云南元江蔗田土壤放线菌多样性及对几种植物病原菌的抑菌活性

利用高氏I号培养基分离培养及菌株形态、生理生化鉴定和16 S r DNA序列分析法研究了云南元江县甘蔗田土壤放线菌,并采用对峙生长法测定了各放线菌对小麦全蚀病病原菌(Gaeumannomyces graminisr)、小麦根腐病病原菌(Cochliobolus sativus)、烟草赤星病病原菌(Alternar iaalternata)和水稻稻瘟病病原菌(Magnaporthe oryzae)的抑菌活性。结果表明:元江甘蔗田土壤中共发现典型土壤放线菌29株,其中28株为链霉菌属(Streptomyces),1株为纤维单胞菌属(Cellulomonas)。菌株G27对小麦根腐病病菌的抑制活性最高,抑菌率达到82.66%;对烟草赤星病菌和稻瘟病菌亦有较强的抑制作用,抑菌率分别为67.85%和65.88%。由此表明,云南元江蔗区甘蔗田土壤放线菌群落结构较单一,链霉菌为优势种群。G27菌株具有作物真菌病害生物防治资源菌开发的潜在价值。     

土壤拮抗链霉菌R15菌株发酵产物的抑菌作用

对一株土壤拮抗链霉菌(Streptomycespp.)R15菌株发酵液的抑菌效果、热稳定性和酸碱稳定性以及作用机制进行了初步研究。结果表明,拮抗链霉菌R15发酵液对棉花枯萎病菌分生孢子萌发抑制作用强,抑制率达98.37%。烟草赤星病菌孢子萌发后芽管顶端膨大成球形,芽管停止生长;烟草炭疽病菌孢子萌发后不能产生附着胞,且芽管顶端有突起。处理烟草黑胫病菌和辣椒疫霉病菌菌丝畸变、扭曲、菌丝壁消解;R15通过菌丝缠绕、穿透、紧贴的方式重寄生于烟草黑胫病菌菌丝上,致使菌丝断裂。链霉菌R15发酵液的热稳定性和酸碱稳定性较强,在20～55℃,pH3～9范围内都具有抑菌活性。     

生防菌XM-10抑菌活性测试及鉴定

[目的]针对生防菌XM-10进行抑菌活性测试及鉴定,为该菌株开发成环境友好型生物制剂奠定基础。[方法]采用对峙培养法测试了其对小麦赤霉病、黄瓜枯萎病、苹果轮纹病、大豆菌核病等9种病原菌的抑菌活性,并根据其个体形态特征、培养性状以及16s rRNA序列分析进行了鉴定。[结果]结果表明XM-10菌株对供试的9种致病菌均有不同程度的抑制作用,抑菌率在47.8%~87.6%之间,其中对小麦赤霉病菌和黄瓜枯萎病菌的抑制率分别达到了87.6%和83.7%,抑菌带在4.9~6.9 mm之间;经形态观察和16s rRNA序列分析将该菌株初步鉴定为黄灰链霉菌。[结论]生防菌XM-10的抑菌谱较广,为放线菌中的链霉菌属,在病害生物防治中具有良好的应用潜力和前景。     

抗农作物病原真菌的Streptomyces sp.IIR21菌株分离及其克拉维烷基因簇分析

从神农架烟草种植地土壤中分离出1株对7株农作物病原真菌具有抗性活性菌株,命名为ⅡR21菌株。采用琼脂块法测定,该菌株对稻瘟病菌、立枯丝核病菌、腐霉病菌、禾谷镰刀病菌和黄色镰刀病菌具有较强的抑菌活性。对该菌株的生理生化特性和16SrRNA基因序列同源性比对,初步鉴定ⅡR21菌株属于链霉菌属。经过有机溶剂萃取、硅胶柱层析、薄层层析和制备型高效液相色谱对ⅡR21菌株发酵液进行分离纯化,获得了1个纯度为90.34%的具有抗稻瘟病菌168菌株活性的化合物单体。采用高通量测序技术对ⅡR21菌株进行全基因组测序,通过全基因组序列分析,ⅡR21菌株基因组中包含克拉维烷的合成基因簇,并推测出克拉维烷的合成代谢途径。     

A2C菌株杀菌活性研究及菌株初步鉴定

从陕西户县土样中分离到放线菌A2C菌株,经培养特征、形态特征以及生理生化特性研究,初步鉴定为链霉菌属吸水类群中的烬灰吸水链霉菌的一个变种,其代谢产物具有广泛的杀菌活性。杀菌活性生测结果表明:A2C菌株发酵液滤液对15种供试病原真菌中的10种真菌的菌丝生长抑制率达90%以上,其中对小麦赤霉病菌、番茄早疫病菌、番茄灰霉病菌的抑制中浓度(EC50)分别为67.25、40.87、45.19μg/ml,对玉米大斑病菌、烟草赤星病菌和马铃薯干腐病菌的孢子萌发抑制中浓度分别为104.12、264.47、305.05μg/ml。对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、假丝酵母菌、枯草芽孢杆菌的抑菌圈直径分别为30.1、32.6、28.5、32.9 mm。A2C菌株发酵滤液防治小麦白粉病的盆栽保护和治疗效果分别达到90.3%和87.0%。田间防治番茄叶霉病和黄瓜霜霉病的效果分别为87.8%和59.8%。     

南蛇藤内生真菌的分离及抑菌活性初探

采用常规方法从南蛇藤的叶与果实中分离得到21株内生真菌,以PDB培养基对其进行液体培养,用高压蒸汽灭菌过的发酵处理液和丙酮粗提物对小麦赤霉菌、棉花枯萎菌、番茄叶霉菌等8种病原菌进行抑菌活性测定.结果表明,抑菌活性成分主要存在于丙酮粗提物中.筛选出1株抗菌谱较广的内生真菌Y9,其对番茄灰霉病菌、番茄早疫病菌、苹果炭疽病菌、西瓜枯萎病菌、苹果褐腐病菌、小麦赤霉病菌 6种病原菌有较好抑菌活性.     

拮抗放线菌M18的分离鉴定及杀菌活性研究

从山西大同地区采集的土样中分离到一株具有广谱杀菌活性的链霉菌菌株M18,经初步鉴定为链霉菌属的黄色类群(Streptomyces. flavus)。杀菌活性测定表明:M18菌株与大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、烟草赤星病菌、马铃薯干腐病菌有拮抗作用,抑菌圈透明且直径达到了20 mm以上。M18菌株的发酵原液对西瓜枯萎病菌、番茄早疫病菌、苹果轮纹病菌、玉米大斑病菌、小麦赤霉病菌、苹果炭疽病菌的菌丝生长抑制率均在75%以上,对苹果腐烂病菌、玉米大斑病菌、棉花枯萎病菌孢子的萌发抑制率在50%以上,对假丝酵母菌、枯草芽孢杆菌有明显抑制的作用。     

马铃薯与玉米间作体系根际土壤放线菌多样性及拮抗菌株的筛选

为研究马铃薯间作玉米体系土壤放线菌的群落多样性,采用微生物分离培养技术,运用高氏Ⅰ号培养基对马铃薯单作田、马铃薯间作玉米田和玉米单作田土壤放线菌进行分离培养,对各菌株进行16SrDNA序列分析、纤维素酶活性评价和拮抗植物病原真菌菌株筛选。结果显示,挑取的代表菌株中,马铃薯间作玉米田的17株土壤放线菌均为链霉菌属(Streptomyces),马铃薯单作田的11株放线菌也均为链霉菌属,玉米单作田的16株菌株中仅有1株为小单孢菌属(Micromonospora),其他15株均为链霉菌属;马铃薯间作玉米田、马铃薯单作田、玉米单作田土壤放线菌中具纤维素酶活性的菌株分别占各处理菌株数的41.17%、27.27%和25.00%;具拮抗活性的菌株分别占各处理菌株数的29.42%、27.27%和37.50%,其中,菌株J2-3/4对小麦根腐病菌(Cochliobolus sativus)、小麦全蚀病菌(Gaeumannomyces graminisr)、烟草赤星病菌(Alternar iaalternata)和稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)有良好的抑菌效果,抑菌率分别为75.70%、63.97%、64.85%和72.94%。说明:不同种植模式下,土壤放线菌群落结构均较单一,且链霉菌属为优势种群;菌株J2-3/4在作物真菌病害生物防治菌株资源开发中具有良好的潜在价值。     

新疆荒漠盐碱环境中抗动物病原菌的放线菌筛选与鉴定

【目的】从新疆荒漠地区特殊生境中,分离筛选对动物病原菌具有较高抑制活性的放线菌。【方法】采用皿内琼脂块法和发酵液滤纸片法,对新疆荒漠盐碱土环境中分离到的412株放线菌的拮抗性进行筛选,并对其中拮抗活性高的菌株进行形态特征、培养特征、生理生化特性及16SrRNA序列的分析鉴定,初步确定其分类地位。【结果】筛选结果显示:新疆地区荒漠土中39.6%的放线菌对所选的8种病原菌有拮抗作用,且随着靶标菌数的增加,拮抗比例减小;供试菌对革兰氏阳性菌的拮抗效果优于革兰氏阴性菌,对牛无乳链球菌Ⅰ、Ⅱ和猪金黄色葡萄球菌Ⅰ、Ⅱ的抑菌效果平均为26.0%和22.3%。通过初筛和复筛得到10株抑菌效果较好的拮抗性放线菌,经多相分类鉴定确定为链霉菌属的不同种,具体分类地位如下:XJ 6-2菌株为天蓝褐链霉菌(Streptomyces coeruleofuscus),XJ 1-5-10菌株为粪生链霉菌(Streptomyces fimicarius),XJ 2-9菌株为灰平链霉菌(Streptomyces griseoplanus),XJ 2-5-1菌株为弗氏链霉菌(Streptomyces fradiae),XJ 19-11菌株为变异链霉菌(Streptomyces variabilis),XJ 1202菌株为苍黄链霉菌(Streptomyces luridus),XJ 1625菌株为微黄绿链霉菌(Streptomyces flavidovirens),XJ 2-9-7菌株为库尔萨诺夫链霉菌(Streptomyces kurssanovii),XJ 617菌株为堆孢链霉菌(Streptomyces massasporeus),而XJ 1-6-5菌株的序列相似度在98%以下,可能为潜在新种,需要进一步鉴定。【结论】新疆地区荒漠土中存在大量拮抗性放线菌,并且获得了10株对动物病原菌有较高抑制活性的放线菌。     

人参锈腐病生防用高效拮抗放线菌分离鉴定及抑菌作用

为筛选和鉴定对人参锈腐病菌具有高效抑菌作用的拮抗放线菌,为生物防治人参锈腐病奠定基础。采用稀释涂布法和平板对峙法分离筛选高效拮抗放线菌,采用纸片法测定了菌株发酵浓缩液的抑菌活性,并采用培养特性、形态特征、生理生化特性和分子生物学方法鉴定了菌种。结果表明:采用稀释涂布法分离纯化出94株放线菌,其中20株为拮抗放线菌;通过复筛,筛选出2株高效拮抗放线菌YBUF5和YBUF7;这2株放线菌菌株及菌株发酵浓缩液对供试9种植物病原菌菌丝的生长均具有较强抑制作用; 2株放线菌菌株及菌株发酵浓缩液在温度15～25℃、pH为6时对人参锈腐病菌的抑制作用最强;根据培养特征、形态特征、生理生化特征及16S r DNA寡核苷酸序列分析结果,YBUF5菌株和YBUF7菌株初步鉴定为生暗灰链霉菌(Streptomyces caniferus)和湿链霉菌(Streptomyces humidus)。这说明筛选出的YBUF5和YBUF7菌株及发酵浓缩液不仅具有较宽的抑菌谱而且不同条件下对人参锈腐病菌均具有很强的抑制作用,在人参锈腐病生物防治方面具有较大的应用潜力。     

苹果轮纹病发生规律及防治措施

[目的]为提高苹果品质及经济效益。[方法]调查了苹果轮纹病的发生规律,并采用物理、化学、农业措施进行防治。[结果]苹果轮纹病的发生具有一定规律,并掌握了一套合理的防治措施。[结论]为今后的防治工作提供了借鉴。     

马桑叶提取物的杀虫杀菌活性初步研究

为寻找马桑中的活性成分,利用活性跟踪研究了马桑叶乙醇/水提取物及其分段产物室内对小菜蛾、麦蚜、苹果轮纹病菌等靶标生物的活性。结果表明,马桑提取物对小菜蛾、麦蚜有较强的拒食(胃毒)作用,并抑制其生长发育,对苹果轮纹病菌有较强的抑菌活性。就各分段产物而言,氯仿相、水相、乙酸乙酯相分别是小菜蛾、麦蚜、苹果轮纹病菌的活性部位。初步判断,从马桑叶中分离得到的化合物氯仿相的主要活性成分为三萜类化合物,水相为倍半萜类化合物、乙酸乙酯相为黄酮类化合物。     

生物制剂绿液对几种病原菌的抑制作用

研究了生物制剂绿液对苹果轮纹病菌、苹果炭疽病菌、烟青霉病菌、草莓灰霉病菌和黄曲霉菌5种病原菌的抑制作用。结果表明:绿液对几种病原菌菌丝的生长均有一定的抑制作用。其中,对草莓灰霉病菌的抑制效果最好,EC50为2.18 mg/L;其次是苹果炭疽病菌和苹果轮纹病菌,EC50分别为3.97和7.39 mg/L;而对黄曲霉菌和烟青霉病菌的抑制效果较差,EC50分别为472.79和982.06 mg/L。     

苹果树枝干病害的生物防治研究

从苹果树体上分离得到颉颃菌株AT970 6。室内测定Valsamali等 3种枝干病害的病原抑制作用均为 10 0 %。田间采用AT970 6制剂对腐烂病和枝干轮纹病的防治效果分别为 99 5%和 86 0 %。     

套袋对富士苹果轮纹病和炭疽病的影响

本试验通过不同时期套袋的方法,研究了富士苹果轮纹病及炭疽病的侵染规律。结果表明:富士苹果自谢花后7～11d即开始感染轮纹病,花后23～27d为侵染高峰;而炭疽病菌的侵染高峰期为花后27～43d。适期套袋（花后7d）可有效防治这两种病害的为害。     

鹿蹄草素对几种果蔬采后病原真菌的离体抑制作用研究

为寻找天然果蔬防腐剂,在离体条件下,采用生长速率法和培养板连续稀释法研究了鹿蹄草素对几种果蔬采后病原真菌的抑制效应,并对其最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)进行了初步确定。结果表明:鹿蹄草素的浓度越高,抑菌率越高,在2.5 mg/mL及以上浓度时对供试病原真菌均有较好的抑制效果。根据EC50值所得到的抑制作用由强到弱依次为链核盘菌(Monilinia fructicola),苹果轮纹病菌(Physalosporapiricola),链格孢菌(Alternaria alternata),根霉菌(Rhizopus stolonifer),灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)。其中链核盘菌的MIC和MBC分别为:0.156,1.25 mg/mL;苹果轮纹病菌的MIC和MBC分别为:0.078,0.156 mg/mL;链格孢菌的MIC和MBC分别为:0.313,0.625 mg/mL;灰葡萄孢菌的MIC和MBC分别为:0.156,0.313 mg/mL。     

1,2-肼二(二硫代甲酸甲酯)的合成及抑菌活性研究

以二硫化碳、水合肼、硫酸二甲酯等为原料,合成了1,2-肼二(二硫代甲酸甲酯)。其结构经熔点、红外光谱进行了确证。采用菌丝生长速率法研究了1,2-肼二(二硫代甲酸甲酯)的抑菌活性。结果表明:1,2-肼二(二硫代甲酸甲酯)对葡萄黑痘病菌、辣椒炭疽病菌、苹果腐烂病菌、棉花枯萎病菌和苹果轮纹病菌等5种供试病原菌都有很好的抑制作用,其EC50值均小于20 mg/L。其中对苹果腐烂病菌的抑制作用最强,其EC50值为2.2 mg/L。     

宁康霉素对植物病原真菌的抑制作用

宁康霉素是由海洋细菌BAC-9912发酵获得的生物农药,对多种植物病原真菌有良好的抑制作用。本研究发现宁康霉素强烈抑制玉米纹枯病菌和苹果轮纹病菌的菌丝,可使玉米纹枯病菌菌丝枯萎和产生畸形。比较宁康霉素与农利灵和速克灵对玉米纹枯病菌的抑菌效果,结果显示宁康霉素的抑菌效果优于两种化学农药。     

农副产品粗提取物的抑菌作用研究

采用抑制菌丝生长速率法将棉籽饼、大豆饼、花生饼的粗提取物分别对黄瓜枯萎病菌、西瓜枯萎病菌、辣椒枯萎病菌、苹果轮纹病菌、苹果炭疽病菌、小麦赤霉病菌进行抑菌试验。结果表明 ,棉籽饼粗提取物供试最高浓度对黄瓜枯萎病菌、西瓜枯萎病菌、辣椒枯萎病菌、小麦赤霉病菌、苹果轮纹病菌、苹果炭疽病菌 6种病原菌的抑制作用明显 ;豆饼粗提取物供试最高浓度对黄瓜枯萎病菌、西瓜枯萎病菌、辣椒枯萎病菌、苹果轮纹病菌、苹果炭疽病菌 5种病原菌抑制作用明显 ;花生饼粗提取物供试最高浓度对黄瓜枯萎病菌、辣椒枯萎病菌、苹果炭疽病菌 3种病原菌抑制作用明显 ,尤以棉籽饼、豆粕粗提取物的抑菌作用最佳 ,稳定性较好     

4种中草药提取物对常见果树病原菌的抑制作用

本实验以4种中草药提取物对5种植物病原真菌进行抑菌活性筛选研究。结果表明,蛇床子粗提物对苹果轮腐烂病菌和纹病菌有较好的抑制作用,抑菌率分别在91%和57%以上,对苹果斑点落叶病菌、梨黑星病菌和桃穿孔病菌也有较好的抑制作用。