波尔山羊胚胎移植奶山羊应用技术研究

1999～2000年,在成都波尔山羊种羊场进行了波尔山羊胚胎移植奶山羊应用技术研究.对12只供体用FSH减量法进行超排处理,回收胚胎257枚,平均21.4±11.1枚,其中可用胚206枚,平均17.2±8.33枚.将170枚可用胚移植给同期发情的78只雅安奶山羊受体,其中2只在妊娠2个月后流产,49只受体羊妊娠到期产下纯种波尔山羊羔88只,移植受体妊娠率65.4%(51/78),产羔受体比率62.8%(49/78),胚胎成羔率51.8%(88/170).平均每只波尔山羊供体通过胚胎移植增加纯种后代7.33只.其中RB52号波尔山羊获16枚胚胎,移植给8只奶山羊(双胚),全部妊娠,产下13只纯种波尔山羊,胚胎成羔率达81.3%.结果表明,波尔山羊胚胎移植奶山羊能获得较高的妊娠率和胚胎成羔率,已可从研究阶段发展到产业化应用.     

安哥拉山羊胚胎的手术回收和移植

对３５只安哥拉山羊超排处理，配种后第３天放置阴道海绵栓，第６日由子宫手术回收胚胎。３１只发情配种的供体，共回收胚胎２０４枚，平均每只供体获可用胚４．３±３．９６枚。其中卵巢有功能黄体无大卵泡的６只供体，回收胚胎５１枚，回收率为８７．１５％±１５．９８％，平均每只获可用胚８．１±２．９６枚。卵巢上有大卵泡、或子宫及输卵管有病变者可使回收率和可用胚胎数严重降低。由于配种后放置了阴道栓，８只有黄体退化倾向的供体，平均每只仍获得可用胚４．６枚。移植桑椹胚和囊胚的５１只受体，３６只妊娠，妊娠率为７０．６％．移植４～１６细胞胚胎的对照组，妊娠率为５１．６％．本研究还证明，移植单胚较移植双胚的胚胎成羔率提高２８％以上     

杜泊羊冷冻胚胎移植的影响因素

为进一步提高杜泊羊的冻胚移植成功率,于春秋两季同期处理湖羊和小尾寒羊受体共997只(次),同期发情782只(次),发情率达78.4%,其中湖羊春秋两季平均发情率为84.6%,显著高于小尾寒羊(73.9%)(P＜0.01),秋季两品种平均发情率83.3%,显著高于春季75.8%(P＜0.01);对431只发情受体羊进行移植,总妊娠率为58.5%(252/431),产羔率为58.0%(250/431).其中湖羊为受体的春秋两季平均妊娠率62.5%,高于小尾寒羊(54.7%);秋季两品种的平均妊娠率为64.8%,显著高于春季(52.5%).囊胚移植后的平均妊娠率为61.5%,显著高于桑椹胚(41.5%),其中A级囊胚为67.4%,显著高于B级囊胚(P＜0.05)和所有桑椹胚(P＜0.01);B级囊胚显著高于B级桑椹胚(P＜0.05),B级囊胚与A级桑椹胚间及A、B级桑椹胚间均无显著差异;C级囊胚和桑椹胚均未见妊娠.此外,受体羊卵巢黄体发育状况及移植技术熟练程度对妊娠率也有显著影响.     

山羊鲜胚及冻胚移植

经超排处理获黑山羊3日龄新鲜胚眙12枚,分别移植到同期发情的6只白色受体羊,其中2只妊娠,产羔3只,受体妊娠率为33.3‰(2/6),鲜胚移植成功率25.0%(3/12)。7日龄山羊冷冻胚胎35枚,分别移植到同期发情的18只浏阳黑山羊和白色马头山羊受体母羊,其中7只妊娠,受体妊娠率为38.89%(7/18)。产活羔10只,流产1只,冻胚移植成功率31.43%(11/35)。     

特克赛尔肉羊胚胎移植效果

2003～2005年,共同期发情处理特克赛尔供体母羊60只,发情58只,同期发情率达96.67%;同期发情处理受体母羊337只,发情325只,同期发情率达96.44%。2003年超排处理特克赛尔供体母羊14只,查黄体142个,采用输卵管冲胚技术回收卵137枚,回收率96.48%,可用胚126枚,移植鲜胚126枚,移植受体羊97只,受胎率56.7%。2004～2005年超排处理特克赛尔供体母羊46只,查黄体485个,采用子宫冲胚技术回收卵403枚,回收率83.09%,有效胚327枚,移植鲜胚217枚,鲜胚移植受体羊186只,受胎率54.92%;制作冻胚110枚,移植冻胚104枚,冻胚移植受体羊80只,未返情受体羊数41只,受胎率51.25%。     

德肉美肉羊胚胎移植效果研究

2003—2005年,同期发情处理德肉美供体母羊60只,发情59只,同期发情率达98.33%;同期发情处理受体母羊385只,发情369只,同期发情率达95.84%。2003年超排处理德肉美供体母羊14只,查黄体145个,采用输卵管冲胚技术回收卵138枚,回收率95.17%,可用胚127枚,移植鲜胚127枚,移植受体羊100只,受胎率57%。2004—2005年超排处理德肉美供体母羊46只,查黄体492个,采用子宫冲胚技术回收卵398枚,回收率80.89%,有效胚318枚,移植鲜胚208枚,鲜胚移植受体羊186只,受胎率55.91%;制作冻胚110枚,移植冻胚100枚,冻胚移植受体羊80只,未返情受体羊数42只,受胎率51.50%。     

不同品种受体对波尔山羊胚胎移植效果的研究

将2127枚波尔山羊胚胎移植给1182只受体,移植单胚、双胚、3胚和4胚时的受体妊娠率分别为60.2%(171/ 284)、62.7 %(540/ 862)、64.0 %(16/ 25)和54.6 %(6/ 11),胚胎成羔率分别为60.2 %(171/ 284)、51.6 %(890/ 1724)、41.3 %(31/ 75)和36.4 %(16/ 44).各品种受体移植单胚时妊娠率和胚胎成羔率均无显著差异(P＞0.05),移植双胚的奶山羊受体胚胎成羔率显著高于成都麻羊和简阳大耳羊(P＜0.05),而南江黄羊低于奶山羊、高于成都麻羊和简阳大耳羊,但差异不显著(P＜0.05).受体羊卵巢上黄体数量对受体妊娠率和胚胎成羔率无明显影响,但随着黄体体积变小,胚胎成羔率逐渐下降.     

小型农牧场及农户波尔山羊胚胎移植关键技术研究

从小型农牧场及农户特点出发,探讨在这些场(户)进行波尔山羊胚胎移植时,供体超数排卵、受体同期发情、供受体羊胚胎回收和移植操作等关键技术对胚胎移植效率的影响。结果表明,调整供、受体母羊的发情周期并采用优化超排程序和同期发情程序,可获得理想的超排和同期发情结果,有效手术供体回收卵数平均达到(17.31±6.93)枚,可用胚(14.96±6.28)枚;受体同期发情率达到94.28%(2125/2254),手术受体利用率为86.55%(1602/1851)。严格而熟练的手术操作可提高供体利用次数,获得理想的胚胎移植结果,将2648枚胚胎移植给1602只受体后,妊娠率达到66.85%(1071/1602),其中1044只受体妊娠足月,产羔1320只。     

供体母羊及与配公羊个体对波尔山羊胚胎移植效率的影响

对135只波尔山羊供体母羊进行超排处理,回收卵总数2504枚,平均18.55±7.63枚,其中可用胚2182枚,平均16.16±7.46枚.将2127枚鲜胚移植给1182只受体,妊娠率为63.03%(745/1182),移植胚胎成羔率为52.1%(1108/2127).试验结果表明,供体各个体之间所获得的胚胎移植成羔率存在着显著差异(P＜0.05),胚胎成羔率大于80%的供体平均每只获胚胎移植羔羊14.8±4.27只,胚胎成羔率小于20%的供体平均每只获胚胎移植羔羊1.83±1.17只,其中个体获得羔羊最多的为21只(21/26).有9.63%的供体胚胎移植成羔率大于80%,有4.44%的供体胚胎移植成羔率小于20%.14只公羊配种的135只供体获得的胚胎可用率同样存在着显著差异(P＜0.05).     

FSH剂量、受体品种及移植胚胎数对崇明白山羊胚胎移植效率的影响

为提高崇明白山羊的繁殖效率,用促卵泡素（Follicle-Stimulating Hormone,FSH）对崇明白山羊进行超数排卵,回收2～4细胞期胚胎移植至同期发情受体的输卵管,跟踪受体妊娠和产羔结果,比较不同FSH剂量时的超排结果,比较受体品种和移植胚胎数对妊娠率和产羔率的影响。试验结果为：（1）对于体重在20～30 kg的崇明白山羊,FSH的最佳超排剂量为240 U,每头次超排平均可获得可用胚胎10.06枚。（2）每只受体均移植2枚胚胎时,徐淮山羊的早期妊娠率为56.44%（57/101）,高于崇波杂交羊组（崇明羊与波尔羊的杂交后代）47.62%（10/21）和徐波杂交羊组（徐淮羊与波尔羊的杂交后代）46.93%（23/49）,但各组间早期妊娠率差异均不显著。（3）移植4枚胚胎时,妊娠率为60.00%（12/20）、产羔率为1.75,均高于移植2枚胚胎组的52.82%（75/142）和1.30。而移植4枚时胚胎的得羔率为26.25%（21/80）,低于移植2枚胚胎组的33.25%（141/424）。这表明,移植4枚胚胎可以提高受体妊娠率和产羔率,但降低了胚胎利用率。     

绵羊体外受精囊胚玻璃化冷冻保存的研究

以常规的慢速冷冻法为对照,研究了玻璃化冷冻法保存绵羊体外受精囊胚的效果.对于绵羊体外受精囊胚,两种冷冻方法间的囊胚存活率没有明显差异,但玻璃化冷冻组的囊胚孵化率显著高于慢速冷冻法组(分别为76.8%和41.0%,P＜0.05).将冷冻解冻后的绵羊囊胚移植后,玻璃化冷冻组的怀孕率和产羔率明显高于慢速冷冻法的.同时比较了绵羊体外受精囊胚细胞取样后,经不同时间培养后的玻璃化冷冻保存效果.囊胚取样后培养2 h或5 h,胚胎冷冻解冻后的存活率和孵化囊胚率显著高于对照组(分别为75.0%、50.0%,78.8%、69.7%和41.2%、26.5%,P＜0.05).培养10h后,胚胎冷冻解冻后的存活率和孵化囊胚率有所降低.结果表明,应用玻璃化冷冻法可以较好的冷冻保存绵羊体外受精囊胚及切割取样后的囊胚,绵羊体外受精囊胚切割取样后,经过2～5h时的恢复培养可以提高其抗冻能力.     

牛-兔种间重组胚体外发育能力的研究

 以超排的青年母兔和经产母兔卵母细胞为受体细胞,以处于休眠期和非休眠期的黑毛和牛耳成纤维细胞为核供体,共获得180枚种间重组胚,采用M199+10%FBS和RD+10%FBS2种培养液进行体外培养,有112枚发育到2-细胞期(62.2%),26枚发育到桑椹胚期(14.4%),20枚发育到囊胚期(11.1%)。结果显示,供体细胞处于休眠期与否,对重组胚的卵裂率无显著影响(P<0.05),但以休眠期细胞为核供体的重组胚8-细胞～16-细胞胚的发育率及桑椹胚发育率显著高于非休眠期细胞的重组胚(P<0.05),二者在     

不同因素对西藏阿旺绵羊胚胎冷冻与移植效果的影响

为探究西藏阿旺绵羊推行胚胎移植及胚胎冷冻技术的可行性,以阿旺绵羊为供体,澳湖羊为受体,探讨发情期内不同月份对阿旺绵羊超排效果的影响、不同发育阶段鲜胚和移植数量对母羊受胎率及产羔率的影响,以及冷冻方法对胚胎移植的影响。结果显示：发情期7月超排组平均可用胚数(3.95±4.23)显著低于10月超排组(5.45±4.03);阿旺绵羊胚胎移植2枚桑椹胚的受体妊娠率最高,达到81.81%,产羔率达57.58%,具有显著性差异;阿旺绵羊胚胎程序化冷冻组受体妊娠率为35.48%,显著优于玻璃化冷冻组受体妊娠率13.63%。以上结果表明,西藏推行阿旺绵羊胚胎移植技术的可行性较高。     

山羊（Bore）-兔异种克隆胚胎连续核移植的研究

 以山羊-兔异种克隆桑椹胚卵裂球为核供体，兔卵母细胞为受体进行连续核移植研究，最终连续2次，共获得继Ⅰ代重构胚58枚，继Ⅱ代重构胚14枚。融合率分别为79.5%和70%，差异不显著（P>0.05）卵裂率分别为75.9%和28.6%,差异显著（P<0.05）。但继Ⅱ代重构胚最终未能发育至囊胚，继Ⅰ代重构胚囊胚率达到10.2%。     

程序化冷冻对小鼠胚胎发育的影响

取小鼠原核(220枚)、2～4细胞胚胎(227枚)、桑椹胚(127枚),将其分为3组,每一时期胚胎分成两半,一半取出后立即冷冻复苏并体外培养至囊胚,另一半体外培养至囊胚后冷冻复苏,子宫冲取囊胚(78枚)冷冻复苏为对照组;各组囊胚均移植至于宫,比较程序化冷冻对小鼠早期胚胎存活率的影响.结果表明:原核、2～4细胞胚胎、桑椹胚体外培养至囊胚后冷冻复苏率分别为56.4%、72.2%、81.6%,移植产仔率分别为38.1%、41.6%、56.8%,原核、2～4细胞组复苏率和产仔率极显著或显著低于对照组,桑椹胚组与对照组差异不显著,显示体外培养对早期胚胎冷冻存活有影响;原核、2～4细胞胚胎、桑椹胚冷冻后体外培养至囊胚,胚胎移植后产仔率分别为25.3%、28.2%、42.1%,与对应胚胎时期体外培养至囊胚冷冻复苏后移植产仔率相比,原核、2～4细胞组均存在显著差异,而桑椹胚组差异不显著,显示原核、2～4细胞的早期胚胎体外培养至囊胚后冷冻可提高冷冻存活率.     

无角道塞特绵羊超数排卵技术研究

采用国内不同厂家生产的促卵泡刺激素(FSH)和加拿大进口的FSH,进行了无角道塞特母羊超排 处理,对不同给药方式、首次超排与重复超排、经产羊与青年羊、春季超排与秋季超排、自然发情与诱导发情及未知 发情周期的超排效果进行了对比研究,同时研究了母羊卵巢黄体退化、有无卵泡及推迟发情对超排效果的影响。结 果表明,加拿大进口FSH的超排效果最好,国产FSH以宁波+中科院激素组合的超排效果较好;重复超排对超排 效果无显著影响;经产羊的超排效果优于青年羊;自然发情母羊的超排效果优于诱导发情母羊和未知发情周期母 羊;黄体退化母羊回收可用胚的数量明显较低;卵巢上有无卵泡对超排效果无影响;推迟发情母羊的超排效果明显 低于正常发情母羊。     

卵母细胞体外成熟时间对绵羊核移植效率的影响

[目的]为绵羊克隆试验中卵母细胞的体外成熟及去核时间提供参考。[方法]利用盲吸法结合荧光显微镜检查,对绵羊不同成熟时间卵母细胞去核的效率及其后续重构胚的发育进行对比。[结果]体外成熟培养19~21 h的绵羊卵母细胞在成熟率上显著高于体外成熟培养16~18 h(P(0.05),在去核成功率上显著高于体外成熟培养22~24 h(P(0.05);3个试验组在卵裂率、囊胚率上差异不显著(P(0.05),但是体外成熟培养19~21 h的试验组囊胚平均细胞数要显著高于其他2组(P(0.05)。[结论]体外成熟培养19~21 h的卵母细胞较适于作为受体细胞进行绵羊核移植,可以显著提高囊胚的质量。     

秦川牛胚胎冷冻保存效果

为探明秦川牛胚胎冷冻保存技术的可行性,将48头秦川牛母牛进行多次超数排卵处理、人工授精,并于授精后第7天非手术法获得胚胎,把获得的A级胚用不同浓度甘油(1.0~5.0 mol/L)和乙二醇(1.0~5.0mol/L)进行处理,并采用常规冷冻法和快速冷冻法进行冷冻,解冻后进行体外培养和不同发育阶段胚胎(桑椹胚、囊胚和扩张囊胚)移植,统计其存活率、孵化率和妊娠率等。结果表明:秦川牛7日龄胚胎能耐受甘油的浓度为2.0~4.0mol/L,乙二醇为1.0~3.0mol/L;常规冷冻法解冻后胚胎的存活率和孵化率显著(P0.05)高于快速冷冻法,胚胎移植妊娠率和产犊率差异不显著(P0.05);常规冷冻桑椹胚的冻后存活率、孵化率极显著(P0.01)低于囊胚和扩张囊胚,移植妊娠率和产犊率显著(P0.05)低于囊胚和扩张囊胚。     

影响绵羊、山羊超数排卵及胚胎移植效果因素分析

在生产条件下，对3个优良品种的127只绵羊（道塞特47只、萨福克49只、杜泊31只）和111只波尔山羊供体使用不同国别生产的促卵泡素（FSH）实施超数排卵处理，然后对1231只小尾寒羊和奶山羊受体实施不同方法的胚胎移植，旨在筛选出切合于生产实际成本低、效率高的超数排卵和胚胎移植方案。实验结果表明，使用新西兰产FSH对波尔山羊超数排卵后平均获得可用胚胎14枚／只，显著高于澳大利亚产FSH效果（平均7．59枚／只）（P〈0．05）．而中国科学院产FSH的超排效果（平均10．38枚／只）与新西兰产无显著性差异（P〉0．05）；进一步采用中国科学院产和新西兰产FSH分别对道塞特、萨福克和杜泊3个品种绵羊实施超数排卵结果，获得平均可用胚胎数均无显著性差异（P〉0．05）；使用腹腔内窥镜法和常规手术法胚胎移植结果表明，移植妊娠率分别为57．44％和60．20％．2种方法间无显著性差异（P〉0．05）。由于中国科学院产FSH价格便宜，而腹腔内窥镜法胚胎移植可大大缩短操作时间，两者结合可降低成本、提高效率，适宜羊胚胎移植产业化应用。