<0.05);ELISA检测中,D组IL-2水平显著高于C组(P<0.01),但与A组差异不显著(P>0.05)。实验提示该中药合剂可有效缓解免疫抑制病,增强机体免疫力。