家兔黄艾美耳球虫活虫苗免疫的血清抗体消长规律研究

应用建立的ＥＬＩＳＡ成功地检测了家兔黄艾美耳球虫活虫苗免疫后的血清ＩｇＧ抗体水平。结果表明，在首兔１５ｄ可检测到血清ＩｇＧ抗体，首免２５ｄ左右血清ＩｇＧ抗体达到高峰值，二免３０￣３５ｄ左右又测到一个高峰值，攻虫后血清ＩｇＧ抗体明显升高，重复免疫所诱发的血清抗体ＩｇＧ水平，但是血清ＩｇＧ水平与保护率无相关性。     

家兔免疫伊氏锥虫弱毒疫苗后的T细胞,IgG和IgM动态变化

分别以3Ｈ—ＴｄＲ掺入的淋巴细胞转化反应和ＢＡ—ＥＬＩＳＡ方法检测家兔免疫后及攻虫后Ｔ细胞及特异性抗体ＩｇＧ和ＩｇＭ的动态变化。发现免疫后家兔外周血Ｔ淋巴细胞增殖反应于２４ｄ达到高峰,第３１天开始迅速降低。攻虫后特异性Ｔ细胞增殖反应强度未见升高,而特异性抗体Ｉｇｈ、ＩｇＭ均于第２１天达到高峰,攻虫后ＩｇＧ、ＩｇＭ分别在第６天和第９天又达到高峰。结果表明,在这种抗锥虫免疫中Ｔ细胞没有起主导作用,而特异性抗体ＩｇＧ和ＩｇＭ起主导作用。     

嗜水气单胞菌HEC毒素单克隆抗独特型抗体研究

用嗜水气单胞菌ＨＥＣ毒素免疫Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠，通过一次性杂交瘤融合，在筛选ＨＥＣ毒素单克隆抗体（ＭｃＡｂ１）的同时，用兔抗ＨＥＣ毒素血清（ＰＡｂ）包板的ＥＬＩＳＡ方法，筛选到两株抗ＨＥＣ毒素的单克隆抗独特型抗体（ＭｃＡｂ２）。两株ＭｃＡｂ２腹水ＥＬＩＳＡ效价分别为１：２０４８０和１：５１２０，属于ＩｇＧ１亚类。ＨＥＣ毒素的模拟抗原ＭｃＡｂ２不能溶解人的Ｏ型红细胞，但能与相应的ＰＡｂ反应，并能阻断ＰＡｂ与ＨＥＣ毒素的结合。将ＭｃＡｂ２连接到同源小鼠红细胞（ＭＲＢＣ）后免疫小鼠，用ＨＥＣ毒素包板的ＥＬＩＳＡ检测其血清，呈阳性结果，说明ＭｃＡｂ２能模拟ＨＥＣ刺激机体产生抗ＨＥＣ毒素的抗体（Ａｂ３）。     

副结核分枝杆菌McAb的某些特性鉴定

以超声波粉碎的副结核分枝杆菌地方株Ｃ２抗原免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，经与ＮＳ－１骨髓瘤细胞三次融合，获得了３株能稳定分泌抗副结核分枝ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞系，其染色体数目为７８－１１０条，分别为ＩｇＭ和ＩｇＧ２。应用间接ＥＬＩＳＡ法测定细胞培养液，腹水和血清效价为１０＾－２～１０＾－７。交叉试验证明，ＭｃＡｂＯ１与受试的各株副结核分枝杆菌反应强烈，与牛分枝杆菌和草分枝杆菌有微弱特异性抗原之一。ＳＤＳ－Ｐ     

酶联免疫印迹对弓形虫抗原组分的研究

用酶联免疫印迹对弓形虫抗原组分分析的结果显示：经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后的弓形虫抗原组分分别为１．７８ＫＤ，２１．３ＫＤ，３０ＫＤ，３６．５ＫＤ，３９．１ＫＤ和５０．２ＫＤ。电转印至硝酸纤维膜上的各抗原组分，用ＥＬＩＢ分析，弓形虫感染宿主的血清能与抗原组分蛋白起反应，其中３９．１ＫＤ和２１．３ＫＤ分子量组分蛋白带色显色最深，提示这二种组分蛋白是弓形虫ＩｇＧ抗体识别的主要组分蛋白，而对照血清与各组分蛋白为     

不同方法提取鸡血清IgG及纯度鉴定

本文用Ｎａ_２ＳＯ_４和（ＮＨ_４）_２ＳＯ_４两种盐沉淀鸡血清ｒ－球蛋白，再经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ２００柱和ＤＥＡＥ－３２柱进一步纯化，将获得的ＩｇＧ利用免疫电泳和聚丙烯酰胺凝胶（ＰＡＧＥ）电泳进行纯度鉴定，结果表明：在本试验条件下，盐析方法获得的ｒ－球蛋白经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ２００柱分离获得高纯度的鸡ＩｇＧ，ＤＥＡＥ－３２柱经０．１ＭＰＢＳ（ＰＨ７．４）洗脱，２ＭＮａＣｌ解离获得的ＩｇＧ纯度较差。     

兔异源蛋白与自身蛋白作为载体制备克伦特罗抗血清

将β２激动剂克伦特罗（ＣＬ）偶氮化后分别连接牛血清白蛋白（ＢＳＡ）,兔血清白蛋白（ＲＳＡ）和兔ＩｇＧ（ＲＧＧ）,分别用上述连接物免疫３组新西兰兔。经琼脂扩散试验,间接ＥＬＩＳＡ和间接抑制ＥＬＩＳＡ检测表明,ＢＳ,ＲＳＡ和ＲＧＧ均能作为载体制备ＣＬ抗血清。ＢＳＡ作为载体制备的抗血清含有大量针对载体的抗体,面ＲＳＡ和ＲＧＧ作为载体制德的抗血清不含有针对载体的抗体,显示自身蛋白可作为载体,且优于异源蛋白     

黄瓜花叶病毒（CMV）高效价抗血清的制备及其在FLISA中的应用

以提纯的ＣＭＶ作为抗原，经静脉注射、肌肉注射和足垫注射等对家兔进行免疫，获得高效价的抗血清（琼脂双扩散效价为１／２５６）；在间接ＥＬＩＳＡ试验过程中，用ＰＢＳ＋０．０５％ＴｒｉｔｏｎＸ－１００作为样本研磨液，用１：１６０００稀释度的ＣＭＶ抗血清或Ｚμｇ／ｍｌＣＭＶ抗血清的ＩｇＧ作为第一抗体，用１：１０００稀释度的冻干辣根过氧化物酶标记的羊抗兔的ＩｇＧ作为第二抗体，以待测样本光密度值与阴性对照光密度值之比大于或等于３作为判断待测样本为阳性反应的标准，结果表明：间接ＥＬＩＳＡ试验的灵敏度比生物检测的灵敏度要高３２～１６０倍。用间接ＥＬＩＳＡ检测矮牵牛的病毒样本３０份，ＣＭＶ占７０％。     

黄瓜花叶病毒（CMV）高效价抗血清的制备及其在ELISA中的应用

以提纯的ＣＭＶ作为抗原，经静脉注射，肌肉注射和足垫注射等对家兔进行免疫，获得高效价的抗血清（琼脂双扩散效价为１／２５６），在间接ＥＬＩＳＡ试验过程中，用ＰＢＳ＋０．０５％，ＴｒｉｔｏｎＸ－１００作为样本研磨液，用１：１６０００稀释度的ＣＭＶ抗血清或２μｇ／ｍｌＣＭＶ抗血清的ＩｇＧ作为第一抗体，用１：１０００稀释度的冻干辣根过氧化物酶标记的羊抗兔的ＩｇＧ作为第二抗体，以待测样本光密度值与阴性对照光密     

分泌抗BVDV McAb杂交瘤细胞株的建立

用牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）感染ＭＤＢＫ细胞,将感染细胞培养物冻融后离心取上汪经ＰＥＧ沉淀浓缩抗原免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠,取血清抗体效价高遥免疫鼠的脾细胞与ＳＰ２／Ｏ细胞在ＰＥＧ作用下融合,产生杂交瘤细胞,用间接ＥＬＩＳＡ法检测杂交瘤细胞生长孔上清,筛选阳性杂交瘤细胞株。以有限稀法克隆２－３次,得到８ 泌抗ＢＶＤＶ的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株。８株ＭｃＡｂ对ＢＶＤＶ,猪瘟均呈阳性反应。杂交     

ND—EDS-76异源二联油乳剂疫苗与普通二联疫苗田间对比试验研究

鸭源ＮＤＶ—Ｄ１０毒株与ＥＤＳ－７６ＧＣ２毒株混合接种同一鸭胚,培养 ９６ ｈ后收集尿囊液,制成ＮＤ—ＥＤＳ－７６异源二联油乳剂灭活疫苗。然后与普通二联油乳剂灭活疫苗接种同一鸡群,在 １０ ｄ、２０ ｄ、３０ ｄ、１８０ ｄ、３６０ ｄ分别检测抗体滴度并进行比较,结果差异不显著。在免疫后３０ ｄ、１８０ ｄ、３６０ ｄ,随机取鸡各 ６０只为一组,用 ＮＤＶ—Ｆ４８Ｅ９和 ＥＤＳ－７６ＧＣ２强毒株进行攻毒保护试验并进行比较,结果两种疫苗在 ３０ ｄ、１８０ ｄ免疫保护率均为 １００％,３６０ ｄ对 ＮＤ和 ＥＤＳ－７６的免疫保护率分别为９２ ％和８７ ％以上,差异不显著。对开产前１２０日龄左右蛋鸡群免疫接种ＮＤ—ＥＤＳ－７６异源二联油乳剂灭活疫苗,可有效地保护整个产蛋期对ＮＤ和ＥＤＳ－７６自然强毒的攻击,是一种理想的生物防疫制剂。     

ND-EDS-76异源二联油苗田间试验研究

鸭源ＮＤＶ－Ｄ１０毒株与ＥＤＳ－７６ＧＣ２每株混合接种同一鸭胚，培养９６ ｈ收集尿囊液，制成ＮＤ－ＥＤＳ－７６异源二联油乳剂灭活疫苗，然后与普通二联油乳剂灭活疫苗接种同一鸡群，在 １０，２０，３０，１８０，３６０ ｄ分别检测抗体滴度并进行比较，结果差异不显著。在免疫后 ３０，１８０，３６０ ｄ随机取鸡各 ６０只为 １组，用 ＮＤＶ－Ｆ４８Ｅ９和 ＥＤＳ－７６ＧＣ２强毒株进行攻毒保护试验并进行比较，结果表明两种疫苗在 ３０，１８０ ｄ免疫保护率均为 １００％，３６０ ｄ对ＮＤ和ＥＤＳ－７６的免疫保护率分别为９２％和８７％以上．对临床２００万只开产前１２０日龄左右蛋鸡群免疫接种ＮＤ－ＥＤＳ－７６异源二联油乳剂灭活疫苗，可有效地保护整个产蛋期对ＮＤ和ＥＤＳ－７６强毒的攻击。     

应用ABC－ELISA和SPA－ELISA检测狂犬病疫苗免疫犬后血清中的抗体水平

本文报道应用ＡＢＣ－ＥＬＩＳＡ和ＳＰＡ－ＥＬＩＳＡ检测狂犬病疫苗免疫犬后血清中抗体的效价，比较研究了两种方法的特异性，敏感性和重复性，结果显示两种方法均适用于检测狂犬病血清抗体水平。ＡＢＣ－ＥＬＩＳＡ较ＳＰＡ－ＥＬＩＳＡ敏感性高４倍，前者的阳性检出率（１００％）高于后者（９２．８％）。     

实验感染OPPV绵羊血清中抗体水平动态检测

应用建立的ＥＬＩＳＡ方法和常规的ＡＧＩＤ方法对人工感染ＯＰＰＶ的试验羊进行抗体水平动态检测，结果表明，ＥＬＩＳＡ敏感性高，特异性好。通过颈静脉途径接种２个月后，可出现ＥＬＩＳＡ阳性反应（３／５），而通过气管接种为１个月（２／２）；相对来讲ＡＧＩＤ阳性出现的时间要迟２￣５个月，很难检出低水平的抗体。     

珍禽霉形体抗体检测方法的建立和应用

本试验经培养特性,形态特征,红细胞吸附试验和生长抑制试验等从８株珍禽霉形体中筛选出１株具有代表性的菌株ＭＧ－Ｐ,将ＭＧ－Ｐ和标准株ＭＧ－Ｓ０分别建立了ＨＩ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ试验,检测了３批１２０份共１００种珍禽动物的血清样本,ＭＧ－Ｐ的阳性检出率为ＨＩ１４．２％（１７／２０）,Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ１６．７％（２０－１２０）,两法阳性符合率为８５％（１７／２０）;ＭＧ－Ｓ０的阳性检出率为ＨＩ９．２％     

六种不同蛋白质载体制备克伦特罗抗血清的比较

以偶氮法将β激动剂克伦特罗（ＣＬ）连接小鼠血清白蛋白,小鼠ＩｇＭ（ＭＩＭ）,小鼠全血清（ＭＷＳ）,牛血清白蛋白（ＢＳＡ）,嗜水气单胞菌（ＡＨＪ）,虾全血清（ＳＷＳ）。各连接物分别免疫６组小鼠免疫４次后用间接抑制ＥＬＩＳＡ,间接ＥＬＩＳＡ检测各组血清特异性和抗ＣＬ的效价。结果表明,各组鼠血清均含有抗ＣＬ的特异性的抗体;ＡＨＪ,ＳＷＳ,ＭＷＳ,ＭＳＡ组血清效价显著高于ＭＩＭ,ＢＳＡ组,提示组分复杂的蛋     

抗鸡传染性法氏囊病毒单克隆抗体的提纯和鉴定

取抗鸡传染性法氏囊病毒单克隆抗体．经饱和硫酸铵盐析，透析除盐、葡聚糖凝胶过滤粗提后，经ＤＥＡＥ—２２纤维素离子交换层析，获得纯化的单抗，ＥＬＩＳＡ效价达１０（－６）以上．双向琼扩效价达１：６４以上；抗体回收率达６０％以上；最高浓度达１．２ｍｇ／ｍｌ．经抗鼠全血清双向琼扩结果证明所提取物为纯一的ＩｇＧ．     

传染性法氏囊病病毒主要结构蛋白基因及其表达产物免疫学试验

用传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）ＶＰ２、ＶＰ３重组质粒ＤＮＡ及其大肠杆菌表达产物全菌裂解液油乳剂苗肌肉注射１４日龄仔鸡,免疫后１４和２１ｄ测定血清ＥＬＩＳＡ抗体效价,并于免疫后２１ｄ用ＩＢＤＶ南京野毒株攻击。结果显示：（１）ＶＰ２基因重组质粒ＤＮＡ除可诱导产生较高的ＥＬＩＳＡ抗体外,还可明显降低仔鸡ＩＢＤＶ攻击所引起的急性发病率和死亡率;（２）ＶＰ３－ＧＳＴ融合蛋白表达产物全菌裂解液可较早地诱导产     

兔化高免褪黑激素抗血清的制备

运用Ｍａｎｎｉｃｈ反应,将褪黑激素与ＢＳＡ联结起来制备完全抗原,用ＵＶ－２６０紫外仪测定了ＭＬＴ与ＢＳＡ的联结比为１２：１,用此抗原免疫新西兰大耳兔５只,经过６次免疫后,发现抗体效价平均１：１００００（ＥＬＩＳＡ）,将抗血清经Ｎａ２ＳＯ４沉淀,Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ｇ－２００过柱层析、收集纯化抗体,用分光光度计７２１ 春蛋白浓度,经５－羟色胺等阻断试验发现抗体特异性较高。     

鸡群类甲,乙,丙型肝炎病毒感染的血清流行病学调查

从河南部分地区收集鸡血清３１２份，用ＥＬＩＳＡ法分别检测：（１）抗甲型肝炎病毒抗体－ＩｇＭ（ＨＡＶＩｇＭ）；（２）乙型肝炎病毒“两对半”；（３）抗丙型肝炎病毒抗体。其结果３１２份鸡血清抗ＨＡＶＩｇＭ和抗ＨＣＶＡｂ全部阴性。乙肝病毒“两对半”血清阳性数分别为：ＨＢｓＡｇ１８份，抗－ＨＢｓ１６份，ＨＢｅＡｇ１４份，抗－ＨＢｅ２份；抗－ＨＢｃ零份。