猪瘟抗体快速检测方法效果验证

免疫抗体金标试纸条快速检测卡检测法为近年逐渐得到推广应用的一种快速检测方法,为验证该检测方法的准确性,本试验安排了300个血样的对比检测,从总的检测结果对照来看,两种检测法的检测吻合度较高,达96%左右。而对比两种检测的费用,快速检测卡检测法的费用大约为ELISA检测法的20%。因此,通过本试验综合对比,猪瘟抗体快速检测卡检测法与ELISA检测法的检测结果高度吻合,检测操作便捷、检测时间短、检测费用较低,适合基层兽医站和养殖场做快速定性检测应用。     

应用猪瘟抗体免疫金标试纸检测猪瘟抗体的比较试验和改进试验

目前国内对猪瘟抗体水平检测方法有ELISA检测法,DOT—ELISA检测法、单抗ELISA检测法和猪瘟正向间接血凝法。这些方法虽然都具有微量、特异、准确的优点，但需要比较完备的实验仪器和经验丰富的技术人员，一次检测至少需要4h，对于基层兽医站、兽医诊所和养猪场不适用。猪瘟抗体免疫金标试纸的研制成功开创了猪瘟抗体水平检测的新方法，该方法操作简便，不需要任何仪器设备及复杂的样品处理，检测一个样品只需5～10min，操作简便、快速、准确、灵敏度高、直观、结果容易判定，非常适应于基层兽医站和各养猪场使用。基层兽医站和各养猪场（户）可应用猪瘟抗体免疫金标试纸进行猪瘟抗体监测。但金标试纸条是新开发的一种全新猪瘟抗体检测方法，其应用有待于继续研究，针对这种情况，试验对三种检测方法进行了比较研究，并对金标试纸条法进行了改进研究，使金标试纸条法的检测结果与其他方法的符合率达到了无显著差异的水平。     

采用不同血清学检测方法对猪蓝耳病免疫效果调查

本文采用猪蓝耳病通用型抗体ELISA检测法和猪蓝耳病通用型抗体快速检测卡检测法(胶体金法),对180份已免高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征苗的猪血样进行免疫抗体检测。结果显示,采用ELISA检测法检测的猪蓝耳病免疫抗体阳性率为82.2%;用胶体金法检测的猪蓝耳病免疫抗体阳性率为60.6%。二者相比,阳性符合率高(100%)即胶体金法抗体滴度大于1∶40以上者在ELISA法检测中为阳性;阴性符合率低即胶体金法抗体滴度大于1∶20小于1∶40之间者在ELISA法检测中也为阳性,只有小于1∶20者2种方法检测结果都为阴性。胶体金法简单,快速,易操作,可用于乡镇畜牧兽医站或养殖场的自行检测。     

猪瘟抗体胶体金快速定量检测卡的研制

应用胶体金免疫层析技术,结合胶体金定量读数仪研制出一种快速定量检测猪血清中猪瘟抗体水平的检测卡。该检测卡以胶体金标记高灵敏的猪瘟重组E2蛋白,同时在NC膜上包被同一蛋白,经正交实验确定最适条件,同时通过与对照线的颜色对比,应用胶体金定量读数仪,可对样本中猪瘟抗体水平进行定量。该检测卡检测方法简便、快速、稳定性好。与猪圆环病毒病、猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸综合征等常见猪疫病抗体均无交叉反应。检测71份猪血清样本结果与ELISA结果的符合率达90.1%。结果表明,实验研制的猪瘟抗体胶体金快速定量检测卡可用于基层兽医站和养殖企业的检测。     

猪瘟、伪狂犬、蓝耳病抗体效价快速检测试纸的临床应用

目前，国内对猪瘟抗体水平检测方法有：ELISA检测法、DOT-ELISA检测法和液体猪瘟正向间接血凝法；伪狂犬病的抗体水平检测主要有：琼脂免疫扩散试验、病毒血凝(HA)与血凝抑制(HI)试验等。这些方法虽然都具有微量、特异的优点，但需要条件较好、设备齐全的实验室和经过专门训练的兽医微生物专业技术水平较高的人员操作，一次检测至少需要4个小时。虽然近年来也有一些快速检测技术问世如：     

贵州省某猪场猪瘟病毒感染的诊断

为弄清贵州某猪场猪发病死亡的原因,采用流行病学调查、临床症状观察、病理解剖诊断、猪瘟抗体快速金标检测卡检测和RT-PCR检测核酸确诊等方法,对该猪场发病猪进行了诊断。实验结果表明:流行病学调查、剖检病理和猪瘟抗体快速金标检测卡检测初步诊断该猪场发病猪疑似猪瘟病毒感染,RT-PCR检测核酸确诊为猪瘟病毒野毒感染。     

应用间接ELISA方法监测规模化猪场猪瘟抗体水平的研究

对吉林省某规模化养猪场的不同阶段的哺乳母猪、哺乳小猪、怀孕母猪、后备母猪、保育小猪和公猪随机抽血采样,采用猪瘟病毒抗体ELISA检测试剂盒测定样品抗体水平,分析当前该猪场猪瘟流行状况,是否对免疫程序进行优化,制定出科学、适用的综合防控措施,以促进猪瘟的控制和扑灭,从而达到猪瘟净化的计划。通过实验操作结果表明:猪瘟病毒抗体ELISA检测试剂盒具有简便、快速和敏感等特性,是适合于地方规模化养猪场检测猪瘟抗体水平较好方法之一。     

猪瘟病毒抗体纳米荧光检测试纸条的临床应用

为探究猪瘟病毒抗体纳米荧光检测试纸条的临床应用效果,对181份未免疫猪瘟疫苗、71份已免疫猪瘟疫苗的临床猪血清,采用本研究试纸条和北京世纪元亨公司的ELISA试剂盒分别进行抗体检测,对4头存在母源抗体的不同免疫时间仔猪血清、不同阶段的猪血清,采用本研究试纸条进行抗体检测,并对检测结果进行分析统计。结果显示,本研究试纸条与北京世纪元亨公司的ELISA试剂盒的阴性符合率为100%,阳性符合率为95.77%,经Kappa检验两者一致性良好;初生仔猪首免后,猪瘟抗体滴度有所下降,30 d后加强免疫,抗体滴度逐渐升高,试纸条检测结果与猪瘟抗体衰减变化过程呈正相关;不同阶段猪群的猪瘟抗体阳性率均为100%,抗体平均值较高,离散度较整齐,与规模化养猪场合理免疫程序相吻合。综合表明,本试纸条的临床应用效果较好,可用于实时监控猪群的猪瘟抗体变化,适用于基层规模化猪场的猪瘟抗体快速检测。     

猪瘟病毒间接ELISA抗体检测试剂盒的临床应用研究

采用猪瘟病毒间接ELISA抗体检测试剂盒对5省/市的猪血清样本进行检测,并与进口ELISA试剂盒相比较,同时采用世界动物卫生组织(OIE)指定方法-荧光抗体病毒中和试验对检测结果有差异的血清样本进行验证,结果显示,两种试剂盒对田间临床样本的符合率为78.1%;猪瘟病毒间接ELISA抗体检测试剂盒与荧光抗体病毒中和试验的符合率高于进口ELISA试剂盒;综合免疫背景分析,猪瘟病毒间接ELISA抗体试剂盒的敏感性和特异性均高于进口试剂盒,更适合在我国进行大规模推广应用。     

家禽活疫苗中禽白血病病毒污染检测方法比较

本研究对家禽活疫苗中禽白血病病毒的不同检测方法进行了对比,通过直接ELISA检测法、RT-PCR法、病毒分离法和SPF鸡抗体检测法,对不同来源的家禽活疫苗进行了禽白血病病毒污染的检测。通过进一步测序验证发现,直接ELISA检测法和RT-PCR检测法都可出现"假阳性"。试验结果表明,病毒分离法虽然结果准确,但是操作难度大、技术要求高,而SPF鸡抗体检测法既简单、准确,又能确切反映疫苗的纯净性,利于推广应用。     

猪瘟抗体免疫金标检测试纸的妙用

目前国内对猪瘟抗体水平检测方法有：ELISA检测法，DOT－ELISA检测法和液体猪瘟正向间接血凝法。这些方法虽然都具有微量、特异的优点，但需要条件较好、设备齐全的实验室和经过专门训练、技术水平较高的人员操作，一次检测至少需要４个小时。这对于缺少仪器设备和专门技术人员的基层兽医站、养猪场，就难以开展此项工作。近年来，随着胶体金免疫层析技术及生化制备技术的发展，在人医上用胶体金免疫层析法检测血清中各种抗体已成为现实。２００１年，经过兽医工作者的努力研究，“猪瘟抗体免疫金标试纸”已研究成功，由厦门市格林沃…     

不同抗原对猪瘟病毒抗体ELISA检测效果的影响

为研究不同抗原对猪瘟病毒抗体ELISA检测效果的影响,通过原核表达获取猪瘟病毒重组E2蛋白、E0蛋白、C蛋白和NS5B蛋白,大小分别约为35 kD、42 kD、16 kD和80 kD。经Ni-NTA亲和层析柱纯化并利用BandScan软件进行计算,纯度均在90%以上,满足ELISA检测包被用原料纯度的要求。将上述4种蛋白作为包被抗原进行ELISA,以10份企业阳性质控品血清和10份企业阴性质控品血清为检验指标比较不同抗原对猪瘟病毒抗体ELISA检测效果的影响。结果以E2蛋白为原料的包被板检测质控血清时,灵敏度和特异性均达到80%以上,能够满足猪瘟病毒抗体ELISA检测的要求,故选择E2蛋白作为包被抗原并进行相关检测试剂的研制。用研制的试剂与国际知名度高、产品质量好的美国IDEXX同类试剂对432份临床猪血清进行符合性检测,结果与美国IDEXX试剂的阳性符合率为95.53%,阴性符合率为86.56%,总符合率为91.67%,两种试剂检测结果具有较高的一致性。试验表明,用E2蛋白为包被抗原对猪瘟病毒抗体进行ELISA检测的效果最好,制备的检测试剂可用于临床猪瘟病毒血清抗体的检测,为今后猪瘟病毒抗体ELISA检测试剂的进一步研制奠定了基础。     

IHA与ELISA检测猪瘟病毒抗体的比较

应用间接血凝试验(IHA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测猪瘟病毒抗体,IHA试验以1∶16为判定孔,抗体效价大于或等于1∶16为抗体阳性;ELISA试验以抗体阻断率40%为判定标准,阻断率大于或等于40%为抗体阳性,同步检测了122份规模化猪场不同阶段免疫猪血清.结果ELISA检测抗体阳性率比IHA检测抗体阳性率低,阴性、阳性相符的血清数为92份,相关性为 75.4%,不同抗体水平分布的血清数也不同,个别血清出现较大差异,卡方检验P值为0.13(＞0.05),两种检测方法统计上无差异,研究结果为选择猪瘟病毒抗体检测方法提供参考.     

用于检测猪瘟抗体的免疫金标试纸条的研制与应用研究

以猪瘟抗原包被硝酸纤维素膜的检测区，在其下端附着胶体金标记的猪瘟抗原，组成免疫金标试纸条，根据胶体金免疫层析原理，用该试纸条建立检测猪瘟抗体水平的免疫金标检测法。再用本试纸条检测法与Dot-ELISA及间接血凝法对298份猪、鸡、鸭、鹌鹑、兔、鼠、羊血清进行猪瘟抗体检测，结果符合率达100%。试验结果表明，本法与Dot-ELISA及间接血凝法一样特异、敏感和微量，而且检测时间短、直观，结果容易判定，适用于大面积猪瘟抗体监测普查。     

斑点免疫金渗滤法检测猪瘟抗体的研究

以猪瘟抗原包被硝酸纤维素膜，然后用胶体金标记SPA，建立检测猪瘟抗体水平的斑点免疫金渗滤法检测试纸盒。通过胶体金标记金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)直接显色，阳性者出现红色斑点，结果易于判断。整个试验过程仅需5min，操作简单，与猪兰耳病、猪伪狂犬病、猪细小病毒、新城疫和禽流感等阳性血清不发生交叉反应。同时将该法与目前猪瘟的常规检测方法Dot—ELISA法和间接血凝试验同时对200份猪血清进行猪瘟抗体检测比较，符合率达98．4％和98．9％。说明该法微量、特异、敏感可靠，检测时间短，效果直观，非常适用于猪瘟的早期诊断和普查以及疫苗免疫效果后抗体水平的检测。     

圆环病毒2型抗体胶体金检测试纸条的初步研制及应用

为快速检测猪群中猪圆环病毒2型抗体,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,并标记纯化的猪圆环病毒Cap蛋白和兔IgG,包被至玻璃纤维膜上制备金标垫,将纯化抗原和羊抗兔IgG分别包被至硝酸纤维素膜的检测线与质控线上,建立了检测猪圆环病毒2型抗体的胶体金免疫层析方法并组装检测卡。结果显示,组装的检测卡只与圆环病毒阳性血清发生特异性反应,阳性血清稀释10倍后仍然能够检出。用此检测卡与商品化ELISA试剂盒对100份临床血清进行平行检测,阳性率分别为89%和93%,两种方法符合率在95%以上。该方法操作简便、特异性强,可广泛应用于基层,也为圆环病毒疫苗效果评价提供了良好的试剂选择。     

猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒的比较试验

目前国内外的猪瘟ELISA抗体检测试剂盒种类繁多,为了给实际使用提供参考依据,用猪瘟病毒阴性、弱阳性、强阳性血清参考品为标尺,比较了14种国内外猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒的符合率。结果表明,6种阻断ELISA试剂盒符合率均可达到100%,在敏感性和特异性上整体优于间接ELISA试剂盒。     

猪瘟病毒E2蛋白主要抗原区高效表达及间接ELISA抗体检测方法的建立和应用

利用大肠杆菌表达猪瘟病毒E2蛋白主要抗原区,建立猪瘟病毒间接ELISA抗体检测方法。依据大肠杆菌密码子偏好性对猪瘟病毒E2基因主要抗原区的稀有密码子进行同义替换,克隆至pET-30a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3)构建重组表达菌,并将纯化重组蛋白作为抗原建立猪瘟病毒间接ELISA抗体检测的方法。对重组蛋白进行SDS-PAGE和Western blot检测,结果显示获得分子量为30 ku的重组蛋白,占细菌总蛋白的41%,与猪瘟抗体特异性反应强;间接ELISA重复性检测显示批内变异系数为3.72%,批间变异系数为4.75%;特异性检测显示,与猪圆环病毒、蓝耳病病毒、伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪流行性腹泻病毒和口蹄疫病毒的抗体阳性血清无交叉反应,并且对566份样品的临床检测结果显示与爱德仕猪瘟阻断ELISA试剂盒的阳性符合率为90.80%,阴性符合率为93.29%,总符合率为91.52%。结果表明密码子优化后E2重组蛋白实现高效表达,建立的猪瘟病毒间接ELISA抗体检测方法成本低、准确率高,可进一步开发应用。     

三种猪瘟抗体检测方法的比对试验

为找到猪瘟抗体检测的最佳方法,笔者分别选用正向间接血凝试验(IHA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和猪瘟抗体免疫金标试纸条快速检测试验这3种不同方法对猪瘟抗体进行检测,从检测方法、检测成本和准确度3个方面进行结果比较和分析。结果表明,猪瘟正向间接血凝反应(IHA)试剂盒操作简便、准确实用、能最大程度地节约监测成本,是较为理想的猪瘟抗体检测方法。     

规模化猪场猪瘟免疫程序的研究与探讨

以猪瘟纯化病毒抗原和酶标葡萄球菌A蛋白探索建立了检测猪瘟病毒抗体的PPA－ELISA方法，经检验本法有较高的特异性和敏感性，通过ELISA检测，证实了猪瘟母源抗体的半衰期大致为2周，仔猪超前免疫有其科学性，对规模化猪场猪瘟免疫程序进行了研究和探讨，同时未试验也证明ELISA与IHA检测结果具较高相关性。