家蚕蛹线粒体DNA EcoRI 1.9kb片段的克隆及序列分析

克隆了二化性家蚕蛹体的线粒体ＤＮＡ ＥｃｏＲ Ｉ酶解１．９ｋｂ片段，并进行了序列测定。结果表明：克隆片段中包含完整的线位体赖氨酸转移ＲＮＡ（ｔＲＮＡ－Ｌｙｓ）基因、天冬氨酸转移ＲＮＡ（ｔＲＮＡ－Ａｓｐ）基因、ＡＴＰ合酶亚基Ⅷ基因和细胞色素Ｃ氧化酶亚基Ⅱ、ＡＴＰ合酶亚基Ⅵ基因的部分序列。并与果蝇线粒体ＤＮＡ的同源性和参照果蝇线粒体ＤＮＡ密码子翻译的氨基酸顺序进行了比较，由ｔＲＮＡ的一级结构推断出可能     

福建黄兔线粒体DNA的限制性内切酶分析

本文用差速离心法分离福建黄兔线粒体，氯化铯超速离心法纯化线粒体ＤＮＡ。对纯化的ｍｔＤＮＡ用ＢａｇＩＩ，ＢａｍＨＩ，ＣｌａＩ，ＥｃｏＲＩ，ＥｃｏＲＶ，ＭｌｕＩ，ＰｓｔＩ，ＰｖｕＩ，ＳａｃＩ等９种限制性内切酶进行酶切分析。共识别了１７个酶切位点。经测算福建黄兔ｍｔＤＮＡ的分子量约为１８．４５Ｋｂ。     

动物mtDNA遗传研究进展及在育种上的应用

动物ｍｔＤＮＡ遗传研究进展及在育种上的应用魏彩虹（甘肃省畜牧兽医研究所平凉７４４０００）自从Ｎａｓｓ（１９６２）发现线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）以来，有关ｍｔＤＮＡ的遗传结构、复制、转录、基因表达与调控等方面已积累了丰富的资料。动物的ｍｔＤＮＡ是共价闭...     

蜜蜂线粒体DNA碱变性提取法

一、前言线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）已被广泛应用于动植物群体遗传学和进化生物学的研究中，并为分子系统学提供了有价值的比较生物学的数据，取得了许多非常有意义的结果。有效的ｍｔＤＮＡ提取方法，无疑是开展这方面研究的前提。而ｍｔＤＮＡ提取实验成功的标志是把染色体ＤＮＡ（即核ＤＮＡ）、蛋白质与ＲＮＡ尽量去除干净，从而获得一定得率和纯度的ｍｔＤＮＡ，以满足ｍｔＤＮＡ用于限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析中的酶切及聚合酶链式反应（ＰＣＲ）中酶切、拷贝和连接的需要。本试验用碱变性提取法，ＣｓＣｌ超速离心法和蛋…     

南国贩卖虎皮、虎骨案

２０００年１０月３１日凌晨，云南省大理市公安局治安大队成功地破获了一起团伙贩卖虎皮、虎骨的特大案件，严厉打击了走私、贩卖野生动物产品活动。 ２０００年是国家林业局确定的野生动物保护执法年，且虎产品、象牙等野生动物产品早就列入（ＣＩＴＥＳ）附录Ⅰ，禁止国际贸易。如令有人竟敢明目张胆地贩卖虎皮、虎骨。大理市公安局治安大队在执勤过程中，对大理市侨谊招待所内的一名中年男子所携带的两个大包装袋起疑，于是迅速在侨谊招待所附近布置了监控点，经过多日的埋伏，终于在１０月３１日早上将赵某等犯罪团伙捕获，并在侨谊招…     

狼消化系统的解剖

狼消化系统的解剖张淑云，王玉玺，刘玉堂（东北林业大学野生动物资源学院）狼（ＣａｎｉｓＬｕｐｕｓＬ．）是食肉目犬科中最大的动物，分布很广，各种景观均可见到，但到目前为止国内关于狼的解剖学资料尚未见报导。材料和方法在野外获雄狼两只（成体、亚成体各一只，解...     

蜜蜂线粒体DNA（mtDNA）研究进展

蜜蜂线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）研究进展王瑞武董捷乔广辉（中国农科院蜜蜂研究所，北京１０００９３）线粒体是细胞中进行能量代谢的重要细胞器。线粒体ＤＮＡ（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌＤＮＡ，ｍｔＤＮＡ）是线粒体中的遗传物质。长期以来，人们对ｍｔＤＮＡ的结...     

副结核分枝杆菌DNA探针的制备与应用

以溶菌酶、ＳＤＳ、高氯酸钠等处理提取副结核分析杆菌Ｃ２株染色体ＤＮＡ，经限制性内切酶Ｐｓｔ Ｉ消化后，以质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＳＫ为载体，通过Ｔ４ＤＮＡ连接酶连接，转入Ｅ。ｃｏｌｉ ＤＨ５ａ受体菌中，构建了副结核菌Ｃ２株的ＤＮＡ基因文库。应用反向杂交试验，从基因文库中筛选出４个重组克隆：ＰＴＰ１２、ＰＴＰ１９、ＰＴＰ３８。对这４个重组克隆进行酶切、电泳分析，结果表明４个插入片段长度分别为：４     

猪生殖与呼吸综合征病毒ORF6片段的cDNA克隆及鉴定

根据已发表的ＰＲＲＳＶ基因组序列，设计并合成了１对特异扩增ＡＴＣＣ ＶＲ－２３３２株的ＯＲＦ６的基因的引物，以ＡＴＣＣ ＶＲ－２３３２基因组为模板，通过ＲＴ－ＰＣＲ扩增出５８６ｂｐ的ｃＤＮＡ产物。将该ｃＤＮＡ片段经Ｔ－Ａ连接插入ｐＧＥＭ－Ｔｅａｓｙ载体中，用重组质粒转化大肠埃希氏菌ＪＭ１０９，获得重组质粒转化菌。对重南粒ＤＮＡ进行ＰＣＲ及酶切鉴定，证明插入的ＤＮＡ片段与ＰＣＲ扩增的ＤＮＡ片段大小相     

伊氏锥虫微环DNA的PCR扩增

伊氏锥虫是动物伊氏锥虫的病原体，属动基体目原虫，动基体ＤＮＡ（ＫｉｎｅｔｏｐｌａｓｔＤＮＡ简称ｋＤＮＡ）是该目原虫所特有的一种非染色体ＤＮＡ。因此，对ｋＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增可用于鉴定和检测伊氏锥虫。本文以５－ＣＡＡＣＧＣＡＡＡＧＡＧＴＣＡＧＴ－３’，５’－ＡＣＧＴＧＴＴＴＴＧＴＧＴＡＴＧＧＴ－３’为引物，对从伊氏锥虫直接抽提的总ＤＮＡ，ｋＤＮＡ以及ｋＤＮＡ基因重组子，经ＰＣＲ扩增后，在含有０．５μ     

基因探针和PCR对鲤吉陶单极虫的检测

采用液氮冷冻研磨法破碎吉陶单极虫（Ｔｈｅｌｏｈａｎｅｌｕｓｋｉｔａｕｅｉ）孢子，按常规法提取其基因组ＤＮＡ。取ＤＮＡＥｃｏＲＩ消化产物，采用低熔点琼脂糖回收法制备大（３．０～１５．０ｋｂ）、小（０．５～３．０ｋｂ）片段，将其克隆于ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔｋｓＥｃｏＲＩ位点，经α－互补现象、酶切鉴定和虫体ＤＮＡ生物素标记探针筛选，构建了含２３个克隆的基因文库，克隆片段介于０．９～６．８ｋｂ之间；经阳性克隆标记筛选及特性分析，制备了长度为０．９ｋｂ（１９号质粒克隆片段）的探针，该探针具有较强的敏感性和特异性。对该探针两端ＤＮＡ序列进行分析，设计出１对引物。上游引物序列为：５′ＴＴＴＣＧＡＡＣＣＣＧＣＡＣＡＡＣＡＡＧ３′，下游引物序列为：５′ＴＧＡＧＴＧＧＡＴＡＧ－ＴＡＴＣＧＣＴＧＣ３′。应用该对引物对虫体进行了检测     

家蚕线粒体基因组EcoRⅠ2.0kb片段的克降及序列分析

对家蚕线粒体基因组ＥｃｏＲⅠ２．０ｋｂ片段进行了克隆和序列分析，结果表明该片段包含完整的丝氨酸转移ＲＮＡ基因、ＮＡＤＨ氧化还原酶亚基Ⅰ基因、细胞色素氧化酶ｂ亚基基因的部分序列。与果蝇（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ）的ｍｔＤＮＡ进行了同源性比较，并根据无脊椎动物线粒体基因组密码子表，推定氨基酸序列。     

正义和反义Calpastatin cDNA真核表达载体的构建

本研究利用真核表达载体ｐＲＣ／ＲＳＶ，将位于ｐＢＳ－ＳＫ质粒中的ＣａｌｐａｓｔａｔｉｎｃＤＮＡ以正反两个方向构入载体；经酶切分析，构建的质粒结构正确。所构建质粒ｐＲＣ／ＲＳＶ正义、反义ＣａｌｐａｓｔａｔｉｎｃＤＮＡ两个表达载体，为进一步转化肌细胞，人为控制Ｃａｌｐａｓｔａｔｉｎ基因的表达，从而控制Ｃａｌｐａｉｎ活性，深入研究钙蛋白酶在肌肉发育及肉嫩化中的作用打下基础。     

中国伊氏锥虫kDNA小环的克隆及kDNA探针的建立

本研究以质粒ｐＧＥＭ－７Ｚｆ（＋）为载体，对我国北方和南方疫区伊氏锥虫动基体株的ｋＤＮＡ小环进行了克隆，并以其中之ｐＴＫ０１１－Ｃ＿１为探针对不同地理区的动基体株和无动基体株的不同ＤＮＡ进行杂交，结果表明，我国北、南两大疫区动基体株的ｋＤＮＡ小环大小均约为１ｋｂ，且均属Ａ型，ｐＴＫ０１１·Ｃ＿１只与动基体株的ｋＤＮＡ及ｔＤＮＡ杂交，不与其ｎＤＮＡ杂交，也不与无动基体株的任何ＤＮＡ及黄牛白细胞ＤＮＡ杂交。说明具有特异性，可以用于诊断。ｔＤＮＡ的杂交信号与ｋＤＮＡ相当，诊断中可以代替ｋＮＤＡ作为检测对象。     

家蚕微粒子病的PCR诊断技术研究

在ＤＮＡ水平上，以聚合酶链反应（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｏｎ，ＰＣＲ）技术检测家蚕微孢子虫的结果。设计、合成了两对引物，其中引物Ⅰ是针对家蚕微泡子虫（ＮｏｓｅｍａｂｏｍｂｙｃｉｓＮ．ｂ．）引物Ⅱ是针对变形孢子虫（ＶａｉｒｉｍｏｒｐｈａｎｅｃａｔｒｉｘＶ．ｎ，）的。用这两对引物分别对“桑尺蠖微孢子虫”孢子ＤＮＡ和Ｎ．ｂ．（镇江株）的纯孢子及其感染的幼虫、蛹及蛾的ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增，均获得预期的阳性条带；对不同引物扩增的产物进行了ＤＮＡ序列分析。初步认为引物Ⅰ可作为家蚕微孢子虫Ｎ．ｂ．特异性较高的检测引物，而引物１是微孢子虫共有的检测引物。进一步讨论了对家蚕微孢子的检测及分类上的问题。     

鸵鸟溃疡性肠炎的诊治

鸵鸟溃疡性肠炎的诊治王宗焕（东北林业大学野生动物资源学院哈尔滨１５００４０）１９９６年冬初对１只死亡的幼龄鸵鸟经病理解剖，细菌分离与培养，生化试验鉴定和动物接种实验等综合分析，确诊此幼鸵死亡的病因为肠道梭菌（Ｃｌｏｓｔｉｄｉ－ｕｍｃｏｌｉｎｕｍ）引起...     

PCR技术及其在动物胚胎性别鉴定中的应用研究

ＰＣＲ（ＰｏｌｙｍｅｒａｒｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ）为聚合酶链式反应或体外扩增技术，是１９８５年美国Ｃｅｔｕｓ公司人类遗传部、加利福尼亚大学洛杉矶和Ｈｏｗｇｈｅｓ医学院等联合创建的一项体外酶促扩增ＤＮＡ新技术，具有特异性强、敏感性高、操作简便、...     

中国伊氏锥虫kDNA小环的克隆及kDNA探针的建立

本研究以质粒ｐＧＥＭ－７Ｚｆ（＋）为载体，对我国北方和南方疫区伊氏锥虫动基体株的ｋＤＮＡ小环进行了克隆，并以其中之ｐＴＫ０１１－Ｃ１为探针对不同地理区的动基体株和无动基体株的不同ＤＮＡ进行杂交。结果表明，我国北、南两大疫区动基体株的ｋＤＮＡ小环大小均约为１ｋｂ且均属Ａ型。ｐＴＫ０１１－Ｃ１只与动基体株的ｋＤＮＡ及ｔＤＮＡ杂交，不与其ｎＤＮＡ杂交，也不与无动基体株的任何ＤＮＡ及黄牛白细胞ＤＮＡ杂交。     

家禽数量性状的DNA标记

家禽数量性状的ＤＮＡ标记严华祥译Ｊ．ＨＩＬＬＥＬ著自从１９８０年Ｂｏｔｓｔｅｉｎ等人采用ＲＦＬＰ作为一种新的遗传标记（Ｂｏｔｓｔｅｉｎ等，１９８０），１４年来ＤＮＡ标记领域发生了一场革命（Ｃｈｕｍａｋｏｖ等，１９９２；Ｗｅｉｓ－ｓｅｎｂａｃｈ等，１９...     

近亲华南虎仔人工哺育成功

近亲华南虎仔人工哺育成功谢柳英（广州动物园）华南虎（Ｐａｎｔｈｅｒａｔｉｇｒｉｓａｍｏｙｅｎｓｉｓ）被世界列为濒临灭绝的珍稀动物。它在动物园饲养的头数亦是屈指可数了。通过各种渠道扩大华南虎种群，拯救这一濒危物种，亦是野生动物工作者的义务和职责。广州动...