热应激对羊成肌细胞部分miRNA的影响及其生物信息学分析与靶基因预测

[目的]本文旨在探究热应激对羊成肌细胞部分miRNA的影响,并对miR-23a、miR-24、miR-27a-3p和miR-30a-5p进行生物信息学分析与靶基因预测,揭示热应激下miRNA影响骨骼肌发育的调控机制。[方法]通过RT-qPCR技术研究热应激对羊成肌细胞miRNA表达量的影响;利用miRBase数据库获取不同物种中miR-23a、miR-24、miR-27a-3p和miR-30a-5p的前体序列和成熟序列,并利用MEGA X软件构建系统进化树进行相似性分析;通过TargetScan、miRDB、RNA22、miRWalk对上述miRNA进行靶基因预测,使用DAVID对预测出的共同靶基因进行GO功能与KEGG通路富集分析,最后进行miRNA、共同靶基因与KEGG通路的关联分析。[结果]热应激显著下调羊成肌细胞在增殖阶段与分化阶段miRNA的表达。miR-23a、miR-24、miR-27a和miR-30a在不同物种间的保守性较高,除了牛的miR-24以外,成熟序列基本相同,种子序列完全一致。预测出的共同靶基因主要富集在细胞增殖、分化、周期、凋亡、迁移等GO条目,以及mTOR...     

奶牛隐性酮病的监测与分析

本试验选取40头荷斯坦奶牛,其中高产奶牛20头,中产奶牛10头,低产奶牛10头,通过对乳中酮体检测进行奶牛隐性酮病的监测与分析。试验采用酮粉法等4种方法和水杨醛比色法分别定性和定量检测酮体,采用氧弹式热量计测定日粮能量。结果表明,高产奶牛酮病发生率较高,酮粉法判定泌乳奶牛隐性酮病具有敏感、准确的特点,奶牛隐性酮病与日粮能量水平、泌乳时间均存在较强负相关,相关系数分别为-0.846和-0.764。     

基因打靶备乳腺生物反应器研究进展

基因打靶技术是建立在胚胎干细胞和同源重组技术之上,可对基因组进行定点修饰的实验方法。用基因打靶技术制备乳腺生物反应器,克服了显微注射法的众多缺陷。本文简述了制备乳腺生物反应器过程中基因打靶的策略、靶细胞、打靶位点及国内外研究进展和展望等。     

西门塔尔牛肌内和皮下脂肪miRNA表达谱及miR-27b靶基因分析

【目的】通过分析西门塔尔牛肌内脂肪和皮下脂肪差异表达miRNA,及对重要的候选miRNA-27b进行靶基因预测及相关生物信息学分析,探索miRNA在动物肌内脂肪生长、发育过程中的作用及其调控机制。【方法】利用miRNA微阵列芯片技术对肌内脂肪和皮下脂肪miRNA表达谱进行检测和分析以筛选差异表达miRNA;qRT-PCR方法验证4个在肌内脂肪显著高表达的候选miRNAs;采用Targetscan生物信息学计算方法预测目标miR-27b（对肌内脂肪沉积可能起重要调节作用）的靶基因,并对靶基因进行GO注释描述、富集分析及KEGG富集。【结果】miRNA芯片分析发现肌内脂肪和皮下脂肪共有88个差异表达极显著miRNA（P＜0.01）。候选的4个在肌内脂肪高表达miRNAs（miR-140、miR-145、miR-143、miR-27b）的qRT-PCR检测结果与芯片分析结果具有很好的一致性。KEGG富集显示,目标miR-27b的预测靶基因在MAPK、Wnt、Hedgehog、TGF-beta、GnRH等信号通路中显著富集,其中在MAPK信号通路中富集度最高。【结论】牛肌内脂肪和皮下脂肪组织中确实存在一些差异表达的miRNAs,某些重要的在差异高表达miRNA（如miR-27b）可能以独特的通路（如MAPK信号）来调节牛肌内脂肪的形成过程。     

乳尿素氮的监测及与乳蛋白水平相关性分析

选取南京某奶牛场中国荷斯坦奶牛为试验对象,应用酶解-水杨酸盐光度法与二乙酰一肟法2种检测方法对奶牛乳中尿素氮含量检测,发现该牛场高产牛乳尿素氮含量高于中产牛和低产牛,乳蛋白水平与乳尿素氮含量存在相关性。综合分析,该奶牛场奶牛乳蛋白水平高于3.0%时乳尿素氮浓度为14～16.5mg/dL,乳蛋白含量低于3.0%时乳尿素氮浓度为不高于14mg/dL。     

茶多酚对氧化应激所致奶牛乳腺上皮细胞损伤的保护作用

用过氧化氢(H2O2)建立体外奶牛乳腺上皮细胞的氧化应激损伤模型,研究不同质量浓度茶多酚对氧化应激所致奶牛乳腺上皮细胞损伤的影响。MTT法检测细胞存活率,比色法检测细胞培养液中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和乳酸脱氢酶(LDH)活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,分光光度法检测天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的活性。结果显示:与H2O2损伤模型组相比,20～100μg.mL-1茶多酚处理组的奶牛乳腺上皮细胞存活率、SOD活性显著升高,而MDA含量、LDH与Caspase-3相对活性与细胞凋亡率均下降,其中以100μg.mL-1茶多酚处理组效果最显著,说明一定质量浓度的茶多酚可以缓解氧化应激所致的奶牛乳腺上皮细胞的损伤,提高细胞存活率,抑制乳腺细胞凋亡。结论:茶多酚对乳腺上皮细胞氧化应激损伤具有保护作用,其保护作用可能与降低MDA含量,增强SOD活性及抑制Caspase-3活性有关。     

DHA对脂肪细胞周期及COX-2 mRNA表达的调节

以大鼠前体脂肪细胞原代单层培养为模型，分别以0(对照组)、40(低剂量组)和160 μmol/L(高剂量组)的二十二碳六烯酸(DHA)处理未分化的前体脂肪细胞(培养第1天)和分化的脂肪细胞(分化第1天)。采用流式细胞仪(FCM)检测细胞周期分布；逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析环氧合酶-2(COX-2 )mRNA表达情况，探讨DHA对脂肪细胞周期及基因表达的调节作用。结果显示，未分化的前体脂肪细胞经DHA作用48 h，各处理组前体脂肪细胞G1期百分比均呈上升趋势，但与对照无显著性差异；分化的脂肪细胞经DHA作用24 h，40 μmol/L组细胞内COX-2 mRNA的表达量显著下降，而160 μmol/L组则显著增加。以上结果表明，DHA对大鼠前体脂肪周期无明显的调节作用，而对脂肪细胞内COX-2 mRNA的调节具有明显的浓度依赖效应。     

过瘤胃蛋氨酸对热应激下奶牛生产性能、淋巴细胞凋亡以及相关基因的影响

选取16头泌乳荷斯坦奶牛,根据年龄、胎次、泌乳时间和产奶量等进行配对,随机分为对照组和试验组,试验组奶牛每天每头补饲12 g过瘤胃蛋氨酸,研究夏季热应激下补饲过瘤胃蛋氨酸对奶牛生产性能、血液生化指标、淋巴细胞凋亡以及相关基因表达的影响.淋巴细胞凋亡采用流式细胞仪检测,Bcl-2和Bax mRNA采用定量PCR测定.结果发现:与对照组相比,夏季奶牛饲喂12 g/d过瘤胃蛋氨酸,有提高产奶量、乳脂率、乳蛋白、乳糖和非脂固形物的趋势;体细胞数呈下降趋势;奶牛血液中谷丙转氨酶、谷草转氨酶和磷酸肌酸激酶均有所下降,但差异均不显著(P>0.05);乳酸脱氢酶水平下降了10.37%,差异显著(P<0.05).碱性磷酸酶、葡萄糖、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶呈增加趋势,丙二醛水平降低,但差异均不显著(P>0.05).与对照组相比,饲喂12 g/d过瘤胃蛋氨酸组,奶牛外周血液淋巴细胞凋亡率降低了36.39%,差异极显著(P<0.01);瘤胃蛋氨酸组奶牛外周血液淋巴细胞Bcl-2 mRNA基因丰度提高了11.92%;Bax mRNA基因丰度下降了17.30%;Bcl-2 mRNA与BaxmRNA比值提高了36.36%,但差异均不显著(P>0.05).以上结果表明夏季奶牛补饲过瘤胃蛋氨酸可以提高奶牛生产性能,清除体内自由基,减少外周血液中淋巴细胞凋亡,上调抗凋亡基因和抑制促凋亡基因表达,有缓解热应激的作用.     

基因打靶制备乳腺生物反应器研究进展

基因打靶技术是建立在胚胎干细胞和同源重组技术之上，可对基因组进行定点修饰的实验方法。用基因打靶技术制备乳腺生物反应器，克服了显微注射法的众多缺陷。本文简述了制备乳腺生物反应器过程中基因打靶的策略、靶细胞、打靶位点及国内外研究进展和展望等。