杜泊绵羊冷冻胚胎移植

介绍了从新西兰引进的冷冻杜泊羊胚胎解冻后移植到同期发情湖羊和小尾寒羊母羊受体的方法步骤,并分析、评价了胚胎移植的效果。结果表明:受体羊总平均同期发情率为78.4%,胚胎移植利用率达49.1%,妊娠率达59.4%,产羔率达58.0%,羔羊出生重为4.7 kg(公)和4.3 kg(母),羔羊1月龄和3月龄体重分别为14.9kg和32.4 kg;不同批次和不同品种受体间胚移效果亦存在不同程度的差异;4批次试验共移植冷冻胚胎475枚,产羔266只,现存活245只。该研究建立了可靠而有效的杜泊绵羊冷冻胚胎移植技术,有望在畜牧业科研和生产中广泛推广应用。     

品种和超排时间对羊胚胎移植效果的影响

对白萨福克、东弗里生、特克萨尔和陶塞特4个绵羊品种和不同季节超排结果比较表明：（1）品种的繁殖特性是影响超排和鲜胚移植效果的主要因素,白萨福克和东弗里生羊是繁殖季节较长、对激素反应敏感、鲜胚移植产羔率较高、非常适合作为供体羊进行胚胎移植的绵羊品种。（2）超排季节对胚胎移植效果的影响主要表现在供体羊对激素的敏感性反应和胚胎质量等方面。在繁殖季节超排,供体羊对激素的敏感性、产羔质量和可用胚率均高于非繁殖季节,但对鲜胚移植产羔率影响不大。（3）4个品种两批共采集可用胚370枚,移植受体羊315只,受体产羔率74．6％。移植胚胎产羔率69．5％。     

绵羊胚胎冷冻保存及移植的研究

本研究的目的在于建立绵羊胚胎的慢速冷冻和玻璃化快速冷冻保存方法,为绵羊胚胎移植技术应用于生产提供保证。结果:慢速冷冻保存,解冻后正常胚胎占72％,移植受体的受胚率33％、产羔率66％。玻璃化快速冷冻保存,解冻后正常胚胎率亦达72％,移植受体3只,产羔4只。     

FSH剂量、受体品种及移植胚胎数对崇明白山羊胚胎移植效率的影响

为提高崇明白山羊的繁殖效率,用促卵泡素（Follicle-Stimulating Hormone,FSH）对崇明白山羊进行超数排卵,回收2～4细胞期胚胎移植至同期发情受体的输卵管,跟踪受体妊娠和产羔结果,比较不同FSH剂量时的超排结果,比较受体品种和移植胚胎数对妊娠率和产羔率的影响。试验结果为：（1）对于体重在20～30 kg的崇明白山羊,FSH的最佳超排剂量为240 U,每头次超排平均可获得可用胚胎10.06枚。（2）每只受体均移植2枚胚胎时,徐淮山羊的早期妊娠率为56.44%（57/101）,高于崇波杂交羊组（崇明羊与波尔羊的杂交后代）47.62%（10/21）和徐波杂交羊组（徐淮羊与波尔羊的杂交后代）46.93%（23/49）,但各组间早期妊娠率差异均不显著。（3）移植4枚胚胎时,妊娠率为60.00%（12/20）、产羔率为1.75,均高于移植2枚胚胎组的52.82%（75/142）和1.30。而移植4枚时胚胎的得羔率为26.25%（21/80）,低于移植2枚胚胎组的33.25%（141/424）。这表明,移植4枚胚胎可以提高受体妊娠率和产羔率,但降低了胚胎利用率。     

无角道塞特羊胚胎移植技术研究

(1)超排处理无角道塞特绵羊163只,育成羊(76只)只均回收胚胎5.53枚,可用胚3.91枚,经产母羊(87只)只均回收胚胎7.55枚,可用胚6.34枚。经产羊平均回收胚胎总数高于育成羊(P<0.05)。春季和秋季之间超排效果差异不明显。重复超排羊和非重复超排羊之间平均回收胚胎总数和可用胚胎数差异均不显著(P>0.05)。(2)共处理受体876只,春季和秋季受体的同期发情率分别为56.37%和89.02%,发情受体利用率分别为84.67%和88.77%。(3)移植受体545只,妊娠318只,产羔396只,受体移植妊娠率为58.35%,移植胚胎成羔率为57.47%,在移植受体中,小尾寒羊的妊娠率最高为61.2%,同羊和内蒙细毛羊分别为54.62%和56.58%,受体品种之间移植妊娠率差异不显著(P>0.05)。受体黄体数对移植妊娠率及胚胎成羔率有一定的影响。胚胎的发育阶段对移植妊娠率也有影响,移植囊胚受体妊娠率最高为64.76%,明显高于早期桑椹胚移植妊娠率42.86%(P<0.05)。胚胎成羔率从桑椹胚到囊胚差异不显著(P>0.05)。     

鲁西黄牛超数排卵与冻胚移植

1990～1991年按鲁西黄牛超排技术程序,用 FSH+PGF_(2α)对11头鲁西黄牛进行超排处理,有效率为100%。共获卵119枚,其中可用胚92枚,胚胎可用率为77.3%。按鲁西黄牛胚胎冷冻解冻技术程序,以甘油作冷冻保护剂,对 A、B 级胚胎进行常规冷冻。解冻33枚,27枚可用,解冻恢复率为81.8%。将23枚可用胚移植23头受体,90天妊检,13头妊娠,妊娠率为56.5%。     

体细胞克隆牛超排胚胎玻璃化冷冻及移植试验

 对体细胞克隆牛进行了超数排卵、胚胎玻璃化冷冻及胚胎移植试验。首先对体外受精卵进行了玻璃化冷冻保存试验,结果表明,体外受精囊胚经过EPS10和EPS20 的TCM-199液玻璃化冷冻-解冻后胚胎形态正常率和发育率各组间差异不显著,囊胚孵出率EPS20组为31.3% (35/112)极显著高于EPS10组的12.2% (13/107)（P＜0.01）,选择玻璃化冷冻液EPS20作为体细胞克隆牛超排采卵获得胚胎的冷冻保存液。本试验对体细胞克隆牛"康康"和"双双"进行了超排试验,分别获得6枚（4枚可用胚）和10枚（9枚可用胚）胚胎,各取2枚1级胚胎应用EPS20玻璃化液进行玻璃化冷冻,解冻后分别移植到4头同期发情处理的中国荷斯坦奶牛的黄体侧子宫角内,结果为1头9908号受体母牛妊娠,并且产下1头健康的体细胞克隆牛"双双"的胚胎移植后代。试验结果表明,①体细胞克隆牛与正常牛一样对外源激素（FSH）具有较好的应答能力和超数排卵的能力;②体细胞克隆牛的胚胎可用于玻璃化冷冻保存。     

奶山羊冻胚长期保存长途运输和移植试验

用ＲＰＥ简易冷冻器快速冷冻６－７日龄萨能奶山羊胚胎。将在液氮中冻存１２－８１９ｄ的胚胎用液氮罐经汽车或火车运至外地，并把解冻后的７３枚胚胎移植给３８只当地山羊。受体妊娠率为６０．５％，移植胚产羔率为３９．７％，胚胎冻存１２－２１，１９８－２６５，３２０－４８０和６８７－８１９ｄ时，移植产羔率分别为３８．５％，４５．８％，４１．７％和２５．０％。各冻存期间差异不显著（Ｐ＞０．０５）。     

奶山羊冻胚长期保存长途运输和移植试验

用ＲＰＥ简易冷冻器快速冷冻６～７日龄萨能奶山羊胚胎。将在液氮中冻存１２～８１９ｄ的胚胎用液氮罐经汽车或火车运至外地，并把解冻后的７３枚胚胎移植给３８只当地山羊。受体妊娠率为６０．５％，移植胚产羔率为３９．７％。胚胎冻存１２～２１，１９８～２６５，３２０～４８０和６８７～８１９ｄ时，移植产羔率分别为３８．５％，４５．８％，４１．７％和２５．０％。各冻存期间差异不显著（Ｐ＞０．０５）．     

绵羊胚胎移植产业化技术应用研究

为了进一步提高绵羊胚胎移植的产业化水平,对绵羊胚胎移植过程中的发情鉴定技术、供体和受体发情同期化调控技术、供体羊配种方法、超数排卵技术、输卵管胚胎移植技术等关键技术进行了进一步研究改进。在此基础上进行了推广验证,结果表明:绵羊每只每次超排平均获得可用胚胎8.1枚;绵羊胚胎移植受胎率60.5%;产羔率56.0%。这一结果比国家“十五”期间的“万枚胚胎工程”产羔率提高了10%,进一步提高了绵羊胚胎移植的产业化水平。     

波尔山羊胚胎移植技术及应用效果研究

采用CIDR+FSH方法,对66只周岁波尔山羊进行超数排卵处理,63只超数排卵有效,有效率达到95.45%;平均每只羊冲取胚胎15.35枚,其中最高个体获得胚胎43枚。采用CIDR+PMSG方法对本地山羊进行同期发情处理,24h内发情率达到87.67%。对受体羊单胚移植后,两个情期的不返情率达62.76%,实际产羔率为51.46%。受体羊与供体羊的发情时间同步、晚12h、晚24h,胚胎移植受胎率差异不大,受体羊第二次手术与第一次手术移植对产羔率影响不大。     

不同处理方法对波尔山羊胚胎移植效果的影响

为了提高波尔山羊繁殖力,应用两种处理方法对波尔山羊进行了同期发情及超数排卵研究。结果表明:两种处理方法(PG-FSH法与CIDR-FSH法)对波尔山羊的同期发情率无显著差异(P>0.05),波尔山羊同期发情率达到92.5%;CIDR-FSH法处理的供体卵巢上的平均黄体数及平均采卵数均显著高于(P<0.05)PG-FSH法,而两者的平均获胚数与平均可用胚数差异不显著(P>0.05),说明CIDR-FSH法对波尔山羊的超排处理效果要优于PG-FSH法。试验还表明,移胚数量对受体妊娠率无显著影响(P>0.05),而对受体产羔率有极显著(P<0.01)的影响。移植双胚可以提高受体的产羔率。     

绵羊体外受精囊胚玻璃化冷冻保存的研究

以常规的慢速冷冻法为对照,研究了玻璃化冷冻法保存绵羊体外受精囊胚的效果.对于绵羊体外受精囊胚,两种冷冻方法间的囊胚存活率没有明显差异,但玻璃化冷冻组的囊胚孵化率显著高于慢速冷冻法组(分别为76.8%和41.0%,P＜0.05).将冷冻解冻后的绵羊囊胚移植后,玻璃化冷冻组的怀孕率和产羔率明显高于慢速冷冻法的.同时比较了绵羊体外受精囊胚细胞取样后,经不同时间培养后的玻璃化冷冻保存效果.囊胚取样后培养2 h或5 h,胚胎冷冻解冻后的存活率和孵化囊胚率显著高于对照组(分别为75.0%、50.0%,78.8%、69.7%和41.2%、26.5%,P＜0.05).培养10h后,胚胎冷冻解冻后的存活率和孵化囊胚率有所降低.结果表明,应用玻璃化冷冻法可以较好的冷冻保存绵羊体外受精囊胚及切割取样后的囊胚,绵羊体外受精囊胚切割取样后,经过2～5h时的恢复培养可以提高其抗冻能力.     

非繁殖季节太行山羊胚胎移植方案研究

对48只太行山羊(供体羊)、40只布尔山羊和120只唐山奶山羊(受体羊)进行了同期发情、超数排卵和胚胎移植试验.试验结果表明:CIDR+PMSG组对布尔山羊同期发情,有效发情率为75%;CIDR+FSH组对唐山奶山羊同期发情,有效发情率为73%;CIDR+FSH+LH组平均可用胚胎数与CIDR+PMSG组和CIDR+PMSG+LH组差异均达到极显著水平(P<0.01),与CIDR+FSH组差异显著(P<0.05).用CIDR+FSH+LH法超数排卵时,CIDR+FSH组对唐山奶山羊进行同步发情,受体妊娠率为56%;CIDR+PMSG组对布尔山羊同步发情,受体妊娠率为60%水平.因此,在非繁殖季节对太行山羊采用CIDR+FSH+LH法超数排卵和以布尔山羊及唐山奶山羊为受体分别用CIDR+PMSG和CIDR+FSH同步发情来进行胚胎移植的技术方案是可行的.     

杜泊羊冷冻胚胎移植的影响因素

为进一步提高杜泊羊的冻胚移植成功率,于春秋两季同期处理湖羊和小尾寒羊受体共997只(次),同期发情782只(次),发情率达78.4%,其中湖羊春秋两季平均发情率为84.6%,显著高于小尾寒羊(73.9%)(P＜0.01),秋季两品种平均发情率83.3%,显著高于春季75.8%(P＜0.01);对431只发情受体羊进行移植,总妊娠率为58.5%(252/431),产羔率为58.0%(250/431).其中湖羊为受体的春秋两季平均妊娠率62.5%,高于小尾寒羊(54.7%);秋季两品种的平均妊娠率为64.8%,显著高于春季(52.5%).囊胚移植后的平均妊娠率为61.5%,显著高于桑椹胚(41.5%),其中A级囊胚为67.4%,显著高于B级囊胚(P＜0.05)和所有桑椹胚(P＜0.01);B级囊胚显著高于B级桑椹胚(P＜0.05),B级囊胚与A级桑椹胚间及A、B级桑椹胚间均无显著差异;C级囊胚和桑椹胚均未见妊娠.此外,受体羊卵巢黄体发育状况及移植技术熟练程度对妊娠率也有显著影响.     

兔胚胎移植影响因素研究

【目的】探讨分析兔胚胎移植的影响因素,为提高兔胚胎移植效率及生产转基因兔奠定基础。【方法】采集获得的交配胚胎经体外培养后,按单只受体移植胚胎数、受体类型（经产母兔与青年母兔）、受体同期发情方式随机分组,对比观察胚胎移植后受体母兔的妊娠情况。【结果】单只受体兔每次移植10～20枚和20～30枚胚胎获得的妊娠率分别为23．1％和20．0％,二者差异不显著（P〉0．05）;采用经产母兔为受体可获得显著高于青年母兔的妊娠率（27．8％vs13．3％,P〈0．05）;以自然同期发情为受体母兔胚胎移植后获得的妊娠率显著高于诱导同期发情的受体母兔（30．7％vs10．0％,P〈0．05）。【结论】兔胚胎移植时选择自然发情的经产母兔作为受体能获得较好的胚胎移植效果,单只受体移植胚胎数以控制在10-30枚为宜。     

小型农牧场及农户波尔山羊胚胎移植关键技术研究

从小型农牧场及农户特点出发,探讨在这些场(户)进行波尔山羊胚胎移植时,供体超数排卵、受体同期发情、供受体羊胚胎回收和移植操作等关键技术对胚胎移植效率的影响。结果表明,调整供、受体母羊的发情周期并采用优化超排程序和同期发情程序,可获得理想的超排和同期发情结果,有效手术供体回收卵数平均达到(17.31±6.93)枚,可用胚(14.96±6.28)枚;受体同期发情率达到94.28%(2125/2254),手术受体利用率为86.55%(1602/1851)。严格而熟练的手术操作可提高供体利用次数,获得理想的胚胎移植结果,将2648枚胚胎移植给1602只受体后,妊娠率达到66.85%(1071/1602),其中1044只受体妊娠足月,产羔1320只。