富硒女贞子对热应激卵巢细胞的影响

以42℃作为热应激模型温度、37℃作为对照温度,于42℃培养的卵巢细胞中分别添加富硒女贞子水煎液、齐墩果酸、蛋白质和多糖,采用四唑盐(MTT)法检测细胞增殖活性、流式细胞仪检测细胞凋亡、黄嘌呤氧化酶法检测细胞培养上清中超氧化物歧化酶(SOD)活性,探讨富硒女贞子及其主要成分对高温体外培养卵巢细胞生长、凋亡及抗氧化功能的影响。结果表明:富硒女贞子水煎液及多糖能显著提高热应激状态下卵巢细胞的增殖活性(P0.05)、显著降低细胞的凋亡率(P0.05)、显著提高细胞培养上清中SOD活性(P0.05),且富硒女贞子效果明显优于女贞子;富硒女贞子蛋白质及齐墩果酸效果并不显著。说明富硒女贞子水煎液、多糖对热应激引起的卵巢细胞增殖活性降低及细胞凋亡有明显的改善作用,并能提高卵巢细胞的抗氧化功能。     

卵巢颗粒细胞自噬与PI3K/AKT/FOXO3a信号通路的相关性

细胞自噬是哺乳动物细胞物质代谢的一个重要机制,与细胞凋亡共同参与卵巢卵泡的发育和闭锁,并发挥重要的作用。近年研究发现,磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B,PI3K/AKT）信号通路参与卵巢疾病的发生。PI3K和AKT的过度激活可使原始卵泡过早发育以及卵泡过快凋亡,卵巢颗粒细胞作为卵泡发育重要的支持细胞,其功能的减退或凋亡很可能引发一系列女性内分泌方面的疾病。FOXO3a转录因子是PI3K/AKT信号通路下游的重要靶蛋白之一,参与抗增殖和凋亡。本文就关于卵巢颗粒细胞自噬与PI3K/AKT/FOXO3a信号通路的相关进展加以综述。     

线粒体介导的三倍体虹鳟卵母细胞凋亡

采集不同发育时期三倍体虹鳟幼鱼卵巢,采用免疫组化、线粒体膜电位荧光探针、荧光定量PCR和蛋白免疫印迹等方法,观察、检测卵巢发育过程中卵母细胞细胞凋亡现象及线粒体凋亡途径,证实三倍体虹鳟卵母细胞发生线粒体介导的细胞凋亡。结果表明,12℃发育水温下,三倍体虹鳟卵母细胞在受精后210 d开始凋亡,受精后270 d凋亡达高峰,330 d凋亡逐渐消失。证明卵母细胞发生凋亡是导致三倍体雌性虹鳟不育的重要原因,为三倍体鱼类性腺发育深入研究提供理论依据。     

DAPI检测卵泡期绵羊生殖器官中细胞凋亡的比较研究

为探讨在卵泡期绵羊生殖器官中细胞凋亡的作用机制,本试验以小尾寒羊和萨福克羊为研究对象,采用DAPI(4′,6′-联脒-2-苯基吲哚)原位荧光标记技术,对高繁殖力品种小尾寒羊和低繁殖力品种萨福克羊成年母羊卵泡期主要生殖器官(卵巢、输卵管、子宫)进行细胞凋亡的确认与定位。结果显示:小尾寒羊和萨福克羊卵巢中卵泡上皮细胞、颗粒细胞、膜细胞均有凋亡现象。在三级卵泡和成熟卵泡的颗粒细胞和膜细胞中,萨福克羊比小尾寒羊表达出较多数量的凋亡细胞,两品种羊在卵泡期输卵管各部,子宫内膜腺体中几乎均未检测到凋亡细胞,子宫内膜基质中检测到少量细胞发生凋亡。因此,研究表明细胞凋亡是母羊生殖器官变化的重要调节机制,可能与造成两者繁殖力高低差异有关。     

条件性诱导转基因斑马鱼卵细胞的凋亡和消融

【目的】构建针对斑马鱼Danio rerio卵细胞的可诱导消融品系,并了解其卵巢组织在条件诱导下的去除规律和特性,为相关领域的应用提供材料基础。【方法】利用Tol2转座系统建立卵细胞特异表达硝基还原酶(Nitroreductase,NTR)的转基因斑马鱼品系;通过定期采样,连续观察、解剖、组织切片等方法研究甲硝唑(Metronidazole,Mtz)对成熟雌鱼外观及卵巢结构的影响;冰冻切片结合TUNEL检测,了解条件性诱导对卵巢细胞凋亡的影响。【结果】获得囊胚细胞具特异荧光标记的转基因鱼,并形成稳定遗传品系。经Mtz诱导,该品系成熟雌鱼卵巢结构逐步退化、萎缩,卵母细胞渐渐消融,提示NTR在卵细胞特异表达;检测发现Mtz可导致卵细胞的凋亡,推测卵巢的组织变化为细胞凋亡所致;撤销Mtz胁迫卵巢可再生并恢复生育功能,说明卵巢的消融过程是可逆的。【结论】获得的转基因斑马鱼可通过条件诱导实现卵巢消融与再生。     

猪胎儿卵母细胞发生早期的细胞凋亡变化

为研究猪卵母细胞发生早期卵巢上细胞的凋亡情况,制作妊娠33、40、46、54、61 d母猪胎儿卵巢的石蜡切片,并进行荧光染色。结果发现,母猪妊娠到33 d时,胎猪卵巢上即可见原始生殖细胞和卵原细胞的凋亡,随着妊娠时间的延长,凋亡也逐渐增加,妊娠33、40、46、54和61 d母猪胎儿卵巢上卵原细胞的凋亡率分别为3.13%、4.32%、5.50%、9.43%和11.10%,同时,颗粒细胞的凋亡率则分别为8.89%、12.45%、14.74%、17.96%和22.81%。结果说明,在猪胎儿卵母细胞发生早期,即开始发生了卵原细胞和颗粒细胞的凋亡,且有逐渐增加的趋势。     

抗氧化剂对牛卵巢颗粒细胞凋亡的抑制作用及凋亡机制的初步研究

研究抗氧化剂对血清饥饿诱导体细胞凋亡的抑制作用,并初步研究凋亡机制.体细胞为牛卵巢颗粒细胞,以AnnexinV/FITC法染色,流式细胞仪检测凋亡.在10％ FCS和0.5％FCS血清浓度下,第5代细胞在添加抗氧化剂维生素E、硒和谷胱苷肽后培养2d,检测细胞凋亡率.结果显示:添加有维生素E、硒和谷胺酰胺的10％ FCS培养的牛卵巢颗粒细胞凋亡率较对照组低,但差异不显著(P＞0.05).在0.5％ FCS饥饿诱导处理的颗粒细胞试验组,对照组的细胞凋亡率显著高于维生素E、硒和谷胺酰胺试验组(P＜0.05).培养液中添加z - VAD - fmk能够显著降低0.5％FCS试验组的细胞凋亡率(P＜0.05).说明在培养过程中添加抗氧化剂能有效抑制因血清饥饿诱导而产生的牛颗粒细胞凋亡,血清饥饿诱导细胞产生凋亡的过程包括caspase的激活.     

脂肪因子Chemerin对牛卵巢颗粒细胞凋亡与自噬的影响

[目的]本试验旨在探讨脂肪因子Chemerin在牛卵巢颗粒细胞凋亡与自噬中的作用。[方法]体外培养牛卵巢颗粒细胞并用重组Chemerin蛋白(0.2μg·mL~(-1))处理24 h,采用流式细胞术和CCK-8检测细胞凋亡,通过免疫荧光检测细胞中活性氧(ROS)含量变化,测定细胞超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量;RT-qPCR分析凋亡与自噬相关基因Bax、Bcl-2、Caspase-3、P62和Atg7 mRNA表达,Western blot技术检测凋亡与自噬相关蛋白表达情况。[结果]与对照组相比,Chemerin处理卵巢颗粒细胞后,细胞中ROS和MDA含量显著上升(P0.05),SOD和GSH-px活性极显著降低(P0.01)。凋亡相关基因Bax和Caspase-3 mRNA及蛋白表达水平显著升高,P62和Atg7 mRNA等的表达也显著上调(P0.05)。[结论]Chemerin可通过调控相关基因的表达诱导牛卵巢颗粒细胞凋亡并伴随自噬的发生。     

雌激素通过调控肝细胞更新促进CCl_4诱导的肝损伤修复

为探讨雌激素对肝损伤修复的调控作用,在CCl_4诱导的肝损伤模型基础上,比较了性别间肝损伤差异;进一步利用卵巢摘除小鼠模型及外源性雌激素补偿实验,分析了卵巢及雌激素对肝损伤的调控作用.结果表明,雌性小鼠肝脏组织气球样变性、炎性细胞浸润和纤维化均显著低于雄性小鼠;卵巢摘除导致雌性小鼠肝损伤和纤维化显著增强,肝实质细胞增殖和非肝实质细胞凋亡均显著减少;对卵巢摘除雌鼠补偿外源性雌激素处理显著降低了肝组织急性损伤和纤维化,同时显著促进肝实质细胞增殖和非肝实质细胞凋亡.表明卵巢雌激素参与了肝损伤修复调控过程,为性别间肝脏损伤的差异及性激素对肝病的调控提供理论基础.     

FOXO基因对印楝素诱导sf9细胞凋亡的影响

【目的】探讨印楝素（azadirachtin, AZA）通过转录因子FOXO诱导草地贪夜蛾卵巢细胞sf9凋亡的分子机制。【方法】将体外培养的草地贪夜蛾卵巢细胞分为AZA处理组和未处理组,采用CCK-8法检测AZA 对sf9 细胞增殖的影响;透射电镜观察sf9细胞的超微结构变化;流式细胞术分选Annexin V-FITC/PI染色的凋亡细胞;Western blot 检测p-FOXO及凋亡相关蛋白的表达情况; RNAi FOXO后,检测FOXO基因表达量与Caspase-3的酶活性变化。【结果】CCK-8检测发现AZA可显著抑制sf9细胞增殖,并呈时间和浓度依赖性;通过透射电镜检测到5 mmol/L AZA可破坏sf9细胞的微观结构,导致细胞核收缩,染色质聚集,细胞质空泡状;流式细胞术分选Annexin V-FITC/PI染色的凋亡细胞,发现AZA诱导sf9细胞凋亡与时间呈正相关;进一步通过Western blot检测凋亡相关蛋白,发现AZA可诱导凋亡相关蛋白 Bim和 Cleaved Caspase-3的表达水平显著增加,而P-FOXO蛋白表达量降低,FOXO总蛋白表达无明显差异;利用qRT-PCR进一步检测发现,FOXO基因表达量与AZA处理时间呈正相关,在此基础上通过RNAi技术沉默FOXO后,经AZA处理发现Caspase-3的酶活性显著降低。【结论】AZA可通过上调FOXO基因抑制草地贪夜蛾卵巢细胞sf9的增殖并诱导其凋亡。     

蒙古绵羊胎儿卵巢发育的组织学研究

对37-99 d胎龄的蒙古绵羊胎儿卵巢进行组织学观察。结果表明,绵羊胎儿在37 d,可以从外观上分辨雌雄,雌性胎儿的性腺初步出现卵巢的组织学特征;37-51 d为卵原细胞的共质体期,卵原细胞数量增长加快;55~76 d卵巢中逐渐充满大量的合胞体样卵母细胞群;从58 d开始卵巢皮质深层出现少量的形态不典型的原始卵泡。胎龄73 d时,皮质深层出现真正的原始卵泡;81 d时皮质中层出现大量原始卵泡;99 d时皮质深层中可看到一些初级卵泡。与成体卵母细胞相比,胎儿时期的生殖细胞有活跃的增殖分裂特征;生殖细胞发育按卵原细胞增殖→卵母细胞分化→形成原始卵泡的步骤发育,在位置分布上由卵巢皮质外层逐渐向皮质里层分步发育。     

长湖沙塘鳢个体繁殖力的研究

研究了长湖沙塘鳢(Odontobutisobscurus)体重、卵巢重和繁殖力的关系。结果显示,卵巢重、绝对繁殖力和相对繁殖力与体重间关系显著,随着体重的增加,卵巢重呈直线增加,绝对繁殖力呈对数曲线增加,相对繁殖力呈对数曲线减小。单位体重的卵巢重与体重关系不显著。     

肌动蛋白解聚因子Cofilin在小鼠卵母细胞中的表达

肌动蛋白解聚因子通过切断微丝,增加G-actin的浓度,从而促进细胞骨架的重组,影响细胞的迁移、增殖、凋亡等重要的生理功能.文章通过原位杂交技术在小鼠卵巢组织切片中观察到Cofilin的mRNA在卵母细胞中存在强表达,应用免疫荧光技术检测到Cofilin蛋白主要定位于GV期卵母细胞核内染色体附近,从而推测Cofilin可能与卵母细胞中染色质的凝集、移动及其他功能有关,参与调节哺乳动物卵母细胞的发育.     

发情间期注射PMSG对猪卵泡发育及颗粒细胞凋亡影响的研究

为探讨孕马血清促性腺激素 (PMSG)对猪卵泡发育和闭锁及颗粒细胞凋亡的影响 ,实验采用性成熟肥育母猪为实验材料 ,对在情期第 11d(发情当日为 0 d)注射 PMSG后 2 4 ,4 8,72和 96 h的猪卵巢表面各类卵泡数量、颗粒细胞凋亡比例以及外周血浆中类固醇激素浓度等进行了研究。结果表明 ,注射 PMSG后 2 4 h卵巢表面卵泡总数、小卵泡 (直径 <3mm)数和中等卵泡 (直径 3～ 5 m m)数分别为 :5 9,32和 2 5 .5个 /卵巢 ,明显多于同期对照组 (情期第 12 d)猪的数量 ;注射 PMSG72和 96 h卵巢表面大卵泡 (直径≥ 5 m m)数量分别为 7和 6个 /卵巢 ,明显多于对照组 (情期第 14和第 15 d) ,而此时卵汇总数却明显低于对照组。大卵泡颗粒细胞的凋亡比例在注射 PMSG后与对照组相比无显著差异 ,而小卵泡和中等卵泡的颗粒细胞的凋亡比例在注射 PMSG后 2 4 h(6 .4 %和 7.8% )显著 (P<0 .0 5 )降低 ;中等卵泡颗粒细胞凋亡比例到 PMSG后 72 h回升至与对照组无显著差异 ,小卵泡颗粒细胞凋亡比例于 PMSG后 96 h回升至与对照组无显著差异。血清中雌二醇浓度在 PMSG注射后明显升高 ,在 PMSG注射后72 h时达最高值 (72 .3pg· m L- 1 ) ,显著高于对照组 (10 .8pg· m L- 1 )。孕酮的浓度在 PMSG注射后无明显变化。以上结果表明 ,在体内条     

2022 年 5 期目录

  目的  杨絮是由杨树子房胎座表皮细胞发育而来的种毛,近年来已成为我国北方城市环境问题之一。目前对杨树种毛发育基因的研究还不深入,本研究将2个在杨树子房发育过程中差异性表达、且基因注释均与棉纤维发育相关的基因（PeCFL1和PeCFL2）作为种毛发育调控的候选基因,探究二者在欧美杨‘渤丰3号’中表达的时空特异性,为深入研究该基因在杨絮发育过程中的调控作用及基因工程手段改良杨树品种奠定基础。  方法  取‘渤丰3号’杨越冬花枝,采集水培4、5、6、7、8、12 d的雌花序,进行固定、石蜡包埋、切片,观察子房发育及种毛的形态发生过程。采用实时定量PCR检测PeCFL1和PeCFL2基因在‘渤丰3号’杨雌花序发育过程中以及在根、茎、叶等营养器官中的表达模式。利用原位杂交技术检测PeCFL1和PeCFL2基因在杨树花器官中的组织表达特异性,揭示杨絮发育调控相关候选基因PeCFL1和PeCFL2的时空表达模式。  结果  ‘渤丰3号’杨雌花枝水培12 d后,子房胎座底部出现纤维状结构,杨絮开始形成。PeCFL1和PeCFL2在‘渤丰3号’杨根、茎、叶及雌花枝腋芽中微量表达,在水培4 ~ 7 d的雌花序中表达量较少,水培8 d后表达量开始显著升高,12 d时表达量继续大幅上升,此时的石蜡切片可见子房胎座底部纤维状结构。原位杂交结果显示,PeCFL1和PeCFL2基因在杨树子房的子房壁和胎座部位表达。  结论  种毛发育调控相关候选基因PeCFL1和PeCFL2在‘渤丰3号’杨雌花子房胎座底部出现纤维状结构时表达显著升高,并在胎座底部纤维状结构和子房壁中特异性表达,说明其与种毛发育调控密切相关,可作为基因工程改良杨树飞絮的目标基因。      

番茄子房心室形成与花芽分化期幼苗茎尖相关代谢物质含量的关系

    为探讨番茄子房心室形成过程中相关体内代谢物质的作用,应用番茄多心室自交系(MLK1)和少心室自交系(FL1)进行正反交,研究亲本及正反交F1代(F1、RF1)花芽分化初期、花芽分化期、萼片花瓣形成期、心皮形成初期、子房心室完全形成期5个时期幼苗茎尖体内代谢物质果糖、葡萄糖、蔗糖、淀粉、可溶性蛋白、DNA、RNA含量的变化及其与子房心室形成的关系.结果表明,番茄两亲本在花芽分化5个时期的果糖、葡萄糖、蔗糖、淀粉、可溶性蛋白、DNA舍量均是多心室亲本高于少心室亲本;RNA含量则是少心室亲本高于多心室亲本;正反交F1和RF1在幼苗花芽分化各时期茎尖果糖、葡萄糖、可溶性蛋白、DNA、RNA含量均介于多心室和少心室亲本之间;这些结果与心室数的变化相一致.进一步分析番茄花芽分化5个时期幼苗茎尖相关代谢物质含量与子房心室数的相关关系表明.番茄子房心室数与萼片花瓣形成期葡萄糖、蔗糖、淀粉、可溶性蛋白含量呈极显著正相关,与RNA含量呈极显著负相关,而与果糖、DNA含量呈显著正相关;这一结果预示着番茄子房·心室形成可能是果糖、葡萄糖、蔗糖、淀粉、可溶性蛋白、DNA、RNA等体内代谢物质之间相互作用的结果,同时也预示着萼片花瓣形成期可能是番茄子房心室形成的相关体内代谢物质调控的关键时期.     

蟹类繁殖力和卵巢发育研究进展

蟹类不仅是重要的经济甲壳动物，而且在海洋生态系中也扮演着重要的角色。其开发和利用已引起世界各国和地区的重视。从研究方法、影响因素和生产应用等方面，较系统地阐述了国内外对蟹类繁殖力和卵巢发育的研究现状。分析认为，繁殖力因种而异，并与栖息地纬度等因素有关。卵巢发育受到神经内分泌（神经激素和神经递质）和外界环境（温度、盐度、光照、底质等）等方面的影响。重量法和组织切片技术分别是当前繁殖力和卵巢发育研究的主要手段。体积法和解剖法在繁殖力研究中的应用有待于开发。卵巢发育研究应结合蟹类基础生物学，特别是生活史和习性等方面的研究。     

斑马鱼性腺组织的原代细胞培养技术的建立

[目的]建立斑马鱼卵巢和精巢组织的原代细胞培养技术,获得原代和传代培养细胞单层。[方法]采用组织块贴壁法进行斑马鱼卵巢和精巢组织的原代细胞培养,采用0.25%胰蛋白酶消化法进行传代培养。[结果]斑马鱼性腺组织的原代细胞培养条件为:最适培养基为DMEM/F12(p H 7.0~7.2),培养温度为24℃,在添加20 ng/m L表皮生长因子(EGF)、20 ng/m L碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)、0.5 mmol/Lβ-巯基乙醇和15%胎牛血清时更有利于细胞的存活。其中,卵巢的组织块接种3~4 d后,上皮样细胞首先开始迁出,迁出的上皮样细胞生长5 d后,逐渐凋亡;此后,成纤维样细胞和另一种上皮样细胞开始大量迁出,10 d后可生长汇合成80%的原代细胞单层;可成功传代培养1次,但传代后的上皮样细胞不贴壁,很快死亡,而传代后的成纤维样细胞可贴壁生长,但基本不分裂,健康存活7 d后开始逐渐凋亡。精巢组织接种5 d后,上皮样细胞和成纤维样细胞同时开始迁出,培养16 d后逐渐凋亡,仅得到60%原代培养细胞单层。[结论]初步建立了斑马鱼性腺组织的原代细胞培养条件,并将卵巢组织块迁出的成纤维样细胞成功传代1次。     

蟹类繁殖力和卵巢发育研究进展

蟹类不仅是重要的经济甲壳动物，而且在海洋生态系中也扮演着重要的角色。其开发和利用已引起世界各国和地区的重视。从研究方法、影响因素和生产应用等方面，较系统地阐述了国内外对蟹类繁殖力和卵巢发育的研究现状。分析认为，繁殖力因种而异，并与栖息地纬度等因素有关。卵巢发育受到神经内分泌（神经激素和神经递质）和外界环境（温度、盐度、光照、底质等）等方面的影响。重量法和组织切片技术分别是当前繁殖力和卵巢发育研究的主要手段。体积法和解剖法在繁殖力研究中的应用有待于开发。卵巢发育研究应结合蟹类基础生物学，特别是生活史和习性等方面的研究。