诱导子促进链霉菌702产农抗702作用机制的初探

为探讨诱导子诱导链霉菌702产农抗702的作用机制。将大肠杆菌诱导子添加链霉菌702中,测定链霉菌702发酵过程中生化指标,异柠檬酸脱氢酶(ICDHc)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、丙酮酸脱氢酶(PDH)酶活测定以及采用凝胶电泳法分析菌体蛋白质谱带变化。结果显示,与对照相比,添加诱导子促进农抗702提前合成,可溶性氨基氮、p H值上升;发酵末期,农抗702的效价提高了47.18%。诱导子添加浓度为3.1μg/m L时,ICDHc、ACC、PDH酶活及总蛋白浓度最大,分别为1.15,0.17,0.75 U,3.38 mg/m L,比对照分别提高了2.24、2.31、0.22、0.22倍。在蛋白质分子质量为20~80 ku,对照蛋白电泳图谱有12条条带,诱导子添加浓度为1.1和3.1μg/m L时,电泳图谱中有14条条带,且有10条带比对照明显增强。试验表明,诱导子促进了农抗702的合成,提高了ICDHc、ACC、PDH酶活及总蛋白浓度,且蛋白质的种类和含量与对照差异显著,可为揭示诱导子促进微生物产次级代谢物的作用机制提供一定的参考。     

高效诱导子的制备方法及诱导成分研究

为了筛选大肠杆菌高效诱导子的制备方法,拟通过不同的物理、化学、生物方法破碎菌体获得诱导子,测定诱导子还原糖含量,在链霉菌702发酵过程中添加诱导子并测定农抗702的效价,采用有机溶剂萃取分离法对诱导子的主要作用成分进行初步分析。结果表明,研磨法与冻融法结合使用,诱导子的含糖量为1.46 mg/m L,比对照提高了245.15%;溶菌酶含量为0.8 mg/m L,保温时间为24 h时所得诱导子诱导链霉菌702产农抗702的量为380.88μg/m L,比对照提高了39.70%,差异显著;大肠杆菌诱导子中的多糖、蛋白质以及一些非蛋白、非多糖类的小分子物质对农抗702的合成具有诱导作用,并且其极性与乙酸乙酯相近。     

毛酸浆果醇提物抑菌机理的初步研究

通过观察大肠埃希菌标准菌株、金黄色葡萄球菌标准菌株生长曲线和菌体超微结构的变化,探讨毛酸浆果醇提物的可能抑菌机理。以金黄色葡萄球菌标准菌株和大肠杆菌标准菌株作为指示菌,在分别绘制细菌生长曲线的基础上,于不同时间点蜕察加药后细菌生长曲线的变化,并以透射电镜观察细菌菌体超微结构的改变。在毛酸浆果醇提物最低抑菌浓度作用下,大肠埃希菌标准菌株生长曲线的各时间点菌体浓度OD值始终保持在0．5以下。透射电镜下可见：大肠埃希菌标准菌株生长0h时,细菌出现明显的分裂相;4h后,大肠埃希菌菌体内部出现许多空泡,分裂相明显减少;8h后,出现较多死亡菌体。毛酸浆果醇提物能有效地抑制大肠埃希菌的生长,使大肠埃希菌的菌体结构出现质壁分离、空泡样变和死亡现象。     

NTG-LiCl复合诱变选育链霉菌702菌株

为筛选出产新农抗702的高产链霉菌702突变株.分别以链霉菌702菌株为试验材料和以庆大霉素为敏感抗生素,NTG-LiCl复合诱变链霉菌702菌株,获得抗庆大霉素突变株.NTG处理90 min对菌株的致死率可达71.56%,抗药性突变率高达19.46%,获得的抗药性突变株经过摇瓶初筛和复筛,获得高产突变株13-18-52菌株,产抗新农抗702的摇瓶发酵单位达到1 946 μg/mL,比出发菌株发酵单位1 416 μg/mL提高了37.43%.采用抗药性致死突变标志的NTG-LiCl复合诱变筛选模型可以获得产新农抗702的链霉菌702高产菌株.     

美国山核桃叶的抗菌作用

对美国山核桃Carya illinoensis叶进行体外抗菌作用研究,以期开发出一种新型的天然杀菌剂。美国山核桃叶经体积分数为75%乙醇提取后,采用系统溶剂法将抽提物分为石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇和水等5个不同极性的提取物。采用滤纸片法,检测以上提取物对黄曲霉菌Aspergillus flavus,根霉菌Rhzopus oryzae,青霉菌Penicillium sp.,酵母菌Saccharomyces cerevisiae,大肠埃希菌Escherichia coli和枯草杆菌Bacillus subtilis等的抑菌效果,并计算各提取物对真菌的半数抑菌质量浓度(CE50)。结果表明:乙酸乙酯提取物对青霉菌、根霉菌、黄曲霉菌和枯草杆菌均表现出明显的抑菌效果且差异显著(P<0.05,P<0.01),抑菌圈直径均值分别为9.18,10.86,8.26,10.18mm,但对于黄曲霉菌石油醚提取物(CE500.91 g·L-1)的抑菌效果优于乙酸乙酯提取物(CE50>200 g·L-1);而正丁醇提取物对酵母菌和大肠埃希菌表现出明显的抑菌效果且差异显著(P<0.05,P<0.01),其抑菌圈直径均值分别为11.13,8.83 mm,但对于大肠埃希菌水提物的抑菌效果优于正丁醇提取物,其抑菌圈直径均值为9.13 mm。综上,美国山核桃叶的正丁醇提取物和乙酸乙酯提取物抑菌效果最佳。针对这一实验结果,可以根据防治对象不同,采用不同的提取方法和工艺,研发专菌专治的天然杀菌剂,以提升杀菌剂的作用效果。     

F17大肠埃希菌黏附湖羊小肠上皮细胞模型的初步建立

为探究F17大肠埃希菌对湖羊小肠上皮细胞的黏附机制,以体外培养的小肠上皮细胞和F17大肠埃希菌为研究对象,根据黏附后培养过夜的菌落数,调整黏附时间与感染复数(MOI),获取最佳黏附条件,初步建立F17大肠埃希菌黏附小肠上皮细胞的细胞模型;利用实时荧光定量PCR分别检测F17大肠埃希菌黏附后及脂多糖(LPS)诱导后的白细胞介素(IL)-6、IL-8和IL-1β的表达情况来鉴定该模型。结果表明:F17大肠埃希菌黏附3 h与黏附1、2、4 h时,黏附MOI=100∶1与MOI=200∶1、400∶1、500∶1差异显著,即F17大肠埃希菌黏附MOI=100∶1、黏附时间3 h为最佳黏附条件;小肠上皮细胞免疫相关基因的表达量随黏附时间、诱导时间发生显著变化;与LPS诱导模型相比, F17大肠埃希菌黏附模型更能模拟细菌黏附细胞的生理状态,说明模型建立成功。     

大肠埃希氏细菌中ESBLs耐药质粒的传播与消除研究

【目的】研究大肠埃希氏细菌中超广谱β-内酰胺酶(Extended-spectrumβ-lactamases,ESBLs)耐药质粒的传播及氯丙嗪对其的消除效果。【方法】采集河南开封和安阳疑似大肠埃希氏细菌病病死鸡、猪典型病料,经细菌学检验后,用试管二倍稀释法测定头孢噻呋和头孢曲松对致病性大肠埃希氏细菌的最小抑菌浓度(MIC),用双纸片协同法和PCR扩增法进行ESBLs检测。以安阳猪和开封鸡大肠埃希氏细菌作供体菌、DH5α为受体菌,进行ESBLs耐药质粒的接合传递试验。用氯丙嗪作消除剂,以SDS为对照,对大肠埃希氏细菌分离株ESBLs耐药质粒进行消除试验。【结果】从疑似大肠埃希氏细菌典型病料中分离到了大肠埃希氏细菌;头孢噻呋和头孢曲松对分离菌株的最小抑菌浓度分别为32~64和64~128μg/mL;检测到了ESBLs耐药质粒的存在,且其能在大肠埃希氏细菌间传播,氯丙嗪对其第12次的消除率高达98.83%。【结论】ESBLs耐药质粒可通过接合转移方式传递至感受态大肠埃希氏细菌中,氯丙嗪对其消除效果很好。     

链霉菌702菌落形态对其所产生物活性物质的影响

通过对链霉菌702自然选育,挑选出5种不同形态的单菌落,对其分别进行摇瓶发酵,测定发酵液中的生物活性物质。结果表明,在固体培养基中不产色素的菌落发酵后不产生具有抑菌作用的生物活性物质,为选育产生物活性物质的链霉菌702菌株提供一种简便方法。     

香水百合总黄酮提取液体外抑菌活性研究

建立了香水百合(Lilium casa blanca)中总黄酮提取液体外抑菌活性的测定方法。以70%乙醇水溶液提取香水百合中的总黄酮,以芦丁为标准品,利用分光光度法测定其总黄酮含量。以金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌为供试菌,采用滤纸片法和最低抑菌浓度法(MIC)测定了提取液的体外抑菌活性。结果表明,香水百合中总黄酮含量为137 mg/g(13.7%);总黄酮提取液对金黄色葡萄球菌的抑菌圈平均直径为13.25 mm,对大肠埃希氏菌的抑菌圈平均直径为9.75 mm;最低抑菌浓度分别为0.587 5 mg/m L(金黄色葡萄球菌)和2.350 0 mg/m L(大肠埃希氏菌)。香水百合总黄酮提取液具有一定的抑菌活性,且对金黄色葡萄球菌的抑菌效果比大肠埃希氏菌好。     

复合型微生态制剂对断奶仔猪肠道有害菌的抑制作用

复合型微生态制剂对断奶仔猪肠道内有害菌 (大肠埃希菌和沙门氏菌 )的抑制作用试验结果表明 ,饲养 12h后 ,试验组 (基础日粮添加 0 .1%复合型微生态制剂 )断奶仔猪肠道大肠埃希菌和沙门氏菌的繁殖开始受到抑制 ;饲养48h后 ,试验组断奶仔猪肠道大肠埃希菌和沙门氏菌的数量分别只有对照组的 0 .85 %和 0 .2 5 % ,均达到了极显著差异水平。     

链霉菌702发酵液对水稻种传真菌的抑制效果、种子发芽率的影响

对江西省6个水稻主栽品种种传真菌进行了检测,研究了链霉菌702发酵液对水稻种传真菌的抑制效果及对种子发芽率的影响.结果表明,6个水稻主栽品种不同程度带有稻毛锥孢菌、镰刀菌等真菌,种子带菌率在52%以上.3种药剂处理和链霉菌702发酵液处理后均能有效抑制种传真菌,达到极显著水平,说明链霉菌702发酵液可以有效防治因种传真菌引起的幼苗病害.链霉菌702发酵液处理种子后,种子的发芽率受到一定影响,但没有达到显著水平,说明将链霉菌702发酵液用于水稻种子种传真菌防治的药剂是安全的.     

链霉菌702所产抗真菌物质对水稻纹枯病菌的抑菌机制研究

研究了链霉菌702所产抗真菌活性物质对水稻纹枯病菌的抑菌机制,结果表明:702对纹枯病菌菌丝生长有强烈的抑制作用,EC50为1.128 05 mg/L;能显著的引起菌丝细胞内原生质凝集;对菌核及孢子的萌发有较强的抑制作用,15.11 mg/L和10.64 mg/L完全抑制菌核和孢子的萌发;对孢子形成也有一定的阻碍作用,22.66 mg/L完全抑制孢子形成.     

链霉菌702所产生物活性物质对熟肉制品的保藏研究初探

研究了冷藏条件下经链霉菌702所产生物活性物质处理的熟肉制品的保藏效果。结果表明：其可有效抑制熟肉制品菌数的增长，明显延长货架期，且与Nisin、Natamycin有同样的抑制细菌的效果。     

不同条件下植物病原真菌对链霉菌702的敏感性研究

[目的]研究不同条件下植物病原真菌对链霉菌702的敏感性变化。[方法]以水稻纹枯病菌、小麦赤霉病菌和烟草赤星病菌为供试菌,在不同氮(N)、磷(P)、钾(K)水平和不同温度条件下观察3种植物病原真菌对链霉菌702的敏感性变化。[结果]随着N水平的提高,纹枯病菌菌落直径生长速度减缓,气生菌丝增加,而赤霉病菌与赤星病菌的菌丝生长变化不明显。随N含量的增加,702对3种病菌的抑制率逐渐下降,随着P含量的增加,702对供试菌的抑制率显著增加,随着K含量的增加,702对供试菌的抑制率变化差异不大。当培养温度分别在30、25、25℃时,链霉菌702对水稻纹枯病菌、小麦赤霉病菌和烟草赤星病菌的抑制率最高。[结论]该研究为链霉菌702有效合理地应用及更好的防治植物病原菌提供了科学依据。     

702生物防腐剂对细菌、霉菌和酵母菌类抑菌效果的初步测定

链霉菌 70 2摇瓶发酵液用无水乙醇提取 ,制备成 70 2生物防腐剂 2 0 0倍稀释液。分别在牛肉膏蛋白胨培养基平板上测定了 6种不同的细菌 ,在马铃薯葡萄糖培养基平板上测定了 9种霉菌和 4种酵母菌。除大肠杆菌的抑菌效果为 93 %外 ,其余菌的抑菌效果达到 1 0 0 % ;对制备好的平板暴露在空气中自然接种微生物的抑菌效果也达到 1 0 0 %。     

链霉菌702发酵液对水果的防腐保鲜作用初探

对链霉菌702发酵液对苹果、梨、猕猴桃、甜瓜的防腐保鲜作用进行了研究。通过测定不同处理的失重率及观察水果的贮藏外观表明,链霉菌702发酵液的酒精浸提稀释100倍液与10mg／L纳他霉素能减慢水果的水分蒸发,抑制有害菌生长,对水果有较好的防腐保鲜效果。     

链霉菌702发酵液对草莓保鲜作用的研究

采用链霉菌702发酵液对草莓的防腐保鲜效果进行了研究。通过测定不同处理草莓的含糖量、Vc变化和腐烂指数及重要的贮藏外观表明，链霉菌702发酵酒精浸提稀释50倍液和250mg／L纳他霉素处理的草莓的糖降解进度减缓，Vc含量维持较高含量，腐烂指数明显低于对照．且链霉菌702发酵液处理优于250mg／L纳他霉素处理。试验结果表明，链霉菌702发酵液对草莓有较好的保鲜效果，可有效的降低微生物的生长。     

颈盲蝽取食对薇甘菊叶片防御性酶活性的影响

为探明颈盲蝽Pachypeltis sp.取食对薇甘菊叶片内主要防御酶活性的影响,以薇甘菊为材料,室内条件下测定颈盲蝽取食12,24,48,96 h后薇甘菊叶片中过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)及苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性。结果表明,颈盲蝽取食后薇甘菊叶片中的POD和PAL的活性下降,PPO活性提高。取食48 h后,处理组叶片中POD和PAL活性分别下降了5191%和7500%,而相应的对照组叶片则分别下降了3234%和4986%;处理组和对照组叶片PPO活性分别上升了37173%和12113%。     

拮抗放线菌M18的分离鉴定及杀菌活性研究

从山西大同地区采集的土样中分离到一株具有广谱杀菌活性的链霉菌菌株M18,经初步鉴定为链霉菌属的黄色类群(Streptomyces. flavus)。杀菌活性测定表明:M18菌株与大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、烟草赤星病菌、马铃薯干腐病菌有拮抗作用,抑菌圈透明且直径达到了20 mm以上。M18菌株的发酵原液对西瓜枯萎病菌、番茄早疫病菌、苹果轮纹病菌、玉米大斑病菌、小麦赤霉病菌、苹果炭疽病菌的菌丝生长抑制率均在75%以上,对苹果腐烂病菌、玉米大斑病菌、棉花枯萎病菌孢子的萌发抑制率在50%以上,对假丝酵母菌、枯草芽孢杆菌有明显抑制的作用。     

链霉菌702抗尖孢镰刀菌次级代谢产物的分离鉴定及活性研究

从链霉菌702代谢产物中分离纯化抗尖孢镰刀菌的活性成分.以抗尖孢镰刀菌活性为导向,采用多种色谱分离技术对活性成分进行分离纯化,并对其理化性质和波谱学数据进行测定和综合解析,鉴定其化学结构.结果从链霉菌702代谢产物中分离得到1个多烯大环内酯化合物,经鉴定为制霉色基素(Fungichromin),该化合物具有显著的抗尖孢...