Dnm1l mRNA在小鼠早期妊娠子宫中的表达研究

为了研究Dnm1l mRNA在小鼠胚胎着床过程中的表达,试验采用原位杂交方法检测早期妊娠、假孕、人工蜕膜化、延迟着床及激活等小鼠模型中Dnm1l mRNA的表达,并应用Real-time PCR检测早期妊娠模型中Dnm1l mRNA的相对表达量。结果表明:Dnm1l mRNA在小鼠早期妊娠的子宫中呈现时空特异性表达,Real-time PCR检测表达的整体趋势变化与原位杂交试验中观测到的结果基本一致。说明Dnm1l mRNA与小鼠早期妊娠过程相关,其表达可能受到着床胚泡的调节。     

膜联蛋白A8在小鼠早期妊娠子宫中表达研究

膜联蛋白A8(Annexin A8,ANXA8)是一种磷脂结合蛋白,与炎症反应、癌症的发生以及血管生成有密切联系。本实验旨在利用实时荧光定量PCR、原位杂交与免疫组织化学的方法研究ANXA8 mRNA与蛋白在小鼠早期妊娠和人工蜕膜子宫中的表达。原位杂交结果表明:ANXA8 mRNA在小鼠早期妊娠第1～4天子宫腔上皮和腺上皮有微弱表达,ANXA8 mRNA在妊娠第5、6天的初级蜕膜区与第7、8天的次级蜕膜区表达,并随妊娠进行逐渐增强;人工蜕膜化模型中ANXA8 mRNA表达在蜕膜区。实时荧光定量PCR证明:ANXA8 mRNA的表达量在早期妊娠模型中的第7、8天显著提高,人工蜕膜侧子宫与对照侧相比也显著提高。免疫组织化学结果表明:ANXA8蛋白与ANXA8 mRNA表达规律相似。体外分离培养小鼠子宫基质细胞,并诱导蜕膜化,实时荧光定量PCR结果表明ANXA8随着基质细胞的蜕膜化表达升高。以上体内和体外实验表明,ANXA8在小鼠子宫中的表达具有着床相关特异性,ANXA8参与小鼠子宫蜕膜化过程。     

Elastin基因在小鼠早期妊娠过程中的表达

弹性蛋白(Elastin)是一种关键的细胞外基质蛋白,对大动脉、肺、韧带、肌腱、皮肤和弹性软骨等许多脊椎动物组织的弹性和复原力至关重要。本实验旨在利用原位杂交、荧光定量PCR方法,研究Elastin mRNA在小鼠早期妊娠、假孕及人工诱导蜕膜化模型子宫中的表达。结果显示:在小鼠早期妊娠1~4d子宫中未检测到ElastinmRNA表达;随着妊娠进行,在妊娠第5天子宫肌层检测到ElastinmRNA微弱表达;在妊娠第6天的子宫壁肌层与第7、8天的肌层及蜕膜区Elastin mRNA表达逐渐增强。在小鼠假孕1~5 d子宫中,ElastinmRNA不表达。在人工诱导蜕膜化模型中,ElastinmRNA在子宫壁肌层及系膜侧蜕膜区均有表达。以上表明Elastin可能参与小鼠早期妊娠子宫壁肌层弹性的调控与蜕膜化过程。     

甘氨酰tRNA合成酶在小鼠围着床期子宫及蜕膜化过程的时空特异性表达

核编码的甘氨酰-tRNA合成酶(Glycyl-tRNA Synthetase, GlyRS)是细胞质和线粒体蛋白质翻译所必需的,GlyRS除了在蛋白翻译中的作用外,它还参与基因转录、炎症和细胞增殖等其他生物学过程。本研究从mRNA水平和蛋白水平检测了GlyRS在小鼠早期妊娠1～8 d模型、人工诱导蜕膜化模型和体外诱导人子宫内膜基质细胞蜕膜化模型中的表达规律。结果表明:GlyRS mRNA和蛋白在小鼠早期妊娠1～4 d的腔上皮和腺上皮中表达,在小鼠早期妊娠5～8 d主要在胚胎和蜕膜区表达;随着蜕膜化程度增加,表达量逐渐增加;在人工诱导蜕膜化模型中,诱导组GlyRS mRNA和蛋白表达情况类似,表达量均明显高于对照组。在体外诱导的人子宫内膜基质细胞蜕膜化模型中,诱导组GlyRS mRNA表达量随着诱导天数的增加而增加,均显著高于对照组。以上结果表明GlyRS参与小鼠早期妊娠及子宫蜕膜化的过程。     

SerpinB6b在大鼠着床期子宫及蜕膜的表达与调控

SerpinB6b是丝氨酸蛋白酶抑制剂亚家族B成员之一。本实验旨在利用荧光定量PCR、原位杂交、免疫组织化学与蛋白质印迹分析等实验技术,研究SerpinB6b mRNA和蛋白在大鼠早期妊娠1~9 d、人工诱导蜕膜化及体外诱导蜕膜化模型子宫中的表达规律。结果显示:SerpinB6b mRNA和蛋白在大鼠早期妊娠1~5 d腔上皮、腺上皮有微弱表达;在6~9 d,表达主要集中在胚胎和蜕膜区,且随蜕膜化程度增加,表达量逐渐增强,且在第8天达到最高;在大鼠人工诱导蜕膜化模型中,SerpinB6b在蜕膜区的表达均显著高于非蜕膜区;在大鼠子宫内膜基质细胞体外诱导蜕膜化模型中,SerpinB6b随着诱导蜕膜化天数的增加呈上升趋势。以上体内和体外实验结果表明,SerpinB6b在大鼠子宫中的表达具有着床相关特异性,SerpinB6b参与大鼠子宫蜕膜化过程。     

早期妊娠、发情周期及假孕小鼠子宫与荆豆素-Ⅰ的结合特性及激素调节

应用免疫荧光技术以生物素化的荆豆素-Ⅰ(UEA -Ⅰ)为探针,检测其结合位点α-L-岩藻糖在小鼠妊娠1～8 d、假孕1～6 d及发情周期子宫中的表达情况,并以摘除卵巢的小鼠为模型观察雌激素、孕酮对小鼠子宫α-L-岩藻糖表达的影响.结果,UEA-Ⅰ的结合位点主要位于妊娠1～4 d的子宫腔上皮及腺上皮中.在假孕小鼠,UEA-Ⅰ的结合位点主要位于假孕1～2 d的子宫腔上皮及腺上皮中,假孕3～4 d时在这些部位的结合逐渐减少或消失.另外,在发情周期各期的子宫腔上皮和腺上皮中也发现很多UEA-Ⅰ的结合部位,在发情期明显增多,当用雌激素处理时在这些部位的结合明显增加.这些表明,UEA-Ⅰ在子宫腔上皮和腺上皮上的结合位点可能与胚胎的存在与否无关, 而是受母体雌激素的调节.但胚胎着床后UEA-Ⅰ的结合位点消失,以后又在初级蜕膜中出现,表明UEA-Ⅰ的结合位点可能与胚胎着床后的蜕膜化反应有关.     

早期妊娠、发情周期及假孕小鼠子宫与荆豆素—I的结合特性及激素调节

应用免疫荧光技术以生物素化的荆豆素-I（UEA-I）为探针，检测其结合位点a-L岩藻糖在小鼠妊振1～8d、假孕1～6d及发情周期子宫中的表达情况，并以摘除卵巢的小鼠为模型观察雌激素、孕酮对小鼠子宫a-L-岩藻糖表达的影响。结果，UEA-I的结合位点主要位于妊娠1～4d的子宫腔上及腺上皮中。在假孕小鼠，UEA-I的结合位点主要位于假孕1～2d的子宫腔上皮及腺上皮中，假孕3～4d时在这些部位的结合逐渐减少或消失。另外，在发情周期各期的子宫腔上皮和腺上皮中也发现很多UEA-I的结合部位，在发情期明显增多，当用雌激素处理时在这些部位的结合明显增加，这些表明，UEA-I在子宫腔上皮和腺上皮上的结合位点可能与胚胎的存在与否无关，而是受母体雌激素的调节。但胚胎着床后UEA-I的结合位点消失，以后又在初级蜕膜中出现，表明UEA-I的结合位点可能与胚胎着床后的蜕膜化反应有关。     

交感神经对妊娠早期大鼠子宫内PCNA表达的影响

为研究妊娠早期子宫内交感神经对PCNA的调控效应,选取180~200日龄健康的性成熟Wistar雌性大鼠36只,随机分为对照组和处理组,处理组采用静脉注射6-OHDA损毁交感神经。采用免疫组化法和qRT-PCR法,观察和分析交感神经对妊娠早期大鼠子宫内膜组织学结构以及PCNA分布的影响。结果表明,PCNA阳性物质主要分布在固有层浅层的蜕膜细胞及肌层的外纵肌细胞核内存在。损毁交感神经后,子宫腺较正常的妊娠状态减少,腺上皮变薄,PCNA免疫阳性细胞减少,子宫内膜的蜕膜细胞及平滑肌细胞等的PCNA发生异常表达,特别是着床前的妊娠第4天(处理组)大鼠子宫腺数量减少,但腺上皮内PCNA免疫阳性细胞增强,子宫正常的组织学微环境被打乱,导致囊胚不能与子宫建立联系,出现着床数下降而排卵数基本正常的状况。免疫组化观察和mRNA相对表达量的统计分析均显示损毁支配子宫的交感神经后,导致子宫组织的蜕膜细胞及平滑肌细胞等的PCNA发生异常表达,打破了正常生理状态下子宫内膜发育与胚泡发育的同步性,影响妊娠早期的胚泡着床。     

BDNF与TrkB蛋白在小鼠子宫和着床前胚胎中表达规律的研究

为了研究BDNF与TrkB蛋白在小鼠发情周期和妊娠早期子宫、输卵管及着床前胚胎中的表达规律,试验采用免疫组织化学方法检测BDNF与TrkB蛋白在子宫和输卵管中的表达,采用免疫荧光技术检测着床前不同发育阶段胚胎中蛋白的表达,并利用图像分析软件对两种蛋白在着床前胚胎中的表达强度进行定量分析。结果表明:BDNF与TrkB蛋白在发情周期及妊娠3.5天和4天子宫腔上皮、子宫腺上皮和血管内皮细胞中表达,在发情周期子宫内膜固有层基质细胞中不表达,但在妊娠3.5天和4天子宫蜕膜细胞中表达,发情前期、发情期和发情后期BDNF蛋白的表达强度高于发情间期;BDNF与TrkB蛋白在妊娠2天输卵管黏膜上皮和血管内皮细胞中表达;两种蛋白在着床前胚胎各发育阶段都有表达,在囊胚期达到最高水平。说明BDNF和TrkB蛋白通过旁分泌或自分泌途径对子宫、输卵管尤其是着床前胚胎发育发挥调控作用。     

交感神经对妊娠早期大鼠子宫内DKK-1和Wnt-1表达的影响

为研究交感神经对妊娠早期子宫内DKK-1和Wnt-1的调控作用,选取180~200日龄健康的性成熟Wistar雌性大鼠,随机分为对照组和处理组,处理组采用静脉注射6-OHDA损毁交感神经,用免疫组化法和qRT-PCR法,观察和分析交感神经对妊娠早期大鼠子宫内膜的DKK-1和Wnt-1蛋白及mRNA相对表达量的影响。结果显示:6-OHDA损毁交感神经后,对卵巢排卵数无显著性影响,但子宫囊胚数量显著下降、囊胚发育延迟,导致子宫腔上皮和腺上皮细胞自分泌DKK-1和Wnt-1紊乱,呈现与正常状态相反的变化趋势。结果表明:在着床窗口期,交感神经通过影响DKK-1对Wnt-1信号分子的调控作用而影响囊胚着床、发育。     

妊娠过程中子宫内膜蜕膜化机制

经过40余年的发展，人工辅助生殖技术得到了广泛的应用，为数以百万计的家庭带来了福音。然而这些技术仍然存在许多挑战，如相对较低的妊娠成功率及体外受精-胚胎移植技术所生婴儿的健康风险高于自然受孕婴儿等。因此，需要进一步分析相关生理基础和技术程序。接受辅助生殖的女性妊娠失败主要发生在妊娠早期，对胚胎着床和子宫蜕膜化两大关键事件机制的探索就显得尤为重要。人子宫蜕膜化涉及到子宫内膜间质细胞剧烈的形态与功能的分化，对于妊娠成功至关重要。对人类而言，cAMP和孕激素信号是启动子宫蜕膜化的关键。文章总结了近年来蜕膜化中几个重大事件的研究结果，包括蜕膜化的启动、内膜基质细胞的改变、子宫腺分泌的增加及子宫自然杀伤细胞的增多，以期为进一步理解人类子宫蜕膜化内在机制与诸多不育问题及提高人工生殖技术的成功率提供参考。     

延后着床对小鼠妊娠的影响

哺乳动物的胚胎植入都存在着一个短暂的植入窗口期,这个窗口期阻碍了辅助生殖技术的应用。通过以小鼠为研究对象,利用胚胎移植技术研究了延后着床对妊娠的影响。结果显示,小鼠的胚胎在延后1d(即第5天)也能着床并能诱导蜕膜化的发生,而延后2d则不能移植。与正常组(第4天移植)相比,延后着床组的胚胎吸收率明显增加、窝产仔数明显减少及妊娠期延长。试验结果表明,小鼠胚胎超出子宫植入窗口期亦可着床,但会导致植入间隙和胎盘发育异常进而影响妊娠结果。     

孕酮对小鼠妊娠早期子宫内膜转化生长因子β1Ⅰ型受体表达的影响

采用免疫组织化学SABC法，研究了外源性孕酮对妊娠小鼠着床早期子宫内膜转化生长因子β1Ⅰ型受体(TGFβRⅠ)表达的影响。结果显示：(1)孕4d，注射2mg孕酮组，子宫表面上皮、腺上皮及基质中TGFpRI表达增加，与对照组和注射孕酮4mg组差异显著(P＜0．01)。注射孕酮4mg组，表面上皮TGFβRⅠ表达无显著增加；腺上皮细胞TGFβRⅠ表达稍有下降，但与对照组差异不显著；基质细胞TGFβRⅠ表达明显增加，与对照组差异显著(P＜0．01)。(2)孕5d，试验组表面上皮和腺上皮TGFβRⅠ随着孕酮剂量的加大，其表达下降；基质细胞TGFβRⅠ表达则随孕酮剂量的增加而增多，且3组间差异显著(P＜0．01)。(3)孕6d，注射2mg组，表面上皮及基质细胞TGFβRⅠ表达增加，与对照组差异显著(P＜0．01)，而腺上皮TGFβRⅠ表达呈下降趋势。注射4mg组，表面上皮、腺上皮及基质表达变化趋势同孕5d。结论：外源性孕酮对妊娠小鼠着床早期子宫内膜转化生长因子β1型受体表达有一定影响，即孕酮可显著提高基质TGFβRⅠ表达，但对腺上皮TGFβRⅠ的表达有下调作用；对表面上皮TGFβRⅠ的表达作用不定，2mg使表面上皮TGFβRⅠ表达增多，4mg使TGFβRⅠ表达降低。     

FZD5在山羊妊娠早期的表达及激素调控

实验旨在研究雌性山羊早期妊娠和发情周期中 Frizzled-5(FZD5)蛋白在子宫中的表达,以及类固醇激素对 FZD5 的表达调控。选取发情周期、早期妊娠及雌激素(50 μg/mL)与孕酮(50 ng/mL)处理山羊的子宫组织,采用免疫组织化学染色、荧光定量 PCR和 Western blot检测 FZD5在山羊子宫中的表达规律。结果表明:FZD5 蛋白在山羊妊娠早期的子宫腔上皮和腺上皮中表达;FZD5 mRNA 和蛋白在胚胎与子宫的黏附前(D6)和黏附中(D16)表达较高,在黏附后(D19)和胎盘形成早期(D25)呈下降趋势;孕酮处理导致FZD5表达降低,表明山羊子宫中孕酮下调 FZD5的表达。研究提示FZD5可能在山羊胚胎着床过程中发挥作用。     

程序化冷冻前后小鼠正常孵化囊胚和休眠胚胎中C3基因表达的研究

试验旨在研究程序化冷冻前后小鼠正常孵化囊胚和休眠胚胎中C3蛋白的分布及转录水平的差异表达情况,为阐明哺乳动物胚胎在抗冻过程中的相关调控机制提供理论依据。试验选用ICR系雌性小鼠,从妊娠第5天小鼠子宫回收正常孵化囊胚;构建延迟着床模型获取小鼠休眠胚胎,利用激光共聚焦和实时荧光定量PCR技术对各组胚胎进行细胞免疫荧光和C3 mRNA相对表达量的检测。结果发现,程序化冷冻前后的正常孵化囊胚和休眠胚胎中C3在转录和翻译水平均有表达;正常孵化囊胚经冷冻处理后C3 mRNA相对表达量显著上调（P < 0.05）;休眠胚胎冷冻后C3 mRNA相对表达量与冷冻前相比显著下调（P < 0.05）;冷冻前休眠胚胎C3 mRNA相对表达量显著高于冷冻前正常孵化囊胚（P < 0.05）;冷冻后休眠胚胎C3 mRNA相对表达量显著低于冷冻后正常孵化囊胚（P < 0.05）。结果表明,胚胎中C3基因在转录水平的下调表达对胚胎抗冻具有一定的积极作用,C3基因很可能参与了胚胎抗冻过程的相关调控。     

外源性孕酮对妊娠小鼠着床早期子宫内膜转化生长因子β1表达的影响

应用免疫组织化学 SABC法 ,研究了外源性孕酮对妊娠小鼠着床早期子宫内膜内转化生长因子 β1 (TGFβ1 )表达的影响。结果显示 :试验组皮下注射不同剂量孕酮 (2 mg/只 ,4 mg/只 )后 ,在孕 4 d,上皮内 TGFβ1 阳性着色 ,有的腺导管内具有 TGFβ1 阳性着色 ;且随着孕酮剂量的增大 ,上皮内 TGFβ1 阳性着色由子宫腔面向基面延伸 ,而腺上皮的阳性着色则呈下降趋势 ,基质内 TGFβ1 阳性着色则呈上升趋势。在孕 5 d,上皮内 TGFβ1 阳性着色呈现随孕酮剂量增大而下降的趋势 ,腺上皮和基质的 TGFβ1 动态变化如同孕 4 d。在孕 6 d,上皮、腺上皮及基质 TGFβ1 阳性着色均与孕 5 d的变化趋势相同。由此认为 ,外源性孕酮对小鼠子宫内膜各组织 TGFβ1 蛋白表达有影响。主要表现为 ,外源性孕酮可促进基质中 TGFβ1 的产生 ,对腺上皮 TGFβ1 的表达则具有下调作用     

Crb1在小鼠生后不同发育阶段子宫组织中的表达

应用HE染色方法和免疫荧光组织化学技术对小鼠生后不同发育阶段子宫组织结构的发育以及极性调控蛋白Crb1的定位表达进行了研究,结果显示,随个体发育,子宫管腔及子宫腺腔不断扩大,子宫内膜上皮持续增厚、固有层内子宫腺逐渐发达;4周龄时子宫腔面出现纤毛,随发育进程越来越发达;在各发育阶段的小鼠子宫组织中均有Crb1的表达,随个体发育表达呈现先增强后减弱的趋势,在8周龄时达到最强;Crb1主要定位于子宫内膜上皮细胞和子宫腺上皮细胞的胞膜和胞质,提示Crb1可能与小鼠子宫内膜上皮细胞和腺上皮细胞的极性建立和维持有关。     

成纤维生长因子4在妊娠早期牛胎盘组织的分布及表达特点

成纤维生长因子4(FGF4)是在哺乳动物胚胎发育过程中第一个被发现的FGF分子,在促进滋养层细胞的增殖方面具有广泛的作用。已经证实,FGF4是小鼠早期胚胎发育过程中的一个重要因子,异常表达会影响早期胚胎的发育,并影响小鼠胎盘的发育及功能。截至目前,有关FGF4在牛胎盘发育过程中的表达尚无报道。本试验运用石蜡切片HE、PAS、免疫荧光染色技术和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术对妊娠早期牛胎盘组织结构特征及胎盘组织中FGF4的细胞定位和mRNA表达规律进行研究。结果显示,在所检测的各胎龄胎盘的羊膜、子叶及肉阜组织均检测到Fgf4 mRNA,各部位表达量依区域和孕龄而异;在牛胎盘块的单核滋养层细胞、滋养层巨细胞、肉阜上皮、子宫内膜上皮及子宫腺等部位的细胞质均观察到FGF4阳性反应,滋养层巨细胞及子宫腺上皮呈强染色。可见,在妊娠早期的牛胎盘组织存在FGF4及其mRNA,随着胎龄的增加其表达量在胎儿胎盘(子叶)表现为先降低而后增高的规律,而在母体胎盘(肉阜组织)则呈现先逐渐升高然后降低的趋势。     

环氧合酶-1和环氧合酶-2在兔早期妊娠子宫内膜及早期胚胎中的表达

环氧合酶(cyclooxygenase，Cox)是由花生四烯酸合成前列腺素的限速酶，而前列腺素在哺乳动物的生殖过程中起着很重要的作用。本试验采用RT—PCR方法对环氧合酶-1(Cox-1)及环氧舍酶-2(Cox-2)在早期妊娠兔子宫内膜中的表达进行了半定量研究和在早期胚胎中的表达定性研究。结果表明，Cox-1在早期妊娠兔子宫内膜中表达较平稳，呈组成型表达；在早期胚胎中各个时期均可以检测到Cox-1mRNA，表明它在早期胚胎发育过程中起作用。Cox-2在早期妊娠子宫内膜中的表达水平有很大差异，妊娠第l天表达水平较高，从第2天开始表达下降，到第6天表达又明显增加，第8天达到最高。Cox-2在囊胚之前的各个时期胚胎均未检测到，而在扩展胚泡和孵出胚泡中表达，Cox-2的时期特异性表达可能与兔胚泡孵出及胚胎着床等过程相关。     

番茄红素对限制应激着床期孕鼠子宫内膜发育和胚胎着床的影响北大核心

试验旨在探究番茄红素(LYC)对限制应激孕鼠着床期子宫内膜发育和胚胎着床数目的影响。选择8周龄昆明系孕鼠80只,在妊娠第1 d随机分为4组,每组3个重复,每个重复10只,分别为对照组、限制应激组(RS组)、玉米油+应激组(CRS组)、LYC+应激组(LRS组)。将LYC按10 mg/kg (体重)剂量给孕鼠灌胃(0.5 mL/只),灌胃2 h后进行限制应激处理(4 h/d),连续处理5 d,即胚胎着床期第5 d时,取血清和子宫组织。结果显示,与RS组相比,LRS组孕鼠血清中去甲肾上腺素含量降低10.00%,胚胎着床数增加47.92%,子宫指数增加83.36%(P<0.05),子宫内膜结构趋向对照组,表现为子宫内膜疏松,在靠近子宫腔附近细胞出现明显蜕膜化,子宫腺数量增多。进一步经荧光定量PCR和分光光度法检测发现,LYC预处理能够显著增加应激孕鼠子宫核因子红细胞相关因子2 (Nrf2) mRNA表达,改变Nrf2下游信号抗氧化酶水平。与RS组相比,LRS组着床期子宫中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性分别增加21.10%、82.60%,总抗氧化能力(T-AOC)显著增加64.50%,而丙二醛(MDA)含量显著降低65.60%(P<0.05)。研究表明,LYC可增加限制应激孕鼠着床期子宫中Nrf2表达,降低子宫局部氧化应激水平,提高子宫局部免疫水平,进而缓解应激对子宫内膜蜕膜发育的不利影响,增加胚胎着床数目。