植物组织RNA的几种提取方法

以白菜叶为试材，用常用的异硫氰酸胍法、尿素法及Tris-硼酸法，比较其提取RNA的质量和纯度。结果表明异硫氰酸胍法提取RNA的质量好、纯度高、提取效率高；尿素法提取RNA成本低、RNA质量也较高；而Tris-硼酸法则较适合于酚类物质含量的材料RNA的提取，其RNA的产率较高。     

用CTAB-PVP法提取棉花各组织总RNA的研究

针对棉花组织总RNA难以提取、不同组织的提取方法难以统一的问题，借鉴Jaakola等的越橘果实总RNA提取方法（即CTAB-PVP法），对棉花组织总RNA的提取效果进行了分析。实验结果表明：得到的棉花纤维、胚珠、叶片、胚根、花瓣、下胚轴和花药各组织的RNA完整性好，其D260／D280比值为1．7～2．0，产率30～180pg／g（鲜质量）；用开花后15d纤维的RNA为材料进行反转录，再利用RT-PCR和3’RACE技术进行克隆，各获得1个大小为542和712bp的cDNA克隆，经序列分析鉴定，这2个片段分别编码棉花微管结合蛋白和微丝结合蛋白。     

番茄果实总RNA提取方法的定量比较分析

番茄果实富含多糖和酚类等次级代谢物质， RNA提取难度较大。为了获取高质量的RNA进行分子生物学研究，分别采用改进CTAB法和4种植物RNA抽提试剂盒提取总RNA进行比较分析。结果表明，柱式试剂盒提取的RNA质量和产量较高，且操作简便，但需进一步纯化。利用RT PCR技术，采用试验提取的RNA，成功克隆出 NAC15基因片段并进行定量分析，进一步表明RNA品质可以满足定性定量分子生物学研究。     

不同植物组织RNA提取方法的比较分析

不同的植物组织都有较优化RNA提取方法。本文针对蜡质的红掌叶片、含糖较多的百合花瓣、含色素较多的万寿菊花瓣,使用改良CTAB法、Trizol法、快速RNA提取试剂盒法提取RNA,比较提取效果,以确定适合几种植物组织的最优RNA提取方法。结果表明:改良CTAB法提取的红掌叶片总RNA,Trizol法提取的百合花瓣总RNA和万寿菊总RNA,28SRNA和18SRNA条带都较清晰,且28SRNA亮度较18SRNA明亮,效果较好,部分RNA提取试验中5SRNA也较明亮,说明提取的总RNA有部分降解,但总RNA质量符合后续试验要求。RT-PCR检验符合上述结论。     

木本植物组织总RNA提取的要点与原理

根据提取木本植物组织RNA时所获得的知识和经验，对木本植物组织总RNA提取时所遇到的提取产量低、RNA降解、多酚物质干扰、DNA干扰、多糖干扰、蛋白质干扰及杂质干扰等问题进行了探讨，并提出了具体的解决方法。同时，对各种常用的RNA提取方法进行了分类，并对它们的原理及优劣进行了论述与评价。     

一种简单高效提取棉花不同组织总RNA的方法

目前,虽然已经报道了几种比较有效的提取棉花组织总RNA的方法,但是这些方法往往费时费工,又很难同时适用于棉花不同组织的总RNA提取。以CTAB法为基础进行技术改良,同时结合LiCl沉淀等,总结出了一种简单、快速又普遍适用于棉花各组织总RNA的提取方法。试验证明,此法提取到的RNA纯度高、完整性好,适用于逆转录合成cDNA第一链、RT-PCR分析以及Northern杂交等分子实验。     

草莓不同组织RNA提取方法的改良研究

探讨一种适于草莓不同组织的RNA提取的改良方法。通过增加裂解液震荡强度、离心柱多次吸附、增加去蛋白液温育次数及漂洗次数等步骤对EASYspin RNA提取总RNA操作方法进行改进。结果表明,改良方法提取的草莓根、茎、叶、果实、花中的总RNA,电泳检测都出现清晰的28S和18S两条明显的条带,表明总RNA完整性较好;紫外分光计分析其OD260/OD280值在1.88至2.06之间,OD260/OD230值均大于2.0,RNA浓度含量为310~500μg/mL,表明提取的总RNA纯度好、含量高;基于RNA中mRNA反转录的RT-PCR扩增Actin基因分析结果表明,改良方法提取的草莓不同组织的总RNA质量高。总之,经过电泳、紫外、反转录分析结果证实,改良EASYspin适于草莓果实等不同组织总RNA的提取,是草莓类似果树种类总RNA提取的首选借鉴方法。     

胡杨、柽柳总RNA提取方法的建立

以胡杨和柽柳的叶片为材料，建立了一种从植物组织中快速分离总RNA的方法。该方法具有三个显著的特点：RNA提取周期短，应用改进的LiCl沉淀RNA方法，仅需l0min即可；方法简单易行，仅需要几种常用试剂，操作步骤简单；提取的RNA杂质少，得率高，并能在提取过程中较有效抑制RNA的褐化效应。RNA质量可以满足cDNA文库构建、DDRT—PCR等要求。     

三肽囊素(Bursin)同功单链抗体(ScFv)的构建研究——Ⅰ.鸡脾脏组织细胞总RNA提取方法研究

分离纯净、完整的细胞总RNA对于分子克隆的实验十分重要，但自然界中RNA酶广泛存在且稳定性很高，RNA极易被RNA酶污染而降解。快速提取RNA可以减少RNA酶污染的机会而成为RNA提取的首选方法。选用3种快速RNA提取法(方法Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)，发现方法Ⅲ最好，电泳可见3个RNA条带清晰无降解，纯度也最高；方法Ⅱ较差，虽然操作时间最短，但却易降解，而且电泳时多出一条明显的DNA条带；方法Ⅰ也能提取到较好的RNA，但纯度不如方法Ⅲ。     

草石蚕块茎总RNA提取及质量分析

采用3种方法提取草石蚕块茎的总RNA,以期筛选出适合草石蚕块茎总RNA提取的最佳方法。结果表明,RNAiso Reagent法提取草石蚕块茎总RNA的28S和18S条带清晰明亮,RNA无降解,无DNA污染,质量较好。王艳红法和TRIzolR Reagent一步提取法提取总RNA的28S和18S条带较暗,提取的总RNA有降解现象。根据紫外分光光度计检测结果分析,3种方法提取草石蚕块茎总RNA的纯度都较好。从提取RNA的产量来看,RNAiso Reagent法提取总RNA的浓度最高,为1112μg/mL,王艳红法次之,TRIzolR Reagent一步提取法最低。因此,RNAiso Reagent法是草石蚕块茎总RNA提取的最佳方法。     

3种芹菜茎组织总RNA提取方法的比较研究

[目的]为了获得质量较好的芹菜茎的总RNA,为后续分子生物学试验提供基础。[方法]试验对1种RNA提取方法(Trizol法)和2种RNA提取试剂盒(RNA prep Pure Plant Kit法、RNA simple Total RNA Kit法)方法进行比较研究。[结果]RNA prepPure Plant Kit方法得率低,且OD260/OD280值低于1.8,Trizol法OD260/OD230高于2.0,且得率低于RNA simple Total RNA kit法。只有RNA simple Total RNA kit法提取的RNA质量最好,得率最高。[结论]与Trizol法和RNA prep Pure Plant Kit法相比,RNA simple Total RNA Kit法提取的芹菜茎总RNA得率高,完整性好,凝胶电泳泳道无杂质,可以满足半定量RT-PCR的试验需要。     

不同方法提取狗脊蕨叶片总RNA的比较分析

[目的]为构建狗脊蕨叶cDNA文库,保存珍贵基因资源,克隆和研究与有效成分合成相关的基因等提供技术参考。[方法]以狗脊蕨叶片为材料,采用CTAB法、一步法、酚-SDS法和RNA试剂盒提取分离法提取总RNA,通过比较分析确定最优方法。[结果]这4种方法都能提取出182、8 S的RNA,但CTAB法和试剂盒提取分离法的总RNA质量较高,CTAB法还提取出清晰的5S RNA。一步法和SDS法带型模糊,有降解现象。CTAB法提取的狗脊蕨叶片总RNA质量较好,28S1、8S和5S条带清晰,且无明显降解。CTAB提取法OD260/OD280的值在1.93~2.06,试验中其OD260/OD280值为2.012,接近2.0,纯度较高。一步法和SDS法OD260/OD280>2.0,试剂盒法OD260/OD280<2.0。[结论]CTAB法适合提取的狗脊蕨叶片总RNA,质量较好,可用于cDNA合成、文库构建等后续分子生物学试验。     

甘蔗茎RNA提取方法研究（摘要）（英文）

[目的]找出提取甘蔗茎RNA的适宜方法。[方法]采用SDS法、试剂盒法、GHCL法3种方法提取甘蔗茎基因组RNA,并对提取的RNA进行质量比较。[结果]试剂盒法提取的RNA产率高,电泳条带清晰,RNA完整性好,无明显降解,OD260/OD280比值较好。试验操作要点：在RNA的提取过程中必须使操作温度保持在4℃左右（操作时温度可以通过垫加冰块来实现）,从而充分抑制RNase的活性;植物组织称取要适量,将植物组织在液氮中充分研磨后,应在液氮还未充分挥发前将研磨物加入Eppendorf管中,样品要充分研磨,通过加大提取液中变性剂的量防止在此过程中内源RNase将植物组织中RNA降解;在用酚/氯仿/异戊醇抽提及氯仿/异戊醇抽提过程中,吸取上清液时,应尽量小心,不要吸取中间层从而防止酚类、蛋白质类的干扰。此外,提取的RNA还应及时保存于-70℃低温下,避免频繁冻融影响其质量以及RNA的降解。[结论]试剂盒法是有效提取甘蔗茎RNA的方法。该研究为甘蔗的分子生物学研究奠定了基础。     

阿魏侧耳菌丝体RNA提取方法的比较与研究

采用一步法、异硫氰酸胍—巯基乙醇联合变性法和STE法3种方法,分别对阿魏侧耳总RNA的提取效果进行比较。结果表明,一步法难以提取RNA,异硫氰酸胍—巯基乙醇联合变性法提取RNA效果不理想,存在蛋白污染,这2种方法不适于富含多糖的阿魏侧耳总RNA的提取;STE法提取阿魏侧耳总RNA质量高、完整性好、成功率高,经琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计检测,提取的总RNA具有清晰的28S,18S,5S三条带,且28S的亮度是18S的2倍左右,OD260/OD280比值为18～20,可作为阿魏侧耳总RNA提取的首选方法。用此方法来提取阿魏侧耳液体发酵不同时期的RNA,可以满足进一步分子生物学研究的要求。     

团花树韧皮部总RNA提取方法的比较研究

[目的]为了从团花树韧皮部中获取高质量的总RNA。[方法]研究采用冷酚法、一步提取法、改进CTAB法、杨树提取法、RNAplant Reagent法5种方法从团花树韧皮部组织中提取总RNA,并利用电泳拍照、测OD值和RT-PCR 3种方法对提取的RNA的质量进行检测。[结果]由冷酚法、一步提取法、改进CTAB法3种方法提取的RNA纯度较低,存在降解和弥散现象,或有DNA和蛋白质的污染,得到的RNA的量较少;而用杨树提取法和RNAplant Reagent法提取的RNA很少有降解,28SrRNA和18SrRNA条带很清晰,得到的RNA虽然有DNA的污染,但是经过DNaseⅠ处理后,OD260/OD280的值在1.8～2.0。[结论]杨树提取法和RNAplant Reagent法得到的RNA可以满足RT-PCR反应和RACE试验的要求,为成功克隆团花树相关基因奠定了基础。     

蟠桃果实总RNA提取方法的研究

[目的]筛选获得提取蟠桃果肉中总RNA的适宜方法.[方法]以盛花后100 d的蟠桃为材料,采用Transplant plus植物总RNA提取试剂提取法、RNAisoTM试剂盒法、改良SDS法、改良CTAB法等四种方法提取总RNA.[结果]两种试剂盒法提取的总RNA质量差,有严重的基因组污染;改良SDS法提取物中含有大量的多糖;采用改良CTAB法所得RNA完整性好,条带清晰无降解,无基因组污染.经过RT - PCR和Northern blot检测后,表明该RNA能够满足后续分子生物学操作的要求.[结论]蟠桃果实总RNA适宜提取方法-改良CTAB法的确定为后续果实发育分子生物学的研究奠定了基础.     

百脉根总RNA提取方法的优化

[目的]为百脉根的分子生物学研究提供基础资料。[方法]以百脉根叶片为材料,比较异硫氰酸胍法、SDS-LiCl法及SDS-LiCl改进法提取总RNA的效果并探讨活性炭、抗坏血酸对RNA提取质量的影响。[结果]异硫氰酸胍法所提取的百脉根总RNA降解严重,盐类去除不充分,该方法不适合百脉根总RNA的提取;SDS-LiCl法提取的总RNA有一定程度降解,加入液体抗坏血酸会降低百脉根RNA的提取质量;SDS-LiCl改进法提取的总RNA较为完整,有较高的纯度,在研磨过程中加入固体抗坏血酸能够提高百脉根总RNA的提取质量。活性炭对百脉根总RNA的提取无影响。[结论]研磨时加入固体抗坏血酸的SDS-LiCl改进法能提取出高质量的百脉根总RNA。     

观赏海棠不同组织中RNA的几种提取方法

以观赏海棠不同组织为试材,用常用的CTAB法、异硫氰酸胍法及Tris-硼酸法,比较其提取RNA的质量和纯度。结果表明:CTAB法提取RNA成本低、RNA质量较高;异硫氰酸胍法提取RNA的质量好、纯度高、提取效率高;而Tris-硼酸法则较不适合于果实类多酚多糖组织的RNA提取。     

棉纤维总RNA提取方法的比较与分析

【目的】筛选适合棉纤维总RNA的提取方法,并对其进行改良,以满足转录组和表达谱测序要求。【方法】采用三种方法提取棉纤维总RNA,即改良的热硼酸法、Trizol法和离心柱试剂盒法。【结果】改良的热硼酸法提取的棉纤维总RNA质量最好,同时对该方法的改良更适合不同时期相同棉花品种和相同时期不同棉花品种棉纤维总RNA的提取。【结论】通过比较棉纤维总RNA的提取方法,发现改良的热硼酸法提取棉纤维总RNA质量最好,且对该方法的改良提取的总RNA更能够满足转录组和表达谱测序的要求。     

mCTAB-dLiCl法高效提取花生各组织部位RNA及其验证

[目的]探讨花生不同组织部位RNA提取方法,为开展花生分子生物学研究奠定基础.[方法]在CTAB法的基础上,设计一种改良的mCTAB-dLiC1法,其使用高质量体积分数的KAC除去组织中的多糖,使用两次10.0 mol/L的LiC1沉淀RNA,采用琼脂糖凝胶电泳检测RNA质量,核酸蛋白分析仪测定RNA纯度,并通过逆转录、RT-PCR和cDNA-SCoT验证其质量.[结果]采用mCTAB-dLiC1法的RNA产率为554.80 μg/g,RNA的A260/A280比率为1.89,RNA非变性琼脂糖凝胶电泳未出现可见的DNA条带;扩增的28S和18S条带比值为2∶1,且条带清晰无拖尾现象;提取的RNA通过逆转录、RT-PCR扩增和cDNA-SCoT扩增验证,均获得较好的扩增效果,获得的RNA和cDNA质量好.[结论]mCTAB-dLiCl RNA提取方法是一种高效提取花生各组织部位RNA的方法,可在花生分子生物学研究中应用.