牛兔异种体细胞以兔卵母细胞为核受体的牛体细胞克隆研究

随着同种动物克隆后代的不断降生,人们又开始尝试异种动物体细胞核移植。用兔的卵母细胞作为核受体进行牛的体细胞核移植,研究表明,颗粒细胞作为供核体与兔去核卵母细胞的融合率(60.5%,57.9%)稍高于皮肤成纤维细胞的融合率(52.2%,48.4%),但两者间差异并不显著。颗粒细胞与皮肤成纤维细胞均采用饥饿培养和接触抑制培养两种不同的方式进行诱导处理,融合卵在电激活后能够卵裂并发育的情况差异显著(72.6%对51.4%;70.4%对52.2%)。有少数重构胚发育至囊胚,证明在哺乳动物异种重构胚早期发育中,异种细胞核与细胞质间是相容的。     

胚胎干细胞在动物克隆中的应用

自Ｅｖａｎｓ和Ｋａｕｆｍａｎ(1981)从延迟着床的胚胎中分离出小鼠胚胎干细胞 (ｅｍｂｒｙｏｎｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓ,ＥＳ细胞 )以来 ,ＥＳ细胞一直备受人们的关注〔1〕。 1998年 ,由基隆公司资助的汤姆森研究小组在《科学》杂志上发表了关于人的ＥＳ细胞建立等一系列工作之后 ,基隆公司的股票更是狂升了 6倍 ;1999年、2 0 0 0年 ,干细胞研究两度被美国《科学》杂志推举为2 1世纪最重要的研究领域 ;1999年 ,美国《科学》杂志还将干细胞研究评为当年世界十大科学成就之首。由此足以显示干细胞的魅力 ,而干细胞之所以如此吸引人们的注意 ,…     

山羊（Bore）-兔异种克隆胚胎连续核移植的研究

 以山羊-兔异种克隆桑椹胚卵裂球为核供体，兔卵母细胞为受体进行连续核移植研究，最终连续2次，共获得继Ⅰ代重构胚58枚，继Ⅱ代重构胚14枚。融合率分别为79.5%和70%，差异不显著（P>0.05）卵裂率分别为75.9%和28.6%,差异显著（P<0.05）。但继Ⅱ代重构胚最终未能发育至囊胚，继Ⅰ代重构胚囊胚率达到10.2%。     

牛兔异种体细胞以兔卵母细胞为核受体的牛体细胞克隆研究

随着同种动物克隆后代的不断降生,人们又开始尝试异种动物体细胞核移植。用兔的卵母细胞作为核受体进行牛的体细胞核移植,研究表明,颗粒细胞作为供核体与兔去核卵母细胞的融合率(60.5%,57.9%)稍高于皮肤成纤维细胞的融合率(52.2%,48.4%),但两者间差异并不显著。颗粒细胞与皮肤成纤维细胞均采用饥饿培养和接触抑制培养两种不同的方式进行诱导处理,融合卵在电激活后能够卵裂并发育的情况差异显著(72.6%对51.4%;70.4%对52.2%)。有少数重构胚发育至囊胚,证明在哺乳动物异种重构胚早期发育中,异种细胞核与细胞质间是相容的。     

牛-兔种间重组胚体外发育能力的研究

 以超排的青年母兔和经产母兔卵母细胞为受体细胞,以处于休眠期和非休眠期的黑毛和牛耳成纤维细胞为核供体,共获得180枚种间重组胚,采用M199+10%FBS和RD+10%FBS2种培养液进行体外培养,有112枚发育到2-细胞期(62.2%),26枚发育到桑椹胚期(14.4%),20枚发育到囊胚期(11.1%)。结果显示,供体细胞处于休眠期与否,对重组胚的卵裂率无显著影响(P<0.05),但以休眠期细胞为核供体的重组胚8-细胞～16-细胞胚的发育率及桑椹胚发育率显著高于非休眠期细胞的重组胚(P<0.05),二者在     

不同因素对牛-兔种间重构卵融合率的影响*

研究了用不同方法处理的核供体细胞(休眠期和非休眠期的体细胞、4℃冷藏1～5 d或12～14 d的体细胞)、融合液中加入细胞松弛素B(cytochalasin B,CB)以及卵供体兔龄等因素对牛-兔种间重构卵融合率的影响.结果发现,以休眠期或非休眠期的体细胞作核供体,其融合率和在融合过程中的死卵率均无显著差异(P＞0.05);将核供体细胞(休眠期或非休眠期的体细胞)在4℃冷藏1～5 d或12～14 d,与新鲜的核供体细胞相比,对重构卵的融合率和在融合过程中的死卵率无显著影响(P＞0.05);在融合液中加入CB后对融合率无明显影响(P＞0.05),但在融合过程中死卵率显著升高(P＜0.05);用青年兔(3～5月龄)的卵母细胞作受体与用经产兔(10～12月龄)的相比,其融合率无显著差异(P＞0.05),但在融合过程中,用青年兔卵母细胞作受体的重组卵的死卵率极显著低于用经产兔卵作受体的重组卵(P＜0.01).     

异种动物核移植研究进展

异种核移植作为新型发展起来的动物繁殖技术 ,在畜牧生产、医学、生物学领域愈来愈表现出其巨大的价值。人们以前已经进行了一系列的探索 ,如在供体细胞方面 ,人们尝试使用了包括肝脏细胞、乳腺细胞在内的各种类型的细胞 ,并采取各种措施处理供体细胞 ;而对于受体细胞多采用卵泡 -卵丘复合体进行体外培养或通过超排获得 ;比较各种融合方法 ,目前多采用电融合方法 ,也较化学融合、病毒介导融合等方法简单 ;至于重构胚的培养则多采用培养液体外培养的方法 ,此方法操作简单 ,也比较容易观察记录实验过程。同时也指出异种核移植仍存在如克隆的效率很低等一系列急待解决的问题     

牛、羊成纤维细胞的冷冻与冷藏保存

以体外培养的布尔山羊和黄牛耳组织成纤维细胞为研究对象 ,进行了哺乳动物体细胞的冻存与冷藏试验。结果表明 ,牛、羊的耳成纤维细胞在液氮中冻存 4 8h或冷藏 19d(4℃ )后再接种培养 ,仍能正常贴壁与生长。本试验筛选出一种简单易行的细胞冻存方案。     

关于成纤维细胞培养的几点体会

动物细胞培养是动物细胞工程的一项基本技术,它是细胞融合、细胞拆合、细胞凋亡研究、染色体导入和基因转移等项技术的基础。同时动物的细胞还是医学研究尤其是肿瘤学研究的极其重要的材料。因此做好细胞培养就显得至关重要。下面,笔者就成纤维细胞培养,谈谈自己的体会。1成纤维细胞培养方法成纤维细胞的培养可以采用组织块培养法和消化培养法,消化培养法可以在较短时间内获得大量细胞,但其操作比较繁琐,污染机会较大,因此如果在时间允许的情况下,多采用组织块培养法获取细胞。目前组织块培养法一般操作程序是:对组织块先采用粗切,再使用细…