不同佐剂GnRH疫苗主动免疫对公猪睾丸发育和血清睾酮的影响

为探讨铝胶佐剂与白油Span佐剂的GnRH疫苗对公猪睾丸发育和血清睾酮的影响,12头初生公猪随机分为GnRH疫苗铝胶佐剂免疫组和GnRH疫苗白油Span佐剂免疫组(下简称铝胶组和白油组).9周龄初免,17周龄加强免疫,25周龄屠宰.游标卡尺测量猪阴囊直径和睾丸大小,石蜡切片观察睾丸组织发育,ELISA法和放射免疫分析(RIA)法分别检测GnRH抗体水平和血清睾酮水平.结果表明,铝胶组与白油组GnRH抗体效价差异不显著(P0.05).铝胶组血清睾酮水平于17,21周龄(P＜0.05)和25周龄(P＜0.01)显著地低于白油组,阴囊直径,睾丸直径、横径、周长及睾丸血量均显著地低于白油组(P＜0.05).铝胶组与白油组猪睾丸曲精小管均出现不同程度的空泡化,白油组零星分布少量精子,铝胶组无精子产生.这表明在公猪免疫去势的效果上,辅以铝胶佐剂的GnRH疫苗比辅以白油Span佐剂的GnRH疫苗好.     

GnRH二聚体和GnRH并列二聚体合成肽疫苗对大鼠的免疫去势效果

为了比较GnRH二聚体和GnRH并列二聚体单次和两次免疫对雄性大鼠的免疫去势效果。将上述两种GnRH疫苗,分组免疫SD大鼠,免疫后每两周检测大鼠血清中的GnRH抗体滴度和血清睾酮水平、睾丸重量和组织结构变化。结果显示,两次免疫试验组的抗体滴度显著高于单次免疫试验组的抗体滴度(P<0.05);GnRH二聚体抗原免疫效果优于GnRH并列二聚体抗原的免疫效果,且差异极显著(P<0.01)。免疫组大鼠血清睾酮水平及睾丸重量均极显著低于空白对照组(P<0.01)。免疫去势效果显著的大鼠只数统计显示,GnRH二聚体(5/6)和GnRH并列二聚体(4/6)两次免疫均多于单次免疫(4/6和3/6)。同时,组织学观察结果可见,免疫组大鼠睾丸组织结构萎缩,曲精小管管径变窄,内部精母细胞脱落,精子变少或者没有。表明GnRH二聚体疫苗与GnRH并列二聚体疫苗均能达到去势效果,前者优于后者,两次免疫优于一次免疫。     

主动免疫GnRH疫苗对公犬生殖功能的影响

为了探究促性腺激素释放激素(GnRH)疫苗对公犬生殖功能的影响,试验将GnRH基因克隆至原核表达载体中,转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,用终浓度为1 mmol/L IPTG诱导蛋白表达,通过SDS-PAGE和Western-blot对表达产物进行蛋白鉴定,将鉴定正确的GnRH蛋白纯化后制备成抗原。选取6只2～4月龄健康公犬随机分成2组,每组3只,其中免疫组每只犬免疫GnRH蛋白1 mg,共免疫3次,每次间隔4周,分别于免疫前和一免、二免、三免后14天采血,通过ELISA检测血清GnRH抗体及睾酮水平,并于最后一次采血结束后制备睾丸组织切片,观察睾丸组织形态。结果表明：3次免疫后免疫组GnRH抗体水平均显著高于对照组(P<0.05),睾酮水平均显著低于对照组(P<0.05),免疫组睾丸相对较小,曲精小管中生精细胞数量较少,管径较细。说明主动免疫GnRH疫苗抑制了公犬的性腺发育和生殖器官的成熟。     

重组CRM197-4GnRH去势疫苗抗原分子的原核表达及免疫效果评价

通过大肠杆菌表达系统对CRM₁₉₇-4GnRH重组去势疫苗抗原进行表达,采用不同种类佐剂制备疫苗,研究其对大鼠的免疫去势作用,为获得1种免疫效果好、有效期长、生产成本低的促性腺激素释放激素(GnRH)免疫去势基因工程疫苗提供借鉴。采用白喉毒素无毒突变体(CRM₁₉₇)与4拷贝GnRH串联,将CRM₁₉₇-4GnRH基因与表达载体连接,并通过优化试验确定大肠杆菌的最优表达条件,用SDS-PAGE和Western blot鉴定目标蛋白的表达情况。将融合蛋白与不同佐剂乳化,制备成9种测试疫苗后分别免疫大鼠,测定血清中GnRH抗体滴度和睾酮浓度。结果显示,重组大肠杆菌的最优表达条件为诱导时间表达5 h,培养基为LB液体培养基,IPTG诱导浓度为0.5 mmol/L;通过SDS-PAGE和Western blot试验,表明目标融合蛋白已成功表达;动物试验结果表明,重组疫苗水包油包水佐剂组、重组疫苗油包水佐剂组、GnRH+Th抗原(辅助型T细胞抗原)表位(G1抗原)油包水佐剂组测试疫苗免疫大鼠较其他组GnRH抗体滴度显著升高、睾酮浓...     

GnRH主动免疫对SD雄鼠下丘脑GnRH合成及性腺反馈系统的影响

探讨GnRH主动免疫对SD雄鼠下丘脑GnRH合成及性腺反馈系统的影响。36只SD雄鼠随机分为免疫组、手术去势组及对照组,免疫组于12周龄时初免,8周后加免。放免法测定血清抗体滴度、激素浓度及下丘脑正中隆起GnRH含量,实时荧光定量PCR分析下丘脑生殖相关基因mRNA的变化。结果显示,GnRH主动免疫后12只免疫鼠中11只血清GnRH抗体滴度显著升高,血清LH、FSH及T浓度显著降低(P<0.05),睾丸严重萎缩(免疫去势鼠)。与对照鼠相比,免疫去势显著降低下丘脑GnRH含量(P<0.01),且显著下调下丘脑雌激素α受体(ERα)、雄激素受体(AR)、Kiss-1、GPR54及GnRH的mRNA表达水平(P<0.05)。手术去势鼠除血清LH、FSH浓度及下丘脑ERα的mRAN表达水平显著高于对照鼠外(P<0.05),其余指标均与免疫去势鼠类似。结果首次表明,GnRH主动免疫抑制性腺负反馈调节作用及降低了下丘脑GnRH的合成。     

GnRH一次性主动免疫对公猪血清睾酮含量的影响

采用以促性腺激素释放激素(GnRH)并列体(GnRH-tandem)为基本结构的免疫去势苗对公猪进行一次性主动免疫。结果表明免疫组的公猪睾酮浓度极显著地低于完整组;睾丸长度极显著地小于完整组;屠宰体重明显高于完整组。因此,GnRH一次性免疫有望取代传统的外科阉割,在实际养猪生产中得到推广和应用。     

猪圆环病毒2型灭活疫苗的制备与免疫效力研究

猪圆环病毒2型（PCV2）经0.2%甲醛37℃作用一定时间后接种PK-15细胞,盲传3代,用PCR方法检测灭活效果。将灭活的PCV2加入适量的白油和氢氧化铝胶制成PCV2油佐剂和铝胶佐剂灭活疫苗,免疫小鼠,共免疫2次,时间间隔为3周,分别于一免后第21天和二免后第14天进行ELISA抗体检测。同时为了评价国产油佐剂和进口油佐剂的免疫效果,笔者进行了猪体免疫效力试验。通过ELISA抗体、攻毒后临床表现及体温变化、剖解时的病理变化、平均日增重及病毒血症等指标对疫苗免疫效果进行评价。结果如下：①PCV2能被0.2%甲醛完全灭活,灭活时间为16 h。②PCV2油佐剂和铝胶佐剂灭活疫苗免疫小鼠后均能产生较好的免疫应答,并且油佐剂灭活疫苗免疫效果好于铝胶佐剂灭活疫苗。③猪体免疫效力试验表明,两种油苗均能产生较高水平的ELISA抗体。攻毒后,攻毒对照猪的体温高于免疫猪,空白对照猪体温正常。免疫猪及空白对照猪平均体重均升高,而攻毒对照猪平均体重有所降低,且两个免疫组和空白对照组之间平均日增重差异显著（P〈0.05）。病毒血症检测及病毒DNA在组织中的分布检测表明两油苗均能够有效降低猪体的带毒。以上结果表明,PCV2灭活疫苗免疫小鼠和猪体后均能诱导机体产生免疫应答,并能够在一定程度上抵抗PCV2对猪体的感染。     

GnRH-A免疫对兔去势效果的实验研究

探讨促性腺激素释放激素类似物(GnRH-A)对动物免疫去势的效果和作用机理.用自制的GnRH-A抗原乳剂在30只兔(EG-Ⅰ与EG-Ⅱ组)的颈背部皮下分2～3点注射1.0 mL(100 μg·mL-1)GnRH-A抗原,EG-Ⅱ组3周后加强免疫1次.测定睾丸长度和质量,体质量变化,GnRH抗体效价与血清睾酮浓度.制备的抗原无菌性、安全性和物理性状良好,EG-Ⅱ组睾丸长度与EG-Ⅰ组差异极显著(P<0.01);EG-Ⅱ组的抗体水平也明显高于EG-Ⅰ组;免疫注射后2个试验组与对照组的血清睾酮浓度差异逐渐增加,102 d时EG-Ⅱ组血清睾酮浓度极显著低于对照组(P<0.01),且第28天后EG-Ⅱ组显著低于EG-Ⅰ组(P<0.05);EG-Ⅱ组雄兔的体质量和平均日增质量均最大,显著高于EG-Ⅰ组和对照组(P<0.05).GnRH-A免疫家兔对睾丸发育、血清GnRH抗体效价和睾酮浓度具有显著的影响,加强免疫效果更理想.     

公猪睾丸性状精液品质及生殖激素的初步观察

本试验的目的是要比较约克夏公猪和长白公猪在睾丸性状、精液品质以及生殖激素方面的关系。试验采用 12头约克夏、3头长白性成熟公猪 ,测量各公猪两睾丸的长、宽、深 ,并采集精液 ,测量精液量、精子密度和活率。采精后对每头公猪耳静脉采血 ,并测定血浆中皮质醇、睾酮及雄烯二酮的浓度。结果表明 ,睾丸性状、精液品质及皮质醇、睾酮在两品种中没有明显差异 ,但雄烯二酮水平约克夏公猪组明显高于长白猪组 (P <0 .0 5 ) ,所有公猪的左睾丸体积大于右侧睾丸     

GnRH并列体二聚体主动免疫对雄兔血清睾酮的影响

用GnRH并列体二聚体主动免疫雄兔,并观察了免疫对雄兔血清睾酮与睾丸重量的影响。结果表明该方法能使雄兔血清睾酮水平降低,睾丸重量下降。     

纳米铝胶佐剂增强猪细小病毒灭活疫苗猪体免疫的效果

将20头35日龄断奶仔猪随机分为4组,将制备的纳米铝胶佐剂猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)灭活疫苗肌肉注射免疫接种,并以常规铝胶佐剂PPV灭活疫苗组、市售PPV油乳剂灭活疫苗组为疫苗对照,生理盐水组做阴性对照,应用HI和ELISA检测接种猪的体液免疫水平,流式细胞仪检测免疫猪的细胞免疫水平。体液免疫检测结果显示,PPV纳米铝胶佐剂疫苗组能显著提高机体产生抗体的速度,在首免后第2周产生有效保护抗体水平显著高于油乳剂疫苗和常规铝胶佐剂疫苗组(P0.05),在第3周其抗体水平达到峰值;细胞免疫检测结果显示,3种疫苗均能诱导机体产生细胞免疫应答,但各组之间差异不显著(P0.05)。结果表明,以纳米铝胶为佐剂制备的猪细小病毒灭活疫苗,能显著提高机体的免疫水平,并较早刺激机体产生抗体,具有较好的免疫保护效果。     

猪圆环病毒2型灭活疫苗种毒株的筛选

为筛选满足猪圆环病毒2型灭活疫苗制苗要求的毒株,选择河南省8个地区的8株猪圆环病毒2型分离株进行抗原性分析,将各分离株培养后用不同滴度的病毒原液和其分别稀释至同一滴度(4.233×10⁴拷贝/μL)的病毒液分别制成油佐剂灭活疫苗,免疫小鼠后采血测定其抗体动态水平,以进行免疫效力评价。结果显示,8株圆环病毒2型分离株中8#和12#分离株原液制备的疫苗免疫后诱导产生的抗体水平较高,二免后1周抗体水平即高于1∶800,达到猪圆环病毒2型灭活疫苗的国家质量标准要求,3周时达到高峰,比对照商品疫苗诱导产生的抗体水平更高;其分别稀释130倍和463倍后制备的疫苗诱导产生的抗体水平在二免后3周也能达到1∶800。提示,猪圆环病毒2型8#和12#分离株毒价高,免疫效力良好,是理想的疫苗候选株。本研究丰富了猪圆环病毒2型灭活疫苗毒株的种毒资源,为研制高质量的猪圆环病毒2型疫苗奠定了基础。     

复合多糖的佐剂效应研究

目的:研究复合多糖佐剂对猪O型口蹄疫(FMDV)灭活抗原的佐剂效应。方法:以对猪O型FMDV灭活抗原具有佐剂效应的黄芪多糖(APS)、人参多糖(GPS)、木蟞子多糖(HPS)、茯苓多糖(LBPS)和云芝多糖(YPS)等五种多糖为佐剂成分,以各多糖的最佳佐剂剂量复合成多糖佐剂配方(CPS),以市售油佐剂为阳性对照,PBS为阴性对照,与FMDV灭活抗原配制成疫苗并免疫猪后,测定比较血清中FMDV灭活抗原诱导特异性抗体水平和不同佐剂诱导分泌IL-2、TNF-α、IFN-γ的变化。结果:CPS佐剂组在一免疫后抗体效价高于阴性对照组,与其他阳性对照组无显著差异,在二免疫后抗体效价高于ISA206油佐剂组,与其他阳性对照无显著差异,且抗体水平显著高于阴性对照组。二免后血清中三种细胞因子含量均高于其他试验组。结论:CPS作为佐剂,能显著提高抗体水平(GMT值),同时促进Th1和Th2型免疫应答,CPS作为新型佐剂具有应用价值。     

公猪异味控制疫苗效力试验

本试验系统地评价和分析了异普克在控制公猪异味上的效力。将400头公猪在出生时随机平均分成5组:T01为手术去势组;T02、T03和T04为3个批次的公猪异味控制疫苗异普克免疫组,T05为对照组,不去势不免疫。在首免前1 d和屠宰前1 d对试验猪采血用于检测血清中的睾酮浓度和促性腺激素释放因子(gonadotropin releasing factor,GnRF)的抗体水平。屠宰前1 d测量两个睾丸的宽度。屠宰时采集试验猪腹部的脂肪样品20 g,用于分析雄酮和粪臭素浓度。通过测定免疫猪雄酮、粪臭素和睾酮的浓度及睾丸宽度等公猪异味参数,表明3个批次的异普克均能有效控制公猪异味。     

猪肺炎支原体与猪支气管败血波氏杆菌在猪体液免疫和生长性能上的协同作用

试验选用10日龄成华×大约克杂交猪36头,随机分成四组(1、2、3、4),每组9头.其中1、2组用猪肺炎支原体全菌抗原免疫后再分别用猪肺炎支原体和猪支气管败血波氏杆菌进行攻毒,3、4组注射生理盐水作为对照,并与前两组同时分别用猪肺炎支原体和猪支气管败血波氏杆菌进行攻毒.采用间接ELISA、组织切片等方法对猪血清中的抗体水平、肺脏的病理变化及生长性能进行测定.试验表明:用猪肺炎支原体全菌抗原接种猪后,在血清中能检测到较高的抗体水平(25).猪肺炎支原体攻毒后2周,免疫猪和对照猪血清中猪肺炎支原体抗体的滴度分别为23.8与22.4(P＜0.05),且免疫猪的生长性能比对照猪好.在猪支气管败血波氏杆菌攻毒组,攻毒2周和4周后免疫猪血清中的猪支气管败血波氏杆菌抗体水平与对照猪相比分别提高了26.67%和30.00%(P＞0.05),6周后免疫猪和对照猪血清中的猪支气管败血波氏杆菌抗体分别为21.7和20.3(P＜0.05),且在攻毒后4～6周,免疫猪的生长性能有了显著的改善.组织切片显示,无论是用猪肺炎支原体攻毒还是用猪支气管败血波氏杆菌攻毒,免疫猪的肺脏病变程度都较对照猪轻.     

促性腺激素释放激素类似肽主动免疫对公猪生殖机能的影响

10头公猪在3月龄时用促性腺激素并列体二聚体(GnRHTD)主动免疫,观测内源GnRH被免疫中和所产生的内分泌和生殖机能的变化。注射GnRHTD与卵清蛋白(OVA)的偶联物2次,结果发现GnRHTD主动免疫能降低外周血清睾酮浓度,睾丸重量也明显下降。组织切片显示,曲细精管有少数退化的精原细胞。这些变化表明:公猪接种GnRHTDOVA能诱发免疫反应,中和内源GnRH的生物活性,且抑制睾酮的合成,从而导致性器官发育受阻。     

SD雄鼠3种不同新蛋白构型GnRH去势抗原免疫学及生物学效果对比研究

旨在对比研究SD雄鼠3种不同新蛋白构型GnRH抗原的免疫学及生物学效果。本研究新蛋白构型GnRH抗原设计采用增加GnRH拷贝数和增大抗原分子量方法。以化学合成法合成G6K-GnRH并列体(G6K-GnRH-tandem,G6KT)作为新蛋白GnRH抗原制备的基本单元。将G6KT二聚化,形成抗原Ⅰ(G6KTD),将G6KT和G6KTD分别与卵清蛋白(OVA)偶联,分别形成抗原П(G6KT-OVA)及抗原Ⅲ(G6KTD-OVA)。试验分5组:完整对照组(不做任何处理,intact control)、外科阉割去势组(surgical castrates)及3种新蛋白构型GnRH免疫组(G6KTD、G6KT-OVA及G6KTD-OVA免疫组)。将(G6KTD、G6KT-OVA、G6KTD-OVA)3种不同新蛋白构型GnRH抗原配于Specol佐剂,分别免疫SD雄鼠,6周龄时初免,腿部肌肉注射1 mL乳化抗原(含相应新构型GnRH蛋白100μg),8周后加免,注射剂量与方法同初次免疫,每试验组12只雄鼠。放免法及酶联免疫法测定血清抗体及生殖激素浓度变化,qPCR检测垂体-睾丸生殖相关基因mRNA表达变化。结果显示:1)SD雄鼠主动免疫3种不同新蛋白构型GnRH抗原后均能产生良好的抗体反应。2)G6KT-OVA及G6KTD-OVA免疫组仅初免就能诱发较高水平的抗体产生,并显著降低雄鼠血清LH、FSH、睾酮(T)及抑制素B (INHB)浓度(P<0.05);试验结束时,该两种抗原免疫组雄鼠睾丸重量及体积均降低,精子发生完全被终止,垂体GnRHR、LHβ、FSHβ及睾丸LHR、FSHR、INHα、INβA及INHβB mRNA表达显著下调(P<0.05)。3)G6KTD免疫组12只雄鼠中,9只(75%)在加免后血清LH、FSH、T及INHB浓度显著降低(P<0.05),试验结束时睾丸重量及体积均显著降低(P<0.05),精子发生受到明显抑制(P<0.05)。综上表明:新蛋白构型G6KT-OVA和G6KTD-OVA具有极强的免疫原性,初次免疫就能达到抑制生殖激素分泌的目的,在作为单剂量GnRH疫苗方面具良好的开发前景;同时G6KTD也具有较强的免疫原性,可不与载体蛋白偶联单独作为GnRH去势抗原,继而避开GnRH分子与载体蛋白偶联所面临的GnRH抗原损失严重及与载体蛋白偶联的后续纯化等问题。本研究结果为研发高效GnRH去势疫苗及其大规模应用提供了理论参考。     

鸡大肠杆菌自家苗血清抗体的消长规律研究

本试验用某鸡场分离的大肠杆菌制成铝胶佐剂灭活苗,免疫接种15日龄雏鸡,对免疫后其抗体消长规律进行测定,并对不同抗体滴度的雏鸡进行攻毒试验。结果表明,一免后1周可产生抗体,3周抗体达到高峰,抗体可持续10周左右。二次免疫后抗体水平显著高于一次免疫,且抗体高峰持续时间更长,抵抗同型大肠杆菌攻毒的最低抗体滴度为1:16～1:32,免疫保护期可达4个月左右。     

使用不同佐剂去势疫苗免疫效果的比较

分别应用明矾、氢氧化铝和弗氏佐剂的去势疫苗免疫 SD大鼠 ,检测大鼠 LHRH抗体效价、睾酮水平、观察睾丸肉眼及组织学变化 ,以及精子数量、畸形率的变化 ,确定去势疫苗的效果。结果表明明矾、氢氧化铝和弗氏佐剂组均能够较好的诱导大鼠产生 L HRH抗体 ,引起睾酮明显降低。三个免疫组与阴性对照组相比 ,都能使大鼠明显增重 ,并起到萎缩性腺的作用     

猪圆环病毒2型灭活苗的免疫效果

20日龄的仔猪免疫猪圆环病毒2型灭活疫苗,使用ORF2－ELISA方法监测免疫前后的抗体水平,免疫前、免疫2周、免疫3周、免疫4周采集血清,检测结果可以看出,猪群的PCV－2抗体阳性率提高,免疫后4周抗体滴度达到较高水平;免疫组日增重、存活率、净增重均比对照组提高,而且饲料利用率高,药物治疗费由5．67元降低到4．95...