不同检测方法对猪瘟病毒抗体检测比较研究

为了找出适用于不同级别畜牧兽医站检测猪瘟病毒抗体的方法，本文采用猪瘟病毒抗体ELISA检测法和猪瘟病毒抗体快速检测卡进行猪瘟病毒抗体检测，通过统计分析，结果表明，猪瘟病毒抗体ELISA检测法适用于县级兽医实验室检测，结果可靠、准确；猪瘟病毒抗体快速检测卡适用于乡镇畜牧兽医站或养殖场自行检测，方法简单，快速，易操作，但准确性较差，为不同级别和地方的猪瘟病毒抗体检测方法的选择提供重要参考。     

采用不同血清学检测方法对猪蓝耳病免疫效果调查

本文采用猪蓝耳病通用型抗体ELISA检测法和猪蓝耳病通用型抗体快速检测卡检测法(胶体金法),对180份已免高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征苗的猪血样进行免疫抗体检测。结果显示,采用ELISA检测法检测的猪蓝耳病免疫抗体阳性率为82.2%;用胶体金法检测的猪蓝耳病免疫抗体阳性率为60.6%。二者相比,阳性符合率高(100%)即胶体金法抗体滴度大于1∶40以上者在ELISA法检测中为阳性;阴性符合率低即胶体金法抗体滴度大于1∶20小于1∶40之间者在ELISA法检测中也为阳性,只有小于1∶20者2种方法检测结果都为阴性。胶体金法简单,快速,易操作,可用于乡镇畜牧兽医站或养殖场的自行检测。     

胶体金快速检测卡与实验室检测结果比对试验

胶体金技术是以胶体金作为跟踪标记物应用于抗原抗体反应的一种新型的免疫标记技术。通过胶体金快速检测卡检测法和实验室检测方法的检测结果比对,来验证胶体金快速检测卡的准确度及推广价值。     

猪瘟抗体胶体金快速定量检测卡的研制

应用胶体金免疫层析技术,结合胶体金定量读数仪研制出一种快速定量检测猪血清中猪瘟抗体水平的检测卡。该检测卡以胶体金标记高灵敏的猪瘟重组E2蛋白,同时在NC膜上包被同一蛋白,经正交实验确定最适条件,同时通过与对照线的颜色对比,应用胶体金定量读数仪,可对样本中猪瘟抗体水平进行定量。该检测卡检测方法简便、快速、稳定性好。与猪圆环病毒病、猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸综合征等常见猪疫病抗体均无交叉反应。检测71份猪血清样本结果与ELISA结果的符合率达90.1%。结果表明,实验研制的猪瘟抗体胶体金快速定量检测卡可用于基层兽医站和养殖企业的检测。     

细小病毒抗原快速检测卡临床使用效果评价

本试验以PCR方法为标准,以临床收集的213份粪便样本为检测对象,对3家商品化犬细小病毒抗原快速检测卡的临床应用效果进行了评价:与PCR方法相比较,3家产品各自的敏感性分别为71.7%,66.4%和72.2%;相对应的特异性分别为96%,97%和96%。3家检测卡彼此之间的符合率分别为96.7%、99.5%和95.8%。以PCR方法和其中两种检测卡对同一窝5只感染犬细小病毒的幼犬的临床病征与CPV检测结果进行相关性评估,结果显示,犬细小病毒抗原快速检测卡的阴性检测结果与病犬临床症状的缓解或消失时间呈正相关,而PCR方法在动物临床病征消失后仍可检出病毒。     

禽流感病毒抗原H5快速检测卡比对试验报告

对禽流感疫苗第2次免疫后21d的30只健康鸡进行抗体检测,同时对此30只试验鸡采用进口的禽流感病毒抗原H5快速检测卡和国产禽流感病毒抗原H5快速检测卡进行禽流感病毒检测效果对比。结果表明,两个厂家生产的试剂检测结果均为阴性,符合率为100%,均未出现禽流感病毒假阳性。     

几种“瘦肉精”胶体金快速检测卡的性能指标评价

"瘦肉精"是一类非法的饲料添加剂,其造成的多次中毒事件,使得它近年来受到了广泛的关注。本试验拟研究几种市售"瘦肉精"胶体金快速检测卡的主要性能指标,对它们的灵敏度、特异性、重复性、稳定性等进行试验研究,并对其进行评价。结果表明胶体金快速检测卡较为方便、快捷,但部分检测卡存在与说明书所标的性能指标不符、质量良莠不齐、单独应用于临场检测时检测结果不够精确等问题。结果提示快速检测卡只适用于现场快速检测和筛选工作。     

“瘦肉精”现场快速检测的应用及分析

使用"瘦肉精"快速检测卡,对深圳市某定点屠宰场待宰猪、牛、羊进行"瘦肉精"现场快速检测,用盐酸克伦特罗检测卡检测猪尿82258份、用莱克多巴胺检测卡检测猪尿82258份、用沙丁胺醇检测卡检测猪尿82258份,用盐酸克伦特罗检测卡检测牛尿20561份、用莱克多巴胺检测卡检测牛尿20561份、用沙丁胺醇检测卡检测20561份,用盐酸克伦特罗检测卡检测羊尿6443份、用莱克多巴胺检测卡检测羊尿6443份、用沙丁胺醇检测卡检测羊尿6443份。检测结果:盐酸克伦特罗快速检测为阳性的猪尿有3份、牛尿96份;莱克多巴胺快速检测为阳性的猪尿有2份;沙丁胺醇快速检测为阳性的牛尿12份。对现场快速检测结果为阳性的尿样送第三方检测机构使用液相色谱-串联质谱法进行复检确证,确证结果:盐酸克伦特罗检测卡假阳性率为6%,莱克多巴胺检测卡假阳性率为0,沙丁胺醇检测卡假阳性率为8%。     

间接ELISA和HI方法检测禽流感病毒抗体的相关性试验

分别采用商品化的酶联免疫吸附试验(ELISA)抗体检测试剂盒和血凝抑制(HI)试验方法对153份血清样本进行禽流感病毒(AIV)的H5抗体检测,比较间接ELISA和HI两种方法检测结果的相关性。研究结果表明,间接ELISA和HI两种方法呈较好的相关性,二者间的相关系数为0.765。间接ELISA和HI两种方法检测AIV抗体的阳性符合率为95.8%,阴性符合率为87.2%,总体符合率为96.7%。间接ELISA方法是一种敏感、特异和快速的血清学诊断方法,可以用于临床样本的大规模检测。     

家禽活疫苗中禽白血病病毒污染检测方法比较

本研究对家禽活疫苗中禽白血病病毒的不同检测方法进行了对比,通过直接ELISA检测法、RT-PCR法、病毒分离法和SPF鸡抗体检测法,对不同来源的家禽活疫苗进行了禽白血病病毒污染的检测。通过进一步测序验证发现,直接ELISA检测法和RT-PCR检测法都可出现"假阳性"。试验结果表明,病毒分离法虽然结果准确,但是操作难度大、技术要求高,而SPF鸡抗体检测法既简单、准确,又能确切反映疫苗的纯净性,利于推广应用。     

某地区羊布鲁氏菌病血清学调查与4种血清学检测方法的比较应用

为更好地开展羊布鲁氏菌病防控技术指导,对某地20家养羊场、户采集羊血样328份,同时应用虎红平板凝集试验与胶体金检测卡进行初步检测,并将上述2种方法初检为阳性的样品与随机选取的阴性样品共计60份,分别应用试管凝集试验及cELISA进行确诊。结果显示,虎红平板凝集试验、胶体金检测卡、试管凝集试验与cELISA方法检测结果的总符合率分别为97.0%、98.3%和98.3%,该地区个体阳性率0.91%,群体阳性率10.0%。在此基础上,应用布鲁氏菌病国家标准阳性血清对4种方法的敏感性进行了测定,结果显示,cELISA检测方法敏感性最高,其次为试管凝集试验与胶体金快速检测卡。综上得出,胶体金检测方法既可以作为布病血清学检测的初筛试验,也可以与cELISA检测方法共同用作布病血清学检测的复核试验。     

免疫金标试纸检测与正向间接血凝试验对猪瘟免疫效果的评估对比

当前国内对猪瘟抗体水平检测方法有ELISA检测法、猪瘟正向间接血凝法以及免疫金标试纸检测法。前两种方法虽然都具有微量、特异、准确的优点,但需要比较完备的实验仪器和经验丰富的技术人员,且检测时间较长。而金标试纸条是新开发的一种全新猪瘟抗体检测方法,检测一个样品只需8～15min,操作简便、快速、直观、结果容易判定,但其应用检测结果的准确性尚待求证。鉴于这种情况,开展了免疫金标试纸检测与正向间接血凝试验两种检测方法的比较研究[1]。结果表明,免疫金标试纸检测与猪瘟正向间接血凝试验的结果基本符合,试验结果可靠。     

中山病多克隆抗体竞争ELISA检测方法的建立

为建立一种简便、快速的中山病血清抗体监测方法,本研究采用纯化的中山病病毒(CHUV)包被ELISA反应板,兔抗CHUV多克隆抗体作为竞争抗体,建立了检测CHUV抗体的竞争ELISA(C-ELISA)方法。结果显示:抗原最佳包被浓度为4.12μg/m L,竞争抗体最佳使用浓度为1∶12 000倍。特异性试验显示该C-ELISA方法仅能检测CHUV抗体,其它相关病毒阳性血清检测结果均为阴性。对已知阳性样品的检测结果表明,本研究建立的C-ELISA方法敏感性高于血清中和试验和琼脂扩散试验。分别用C-ELISA、RT-PCR和病毒分离试验对监控动物每周采集的血清和抗凝血样品进行检测,ELISA结果与其它两种方法检测结果对应一致。本研究建立的C-ELISA为CHUV抗体的检测提供了一种快速、方便、可靠的方法。     

阻断ELISA与病毒中和试验检测PPR抗体的比较分析

为选择一种简便、快速、敏感性高、特异性好的小反刍兽疫(PPR)血清学检测方法,本实验收集了506份山羊和绵羊血清样品,采用ELISA和病毒中和试验(VNT)两种方法对PPR病毒(PPRV)抗体进行检测。结果显示ELISA和VNT检出的阳性率分别为44.9%和48.6%。两种方法的符合率Kappa值为0.925,表明这两种方法具有较高的一致性,但ELISA更简便、快速、敏感,更便于基层单位使用。本研究为PPR血清流行病学调查及疫苗免疫效果评价方法的选择提供相关的技术参数。     

酪蛋白胶体金快速检测卡的研制

目的:制备检测乳制品中酪蛋白含量的胶体金快速检测卡.方法:以酪蛋白为抗原和抗酪蛋白多克隆抗体为原料,用硝酸纤维膜和玻璃纤维纸作为载体,制作出检测酪蛋白胶体金快速检测卡.结果:该检测卡检测酪蛋白的灵敏度可达到2.3mg/mL,检测时间10min,重复性和稳定性良好.结论:本实验成功制作出了能检测酪蛋白的快速检测卡.     

圆环病毒2型抗体胶体金检测试纸条的初步研制及应用

为快速检测猪群中猪圆环病毒2型抗体,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,并标记纯化的猪圆环病毒Cap蛋白和兔IgG,包被至玻璃纤维膜上制备金标垫,将纯化抗原和羊抗兔IgG分别包被至硝酸纤维素膜的检测线与质控线上,建立了检测猪圆环病毒2型抗体的胶体金免疫层析方法并组装检测卡。结果显示,组装的检测卡只与圆环病毒阳性血清发生特异性反应,阳性血清稀释10倍后仍然能够检出。用此检测卡与商品化ELISA试剂盒对100份临床血清进行平行检测,阳性率分别为89%和93%,两种方法符合率在95%以上。该方法操作简便、特异性强,可广泛应用于基层,也为圆环病毒疫苗效果评价提供了良好的试剂选择。     

原奶中药物多残留现场快速检测技术的研究

研究开发用于现场检测原奶样本中多种残留物的金标快速检测卡。主要采用胶体金免疫层析技术,通过多种参数的整合优化,将氨基糖苷类药物和氟喹诺酮类药物的检测整合到同一个检测卡上,从而研制出适合于现场检测原奶中多种残留物的金标快速检测卡。试验结果表明,该检测卡操作简便、快速、检测灵敏度高,残留检测限符合国家要求。该检测卡采用消线法进行结果判定,试验结果一目了然,可作为氨基糖苷类和氟喹诺酮类药物在牛奶中残留检测的有效筛检手段。     

犬瘟热、犬细小病毒胶体金二联检测卡研制

本研究通过细胞融合、间接ELISA方法筛选出4株可稳定分泌犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)和犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)单克隆抗体的杂交瘤细胞株,以此为基础研制了一种可同时检测CDV和CPV的胶体金二联检测卡,并对其特异性、灵敏度及准确性进行了测试。结果显示：4株杂交瘤细胞可稳定传代,分泌的单克隆抗体纯度高,效价均在1:320以上。制备的胶体金二联检测卡特异性强,只与CDV和CPV产生特异性条带,而不与其他犬类病毒反应;灵敏度高,最低检测限可达到10²拷贝/μL;准确性好,与荧光定量PCR结果的符合率高于88.0%,与市面上单一病毒检测卡的符合率高于97.2%。结果表明,本研究制备的CDV、CPV胶体金二联检测卡特异性强、灵敏度高、准确性好,兼具操作简便、肉眼可判读、结果易保存和无需特殊仪器设备等优势,可用于两种疾病的临床快速诊断和大规模检测工作。     

布鲁氏菌病三种检测方法的敏感性研究

本试验采用三种布鲁氏菌病检测方法对3种阳性血清进行检测,研究三种方法的敏感性,结果表明:3种方法的敏感性均较高,敏感性从高到低依次为布鲁氏杆菌抗体快速检测卡布氏菌抗体检测试纸条布氏菌病虎红平板凝集试验。     

猪嗜血杆菌胸膜肺炎酶标诊断方法的特异性验证试验

用HRP—SPA ELISA方法检测猪嗜血杆菌胸膜肺炎(HP)抗体,是一种简便、快速、灵敏、特异的血清学诊断方法。用本方法检测猪血清2042头份,阳性检出率为32.6%,利用其中的1776份血清进行了ELISA与CF平行检测试验,ELISA对CF试验的阳性覆盖率为95.2%,另从CF试验检出的阴性血清中,ELISA方法多检出阳