银杏叶提取物对热应激致鸡心肌细胞氧化损伤的保护作用研究

本试验旨在研究银杏叶提取物（Ginko biloba extract,GBE）对热应激致鸡心肌细胞氧化损伤的保护作用。取12日龄AA肉鸡心脏制备鸡原代心肌细胞,向原代心肌细胞培养板中分别加入0、5、10、50、100、150 mg/mL GBE,CCK-8试剂盒检测心肌细胞存活率;将原代心肌细胞以1×10⁴个/孔接种于96孔板,培养48 h,分别加入0、5、10、50、100、200、500、1 000 μg/mL GBE,Hoechst 33258检测心肌细胞凋亡率,确定最适GBE浓度。42℃热应激处理（0、0.5、1、2和4 h）建立心肌细胞损伤模型,ELISA试剂盒检测乳酸脱氢酶（LDH）、细胞丙二醛（MDA）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）含量,以及超氧化物歧化酶（SOD）活性;Western blotting检测Hsp72蛋白表达。结果显示,高浓度GBE具有细胞毒性,50、100、150 mg/mL GBE能极显著抑制细胞生长（P<0.01）,50 μg/mL GBE能够极显著提高细胞增殖率（P<0.01）。热应激后细胞发生凋亡,细胞内MDA、LDH含量增加,SOD活性、GSH-Px含量减少,产生氧化损伤;GBE可以降低热应激时细胞LDH和MDA的含量,增加SOD活性和GSH-Px的含量,热应激2、4 h,GBE处理效果明显。此外,GBE可增加心肌细胞中Hsp72蛋白的表达。综上所述,GBE能降低热应激状态下心肌细胞的氧化损伤,其机制可能与提高抗氧化酶活性及提高Hsp72的表达有关。     

蟛蜞菊醇提物对原代鸡胚心肌细胞抗热应激作用研究

为探究蟛蜞菊醇提物对原代鸡胚心肌细胞抗热应激作用的影响。研究选取12胚龄的文昌鸡胚构建原代心肌细胞体外模型。采用MTT法测定蟛蜞菊醇提物对心肌细胞活性和抗热应激损伤的影响。通过研究热应激组(45℃)与常温组(37℃)的心肌细胞上清液中AST和LDH含量变化,并运用Western Blot检测细胞中Hsp70的表达量,分析醇提物对减缓心肌细胞抗热应激损伤的作用。蟛蜞菊醇提物浓度为0.5～50μg/ml时对心肌细胞无毒性并具有促进活性作用。热应激处理下,醇提物浓度为5～20μg/ml时能够极显著提高心肌细胞的活性(P<0.01),并降低AST和LDH酶含量(P<0.01)。同时,蟛蜞菊醇提物促进了Hsp70的表达量,且表现出浓度依赖性作用,并且在蟛蜞菊醇提物浓度为20μg/ml时作用最佳。结果表明,适当浓度的蟛蜞菊醇提物可以有效减缓热应激对原代鸡胚心肌细胞的损伤,并诱导细胞显著提高Hsp70表达。     

复方中药对热应激肉鸡血液自由基影响的研究

将14日龄肉鸡60羽随机均分为3组:常温对照组、热应激对照组和试验组,试验组与热应激对照组饲养条件相同,试验组饲料中添加1%复方中药。3个组肉鸡定期采血,测定血清GSH-Px、SOD的活性和MDA的含量。结果表明:与正常对照组相比,热应激对照组肉鸡血清GSH-Px、SOD活性下降,MDA含量则上升,其中血清GSH-Px活性显著降低,MDA的含量显著增加(P<0.05)。结果表明,复方中药能提高正常肉鸡血清GSH-Px、SOD活性,降低MDA的含量,对抗热应激所致的肉鸡血清GSH-Px、SOD活性下降和MDA含量升高(P<0.05或P<0.01)。提示本复方中药具有较显著抗自由基损伤的作用,能有效地清除体内过多的自由基。     

活化Nrf2缓解热应激致肉鸡心肌细胞氧化损伤的研究

【目的】 探究活化核因子红系2相关因子2（nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2）对热应激肉鸡心肌细胞氧化损伤的缓解作用及其机制。【方法】 利用差速贴壁法结合化学纯化法制备肉鸡原代心肌细胞。将心肌细胞随机分为对照组（Control组）、热应激组（HS组）和Nrf2激活剂叔丁基对苯二酚（tert-butylhydroquinone,TBHQ）预处理热应激组（TBHQ+HS组）。对照组心肌细胞正常培养不做任何处理,HS组心肌细胞置于高温（43 ℃）培养箱处理2 h,TBHQ+HS组心肌细胞用50 μmol/L TBHQ预处理12 h,再进行热应激处理。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定各组心肌细胞相对活力;用比色法测定超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量和细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）活性;用实时荧光定量PCR检测Nrf2、血红素氧合酶-1（heme oxygenase 1,HO-1）、谷氨酰半胱氨酸连接酶（glutamate cysteine ligase catalytic,GCLC）和NAD （P） H：醌氧化还原酶1（NAD （P） H：quinone oxidoreductase 1,NQO1） mRNA表达水平;用蛋白质免疫印迹法（Western blotting）检测Nrf2总蛋白和HO-1蛋白表达量。【结果】 与对照组相比,热应激组肉鸡原代心肌细胞形态发生改变,出现空泡网状结构,心肌细胞的相对活力和SOD活性极显著降低（P<0.01）,MDA含量极显著升高（P<0.01）,细胞培养液中LDH活性极显著升高（P<0.01）,Nrf2/抗氧化反应原件（ARE）信号通路下游NQO1和GCLC mRNA表达升高,但差异不显著（P>0.05）,Nrf2和HO-1 mRNA表达显著增加（P<0.05）,但Nrf2总蛋白和HO-1蛋白表达量增加不显著（P>0.05）;与热应激组相比,TBHQ预处理热应激组心肌细胞内空泡网状结构减少,心肌细胞的相对活力显著升高（P<0.05）,SOD活性极显著升高（P<0.01）,MDA含量显著降低（P<0.05）,细胞培养液中LDH活性极显著降低（P<0.01）,Nrf2/ARE信号通路下游NQO1和GCLC基因的表达水平显著上调（P<0.05）,Nrf2基因和总蛋白表达量显著增加（P<0.05）,HO-1基因和蛋白表达量极显著增加（P<0.01）。【结论】 活化Nrf2可以上调Nrf2/ARE信号通路下游相关抗氧化基因和蛋白表达,提高热应激肉鸡心肌细胞的抗氧化能力,缓解热应激诱导的氧化损伤,提示Nrf2可能是肉鸡心肌细胞抗热应激氧化损伤的有效分子靶点。     

镉对体外培养鸡脾淋巴细胞膜抗氧化功能的影响

以终浓度为10μmol/L CdCl2对体外培养淋巴细胞进行染毒,分别培养12、24、36、48和72h时收集细胞,提取体外培养脾淋巴细胞膜,采用试剂盒比色的方法,分别检测了细胞膜GSH-Px、SOD的活性、膜MDA和SA含量及培养液LDH的活性,来观察镉性细胞损害时细胞膜的抗氧化功能和通透性。结果显示,随着镉作用时间的延长,淋巴细胞膜GSH-Px、SOD的活性降低,MDA生成量增加,试验组与对照组差异显著（P〈0.05）或极显著（P〈0.01）;培养液中LDH活性升高,膜SA含量降低。表明镉可使淋巴细胞膜的抗氧化功能降低,膜完整性被破坏。     

芦丁对体外培养奶牛乳腺上皮细胞生长的影响

本实验旨在研究芦丁对奶牛乳腺上皮细胞生长的影响,实验将奶牛乳腺上皮细胞分成5组,每组细胞培养基中分别含有0、25、50、100、150μg/mL芦丁,细胞在37℃,5%CO2条件下培养48 h和96 h后测定相关指标。结果表明:细胞培养48 h,与0μg/mL芦丁组相比,100μg/mL芦丁组的细胞活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)活性均显著提高,而丙二醛(MDA)含量和乳酸脱氢酶(LDH)活性均显著降低;细胞培养96 h,100μg/mL和150μg/mL芦丁组的细胞活性、GSH-Px和SOD活性均显著提高,而MDA含量和CAT、LDH活性均显著降低。与0μg/mL芦丁组相比,100μg/mL芦丁组细胞的Bcl-2表达显著升高,而Caspase3和P53表达均显著降低。综上,芦丁能够提高奶牛乳腺上皮细胞的抗氧化能力和抑制细胞凋亡,进而促进细胞的增殖,其中添加100μg/mL芦丁的效果最好。     

黄芪甲苷对染镉鸡脾淋巴细胞膜氧化损伤的保护作用

探讨黄芪甲苷对镉致鸡脾淋巴细胞膜氧化损伤的保护效果.设对照组、0.5%二甲基亚砜(DMSO)组、镉(10μmol/L)组和镉(10μmol/L)加黄芪甲苷(分别为5、10和20 mg/L)组,进行体外培养淋巴细胞,分别培养24、48和72 h时收集细胞,提取脾淋巴细胞膜,采用试剂盒比色法,分别检测细胞膜谷胱甘肽过氧化物酶(GSH -Px)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性及膜丙二醛(MDA)的含量.DMSO组与对照组相比无显著性差异;镉能明显降低细胞膜GSH-Px和SOD的活性,使MDA含量增加;添加黄芪甲苷的各组中细胞膜GSH-Px和SOD的活性明显升高,MDA含量降低,其影响较为显著的是10 mg/L的黄芪甲苷质量浓度组.结果表明:黄芪甲苷可以保护染镉后鸡脾淋巴细胞膜的氧化损伤作用.     

葛根素对热应激致牛睾丸支持细胞氧化损伤的保护作用

葛根素(Pue)是从中药野葛或甘葛藤根中提取的黄酮类化合物,有明显的抗氧化功能。Pue是否有对热应激时牛睾丸支持细胞(SCs)保护作用尚不清楚。本研究采用42℃热应激1 h,然后34℃恢复6 h。用CCK-8检测细胞存活率;用Hoechst33258检测细胞凋亡;用分光光度法检测细胞丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)的变化,以及Western-Blot检测HSP70蛋白表达。结果显示,热应激后细胞存活率下降,细胞发生凋亡,产生氧化损伤。葛根素和维生素E可以极显著降低热应激时细胞MDA含量,显著增加SOD、CAT和GSH-Px活力。Pue与维生素E组相比无显著性差异。此外,葛根素可显著增加受热应激SCs中HSP70蛋白的表达。上述结果表明,葛根素能减少热应激下SCs的氧化损伤,其机制可能与提高抗氧化酶活性及增加热休克蛋白HSP70的表达有关。     

矢车菊素在体外缓解脂肪变性的L02肝细胞的氧化损伤

本试验旨在研究矢车菊素(CY)对发生脂肪变性的L02肝细胞氧化损伤的影响.试验分为4组,各组首先以30mg/mL软脂酸在体外处理24 h使L02肝细胞发生脂肪变性,各组分别添加0、0.01、0.1、1 mg/mL的矢车菊素,连续处理8h后,检测各组细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,丙二醛(MDA)含量以及总抗氧化能力(T-AOC).结果表明,在体外CY可以使发生脂肪变性的L02肝细胞内SOD、GSH-Px活性及T-AOC升高,并降低MDA含量.其中,培养体系中添加0.1 mg/mL CY能显著提高细胞内GSH-Px活性和T-AOC(P＜0.05)并降低细胞内MDA含量(P＜0.05);培养体系内添加1 mg/mL CY能够极显著提高细胞内SOD、GSH-Px和T-AOC活性(P＜0.01);并极显著降低细胞内MDA含量(P＜0.01).上述结果可知,在体外CY能有效增强脂肪变形时L02肝细胞的抗氧化能力缓解脂肪变性时的氧化损伤.     

HSP在热应激条件下调控鸡心肌细胞损伤的功能分析

心肌对热敏感,心脏成为热应激损伤的重要器官之一,严重时会引发猝死。热休克蛋白(HPS)是机体在遭受热应激刺激时激活的重要内源性保护机制。为了观察热应激条件下对蛋鸡心肌组织的病理性损伤,以及心肌细胞启动热休克蛋白的变化规律,选用40只300日龄海兰褐蛋鸡构建热应激试验动物模型,通过对血清中肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)和谷草转氨酶(AST)水平的检测以及病理学检测以确定热应激损伤;通过对心肌组织的Hsps的转录水平检测以确定对Hsps的激活;通过系统网络分析,筛选出调控家禽热应激细胞凋亡的相关靶标,并进行相互作用网络和蛋白共表达分析。研究表明,38℃热应激会引起蛋鸡心肌细胞颗粒变性、空泡变性和坏死,导致心肌损伤相关酶谱CK、CK-MB、LDH和AST的上调,还可以激活Cryab、Hsp60、Hsp70和Hsp90转录水平的升高。系统网络分析发现热休克蛋白家族成员CRYAA、HSP90AB1、HSP90B1、HSPA5、HSPD1、DNAJA1和DNAJC3均参与热应激条件下调控家禽细胞凋亡的进程,Hsp90AB1和Hsp90B1可以调控CDK1,Hsp90AB1和HspD1可以与CDK1共表达,Hsp90B1、DNAJC3和IGF1可以调控IL6,影响细胞周期,从而影响细胞凋亡。     

苜蓿黄酮对热应激下体外培养奶牛乳腺上皮细胞凋亡的影响

本实验旨在研究苜蓿黄酮对热应激下体外培养奶牛乳腺上皮细胞的影响。将乳腺上皮细胞分成5组,每组培养基中分别含有0,25,50,75和100 μg/mL苜蓿黄酮,同时置于细胞培养箱37℃,5%CO₂培养72 h,再在 42℃恒温水浴锅中热应激1 h后返回细胞培养箱培养12 h,检测细胞活性、抗氧化指标和相关基因的表达。结果显示:1)添加25 μg/mL组的细胞活性显著高于0和50 μg/mL组(P<0.05),其他各组之间差异不显著。2)相对于0 μg/mL组,50~100 μg/mL组细胞的GSH-Px活性升高(P<0.01),LDH和MDA含量降低(P<0.01或P<0.05),而CAT活性无显著性差异。3)相对于0 μg/mL组,50和75 μg/mL组Caspase3和Socs3基因表达降低(P<0.01),25 μg/mL组P53、Stat1和Socs1基因表达升高(P<0.01或P<0.05),而Bcl-2和Fas基因表达无显著差异。综上所述,在热应激下,苜蓿黄酮能够提高体外培养奶牛乳腺上皮细胞的活性,改善抗氧化能力和抑制细胞凋亡,其中添加75 μg/mL效果较好。     

铝对体外培养鸡脾淋巴细胞一氧化氮代谢和脂质过氧化的影响

本研究分别将0、0.2、0.4、0.6、0.8 mg/mL的AlCl3添加到培养液中,对鸡脾淋巴细胞原代培养24 h,通过检测淋巴细胞内一氧化氮(NO)含量、一氧化氮合酶(NOS)活性、丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性,探究铝对鸡脾淋巴细胞毒性作用机理。结果表明,随着铝浓度的增加,NOS活性增强,NO和MDA含量增加,SOD和GSH-Px活性下降,与对照组相比,组间差异显著(P0.05;P0.01),说明铝可致雏鸡淋巴细胞抗氧化防御功能下降。     

肠炎沙门菌感染对鸡血清SOD、GSH-Px活性及MDA含量的影响

研究通过检测鸡感染肠炎沙门菌(SE)后血清中超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量的变化,探讨氧化损伤与SE感染的关系。将90只1日龄肠炎沙门菌阴性SPF鸡随机分为两组,对照组40只接种PBS,试验组50只接种肠炎沙门菌菌液。分别于接种后第1、3、7、14及21天进行屠宰,收集血清,检测血清中SOD、GSH-Px活性以及MDA含量的变化。结果显示:接种后第1、3、7及21天,试验组SOD及GSH-Px活性均显著高于对照组(P0.05),试验组及对照组中MDA含量差异不显著;组内不同时间点间比较表明,SOD、GSH-Px活性及MDA含量均存在波动性。由结果可知,肠炎沙门菌感染后鸡血清SOD、GSH-Px活性增强,提高了机体抗氧化能力和清除过氧化物的能力,保护了细胞免受损伤。同时血清SOD、GSH-Px活性及MDA含量波动变化表明机体对SE感染的氧化损伤调控具有时效性。     

牛磺酸对染镉鸡脾淋巴细胞膜氧化损伤的保护作用

体外培养鸡脾淋巴细胞,加入10μmol/L CdCl2后,在加入不同浓度的牛磺酸(1,5,10 mmol/L),分别培养12、24和36 h时收集细胞,提取脾淋巴细胞膜,检测了细胞膜谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性、膜丙二醛(MDA)的含量,观察牛磺酸对镉致鸡脾淋巴细胞膜氧化损伤的保护效果。结果:与对照组相比,CdCl2能明显降低细胞膜GSH-Px、SOD的活性,使MDA含量增加;添加牛磺酸各组中细胞膜GSH-Px、SOD的活性明显恢复,MDA含量降低,其影响较为显著的是浓度10 mmol/L的牛磺酸组。研究表明牛磺酸可以拮抗镉中毒引起鸡脾淋巴细胞膜氧化损伤作用。     

茶多酚对热应激肉用仔鸡抗氧化指标的影响

为了研究茶多酚对热应激致肉用仔鸡氧化损伤保护作用,将120只AA肉用仔鸡随机分成3组,分别是热应激对照组、低剂量茶多酚组(0.01%含量)和高剂量茶多酚组(0.05%含量),用加热器和空调控制温度在33~35℃进行热应激试验。结果显示,与热应激对照组比较,高剂量茶多酚组血清、肝脏和肾脏组织中丙二醛(MDA)含量均降低(P0.05),血清和肾脏中谷胱甘肽抗氧化酶(GSH-Px)和超氧化物(SOD)活性升高(P0.05),且肝脏中GSH-Px和SOD活性极显著升高(P0.01)。表明,茶多酚主要通过增强肉用仔鸡体内GSH-Px和SOD活性来缓解热应激对肉用仔鸡产生的氧化应激。     

T-2毒素对Sertoli细胞氧化应激和DNA损伤作用的研究

用不同浓度的T-2毒素染毒Sertoli细胞24h。染毒结束后采用MTT法检测细胞相对活力,常规方法检测SOD、过氧化氢酶(CAT)和谷胱肽过氧化物酶(GSH-Px)活性以及丙二醛(MDA)含量,彗星试验检测DNA损伤。结果显示,与对照组比较,随着T-2毒素染毒剂量的增加,Sertoli细胞的超氧化物歧化酶(SOD)、CAT和GSH-Px活性显著下降(P<0.05),MDA含量显著上升(P<0.05),DNA的损伤程度则加重的极为显著(P<0.01)。结果表明,T-2毒素可显著抑制Sertoli细胞活力,并通过氧化应激损伤细胞的DNA。     

鹿心小分子活性肽对Wistar乳鼠心肌细胞H/R损伤的保护作用

采用原代乳鼠心肌细胞建立缺氧/复氧(H/R)损伤模型,测定对照组、H/R损伤组及鹿心小分子活性肽50.000,25.000,12.500,6.250,3.125 g/mL加药剂量组细胞培养液上清中CK、AST和LDH-L活力,MDA含量及心肌细胞内SOD活性,炎性细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6的含量。结果表明:与H/R模型组比较,鹿心小分子活性肽为3.125～50.000 g/mL时,显著或极显著降低细胞中AST活力水平和IL-1β含量、上调SOD水平(P0.05或P0.01); 6.25～50.00 g/mL时,CK活力水平、TNF-α含量显著或极显著下降(P0.05或P0.01); 3.125～25.000 g/mL时,IL-6含量显著或极显著下降(P0.05或P0.01); 6.25～25.00 g/mL时,显著下调MDA含量(P0.05); 12.5～50.0 g/mL时,LDH-L活力水平显著或极显著下降(P0.05或P0.01)。说明鹿心小分子活性肽通过降低心肌酶释放、抑制炎症反应、减轻氧化应激对H/R心肌细胞损伤起到保护作用,并呈剂量依赖性。     

JNK抑制剂对仔猪肝细胞药物性损伤的缓解作用及其机理

【目的】 研究c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂SP600125对仔猪原代肝细胞药物性损伤的缓解作用及机理。【方法】 通过二步灌流法获得仔猪原代肝细胞，将肝细胞分为对照组(C)、JNK抑制剂组(SP)、模型组(M)和治疗组(T)，每组6个重复。对照组细胞不添加药物，SP组用2 μmol/L SP600125处理细胞，M组用80 μg/mL脂多糖(LPS)+20 μg/mL恩诺沙星(ENR)处理细胞，T组用80 μg/mL LPS+20 μg/mL ENR +2 μmol/L SP600125处理细胞，处理12 h后，收集上清测定谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性，收集细胞测定谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)活性、丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量及肝细胞核因子-1(hepatocyte nuclear factor 1，HNF-1)和谷胱甘肽-S-转移酶A1(glutathione S-transferase alpha 1，GSTA1)mRNA的相对表达量。【结果】 与对照组相比，M组肝细胞培养液上清中ALT和AST活性均显著升高(P<0.05)，M组肝细胞中GSH-Px和SOD活性、HNF-1和GSTA1 mRNA的相对表达量均极显著降低(P<0.01)，MDA含量极显著提高(P<0.01);与M组相比，T组肝细胞培养液上清中ALT、AST的活性均显著下降(P<0.05)，T组肝细胞中GSH-Px和SOD活性、HNF-1和GSTA1 mRNA的相对表达量均显著提高(P<0.05)，MDA含量显著降低(P<0.05)。【结论】 JNK抑制剂SP600125可通过调控细胞的抗氧化能力及HNF-1和GSTA1的表达缓解由LPS/ENR导致的仔猪原代肝细胞的药物性损伤。     

黄芩苷对热应激小鼠卵巢氧化损伤的保护作用

研究旨在探讨黄芩苷对热应激小鼠卵巢抗氧化和细胞凋亡的作用机制。将小鼠分为常温对照组(生理盐水)(C组)、黄芩苷(50 mg/kg体重)组(C+B组)、41℃热应激组(H组)和热应激加黄芩苷(50 mg/kg体重)组(H+B组),连续注射7 d,第8天41℃热应激2 h,立即处死,取卵巢组织进行切片观察并检测丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)的含量及总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)的活力。Western Blot检测Nrf2、Keap1、HO-1和NQO1蛋白表达。免疫组化法检测Bcl-2、Bax、Caspase 3蛋白表达。结果显示,热应激引起小鼠卵巢组织氧化损伤。黄芩苷能显著降低组MDA和NO含量,显著或极显著增加SOD、CAT和GSH-Px活力。此外,热应激可显著增加Nrf2、Keap1、HO-1和NQO1蛋白表达,黄芩苷干预后Nrf2等蛋白的表达降低。黄芩苷干预后Bax蛋白表达显著降低,Bcl-2、Caspase 3蛋白表达显著升高。上述表明,黄芩苷能缓解热应激下小鼠卵巢组织的氧化损伤及细胞凋亡,其机制可能与提高抗氧化能力及Nrf2蛋白的表达有关。     

热应激致Hsc70出入核与细胞凋亡的关系

旨在探讨热应激对H9c2心肌细胞构成型HSP70(constitutive or cognate HSPs,Hsc70)出入核及细胞凋亡的影响。以42℃作为热应激模型温度,通过转染Hsc70siRNA抑制Hsc70表达,Western blot检测细胞质和细胞核内Hsc70表达,ELISA检测细胞培养液LDH浓度,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡。结果表明,正常H9c2心肌细胞质Hsc70表达量较高,细胞核中表达量很低,细胞质和细胞核Hsp72表达量非常低。热应激后细胞质Hsc70表达量无显著差异,而细胞核Hsc70热应激30和100min后极显著升高(P0.01),热应激240min后开始降低;细胞质和细胞核Hsp72热应激后显著升高(P0.05或P0.01)。Hsc70抑制表达后,细胞质Hsc70水平显著降低,热应激后Hsc70入核明显减少,但仍然有入核现象;Hsc70抑制表达对细胞质和细胞核Hsp72表达无显著影响。与热应激组相比,热应激+Hsc70siRNA组LDH表达量呈升高趋势,热应激100min两组出现显著差异(P0.05);Hsc70抑制表达后H9c2细胞在热应激后更容易发生凋亡,而且在热应激30和100min内,两组之间存在显著差异(P0.05)。结果提示,热应激可诱使Hsc70出入细胞核,Hsc70抑制表达后热应激诱导Hsc70入核显著降低,细胞损伤加重,细胞凋亡升高。