鸡源大肠杆菌分离鉴定及ESBLs与AmpC酶基因型检测及耐药性分析

为了解山西省范围内鸡源产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和头孢菌素酶(AmpC)大肠杆菌分离株的基因型及其耐药现状,本试验从呈现典型鸡大肠杆菌病临床症状的病料中分离、鉴定出68株符合鸡源大肠杆菌生物特性的流行菌株,采用K-B法与双纸片确认法对分离的68株大肠杆菌分别进行药敏试验和ESBLs、AmpC酶耐药表型的筛选;采用PCR方法检测了分离株中质粒介导的ESBLs、AmpC酶的基因型。结果显示,分离到的68株菌对22种抗菌药物均产生不同程度的耐药性,其中耐药谱达7耐以上的有66,占总分离菌株数的97.06%;呈ESBLs、AmpC酶阳性和两者均阳性的菌株数分别为57(83.82%)、19(27.94%)和16(23.53%)株;检测出ESBLs阳性菌株携带的耐药基因型包括bla_(TEM)、bla_(OXA)和bla_(CTX-M-1/9),AmpC酶阳性菌株耐药基因型为bla_(FOX)型。研究结果表明,分离的68株鸡源大肠杆菌已对绝大多数种类抗菌药物产生耐药性,且产ESBLs和AmpC酶菌株已普遍流行。山西省鸡源大肠杆菌中流行的ESBLs基因型与国内其他地区相关报道大体一致,而检测到的bla_(FOX)型AmpC酶基因在国内报道相对较少。     

动物源大肠杆菌超广谱β-内酰胺酶与头孢菌素酶基因型分析

为了解重庆地区动物源大肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)及头孢菌素酶(AmpC)基因型的分布,利用初筛及表型确认方法,从临床分离的192株仔猪白痢大肠杆菌、65株奶牛乳腺炎大肠杆菌、69株鸡大肠杆菌中筛选出19株产ESBLs、6株产ArnpC酶大肠杆菌,并应用PCR扩增及PCR产物测序方法进行ESBLs及AmpC基因型分析.结果显示,重庆地区动物源大肠杆菌携带TEM型、CTX-M型、DHA-1型和CMY-2型基因的阳性率分别为2.15%、5.21%、0.61%和0.61%.其中,有5株同时携带2种基因.而DHA-1型基因为国内兽医临床首次检出,获得GenBank登录号为FJ386455.结果提示,重庆地区以TEM型和CTX-M型β-内酰胺酶为主,且产ESBLs与AmpC酶大肠杆菌为多重耐药菌株,需引起兽医临床的高度重视.     

鸡源大肠杆菌分离鉴定及ESBLs与AmpC酶基因型检测及耐药性分析

为了解山西省范围内鸡源产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和头孢菌素酶（AmpC）大肠杆菌分离株的基因型及其耐药现状，本试验从呈现典型鸡大肠杆菌病临床症状的病料中分离、鉴定出68株符合鸡源大肠杆菌生物特性的流行菌株，采用K-B法与双纸片确认法对分离的68株大肠杆菌分别进行药敏试验和ESBLs、AmpC酶耐药表型的筛选；采用PCR方法检测了分离株中质粒介导的ESBLs、AmpC酶的基因型。结果显示，分离到的68株菌对22种抗菌药物均产生不同程度的耐药性，其中耐药谱达7耐以上的有66，占总分离菌株数的97.06%；呈ESBLs、AmpC酶阳性和两者均阳性的菌株数分别为57（83.82%）、19（27.94%）和16（23.53%）株；检测出ESBLs阳性菌株携带的耐药基因型包括bla_TEM、bla_OXA和bla_CTX-M-1/9，AmpC酶阳性菌株耐药基因型为bla_FOX型。研究结果表明，分离的68株鸡源大肠杆菌已对绝大多数种类抗菌药物产生耐药性，且产ESBLs和AmpC酶菌株已普遍流行。山西省鸡源大肠杆菌中流行的ESBLs基因型与国内其他地区相关报道大体一致，而检测到的bla_FOX型AmpC酶基因在国内报道相对较少。     

上海地区猪鸡源大肠埃希菌AmpC酶基因型研究

为了解AmpC酶基因型在上海地区猪鸡源大肠埃希菌中的流行情况,收集2016-2017年上海地区12个养殖场950份健康猪鸡粪便,采用传统细菌学方法分离鉴定大肠埃希菌,采用药敏试验进行大肠埃希菌AmpC酶表型筛选以及PCR方法对常见的3种AmpC酶基因型(DHA-1、CMY-2、ACT)进行检测。共计分离出762株猪鸡源大肠埃希菌,药敏试验结果显示:头孢西丁MIC≥32 μg/mL且阿莫西林/克拉维酸MIC≥32/16 μg/mL的菌株共计86株,占比11.3%(86/762)。PCR结果显示:AmpC酶基因型 CMY-2阳性率为64.0%(55/86),DHA -1阳性率为4.7%(4/86),未检出 ACT 型。上海地区分离的大肠埃希菌AmpC酶基因主要以CMY-2型为主。     

1株鹑鸡肠球菌产ESBLs和AmpC酶的基因型鉴定

为检测1株临床分离的七彩鸟鹑鸡肠球菌的ESBLs和AmpC酶的基因型,探讨其耐药基因的进化机制;采用两倍稀释法测定此菌株对18种常用药物的敏感性,并用9对特异性引物进行PCR扩增、基因克隆及测序分析,确定鹑鸡肠球菌ESBLs和AmpC酶的基因型及基因亚型.结果表明,鹑鸡肠球菌为产ESBLs和AmpC酶菌,除对3代、4代头孢,碳青霉烯类和磷霉素体外敏感外,对其他常用药物均呈现耐药,具有多重耐药特性;该菌所产 ES-BLs的TEM序列与AJ847364(TEM-116)序列相比发生了2处碱基突变,即512T→A和695A→C,引起了相应氨基酸的突变171Ile→Lys、232Lys→Thr,是一种新的TEM亚型,GenBank注册号DQ849329;AmpC酶与序列EF078894(ACT-like型)有97%的同源性,GenBank登录号是DQ849330.这表明该株鹑鸡肠球菌ESBLs为一种新TEM亚型,来源于同时分离的鹑鸡克雷伯菌TEM型的ESBLs;ACT型AmpC酶的存在可能与七彩鸟鹑鸡接触过β-内酰胺类药物有关.     

鸡源肺炎克雷伯菌产ESBLs和AmpC酶的基因型鉴定

为检测临床分离的鸡源肺炎克雷伯菌的ESBLs和AmpC酶的基因型,用10对特异性引物进行PCR扩增、基因克隆及测序分析,确定鸡源肺炎克雷伯菌ESBLs和AmpC酶的基因型及基因亚型。结果表明,其中K1菌株为同时产ESBLs和AmpC酶菌,K1菌株经序列分析显示,该菌株编码TEM型、SHV型、CTX-M型和ACT型AmpC酶核苷酸序列。TEM序列基因亚型为TEM-1型,SHV序列基因亚型为SHV-11(GenBank登录号是GU211012),CTX-M序列基因亚型为CTX-M-14(GenBank登录号是GU211011),ACT型AmpC酶序列的基因亚型为ACT-like衍变型(GenBank登录号是GU211014)。     

苦豆子碱对产β-内酰胺酶动物源性菌株的药敏分析

目的:了解40株动物源性大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯氏菌对β-内酰胺类抗菌药物的敏感性,在此基础上探讨苦豆子总碱对产β-内酰胺酶动物源性阴性菌株的抗菌活性,目的筛选出能够逆转耐药菌株的中药。方法:以肉汤稀释法和纸片扩散法筛选产超光谱β-内酰胺酶耐药菌株。以琼脂稀释培养法、试管稀释法、活菌计数法检测苦豆子总碱对大肠杆菌和肺炎克雷伯氏菌的体外最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。结果:40株大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯氏菌共有16株为产超光谱β-内酰胺酶(ESBLs)耐药菌株,苦豆子总碱在体外对抗生素敏感株、产β-内酰胺酶(ESBLs)耐药菌株和产超光谱β-内酰胺酶(ESBLs)耐药菌株均有较好的抑菌作用。     

鸡源大肠杆菌超广谱β-内酰胺酶的检测及耐药性分析

为探明泰州地区鸡源大肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)情况及耐药情况,对13株分离自泰州地区的鸡源大肠杆菌进行ESBLs检测,并采用微量肉汤稀释法测定不同药物对产ESBLs菌和非产ESBLs菌的最小抑菌浓度(MIC).结果显示,13株分离菌中有5株被确定为产ESBLs菌株,阳性率为38.5%.产ESBLs菌对β-内酰胺类抗菌药的耐药性极其严重,耐药率明显高于非产ESBLs菌,二者对氨苄西林的耐药率分别为100%和62.5%,对头孢噻呋的耐药率分别为100%和12.5%,对头孢曲松的耐药率分别为80%和20%,产ESBLs菌对其他抗菌药物的耐药率也明显高于非产ESBLs菌.氨苄西林与舒巴坦(2:1)联用与单用氨苄西林相比,对产ESBLs菌的MIC值降低至单用氨苄西林时的1/16~1/8,但对非产ESBLs菌的MIC值没有明显变化.氨苄西林与阿米卡星(1:1)联用与单用两者中的任何一种相比,对产ESBLs菌和非产ESBLs菌的MIC值均降低至单药时的1/16~1/2.结果表明,临床可选择β-内酰胺酶类抗生素与β-内酰胺酶抑制剂的混合制剂来治疗产ESBLs鸡大肠杆菌的感染,也可尝试将不同种类、不同作用机理药物联合应用来治疗鸡大肠杆菌感染,尤其是耐药性鸡大肠杆菌感染.     

30株鸡大肠杆菌ESBLs基因型检测及耐药性分析

采用2倍稀释法检测30株鸡大肠杆菌对常见药物耐药性,用表型筛选和确证试验检测产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)情况,并分别用TEM、SHV和CTX-M等3种通用引物进行PCR扩增以确定其基因型.结果显示23株大肠杆菌为产ESBLs株,占76.7%.PCR扩增表明TEM、CTX-M、SHV阳性率分别为73.9%、43.5%和0%,有7株同时检测出TEM和CTX-M基因(占30.4%),3株未检测出TEM、CTX-M和SHV 3种基因(占13.0%).药敏试验结果显示产ESBLs大肠杆菌对药物的多重耐药性明显比非产酶大肠杆菌严重,产酶菌对氨苄西林和头孢噻呋的耐药率最高,为95.7%,对氨基糖苷类、恩诺沙星和复方新诺明的耐药率均高于78%,氨苄西林和三代头孢与酶抑制剂联用或2种不同种类的药物联用均能明显增强抗菌活性.以上结果表明河南省76.7%的临床分离鸡大肠杆菌为产ESBLs株,其基因型主要是TEM和CTX-M,尚无SHV型,β-内酰胺类与酶抑制剂联用或不同种类药物联用是防治鸡产酶大肠杆菌感染的有效措施之一.     

羔羊源产ESBLs与非产ESBLs大肠埃希氏菌耐药性差异比较及基因型分析

为了明确宁夏地区羔羊源大肠埃希氏菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)与非产ESBLs大肠埃希氏菌的耐药性差异和相关基因携带情况差异,对实验室分离保存的87株羔羊源大肠埃希氏菌,采用ESBLs表型检测方法筛选产ESBLs的菌株和K-B纸片法进行药物敏感性试验,采用PCR法对分离株进行相关基因的检测。结果显示,87株大肠埃希氏菌中5株为产ESBLs菌株,检出率为5.75%。产ESBLs株对多数试验药物呈耐药性;而非产ESBLs菌株对多数试验药物敏感,仅对恩诺沙星、复方新诺明和红霉素耐药率超过50%。20种药物中,产ESBLs株大肠埃希氏菌对18种药物的耐药率极显著高于非产ESBLs菌株(P<0.01)。产ESBLs菌株携带blaCTX的阳性率极显著高于非产ESBLs菌株(P<0.01),产ESBLs菌株中的blaTEM和blaOXA基因的阳性率均高于非产ESBLs菌株,但差异不显著(P>0.05)。结果表明宁夏地区羔羊源大肠埃希氏菌产ESBLs菌株流行率低,产ESBLs菌株耐药性严重,且宁夏地区羔羊源ESBLs菌株优势基因型为blaCTX和blaTEM。     

兔源大肠杆菌耐药性检测与分析

采用K-B法对89株兔源大肠杆菌进行了8种β-内酰胺类药物的药敏实验,采用普通PCR法检测全部菌株的ESBLs酶基因和多重PCR法检测AmpC酶基因。结果显示,山东省部分规模化兔场分离的大肠杆菌除对头孢噻肟(CTX)和头孢哌酮(CFP)的耐药率为0之外,对头孢呋辛(CXM)、青霉素G(PEN)、氨苄西林(AMP)、头孢曲松(CRO)、哌拉西林(PIP)的耐药率分别为30.33%、70.79%、65.17%、17.98%和12.36%;耐药基因检测结果显示,89株大肠杆菌中有38株未检出β-内酰胺类药物的耐药基因,占所检菌株的42.70%;44株仅携带一种耐药基因(23株携带产ESBLs酶基因,占25.84%;21株携带产AmpC酶基因,占23.60%);4株携带产ESBLs酶2种基因;2株同时携带产ESBLs酶和AmpC酶3种耐药基因,仅1株同时携带产ESBLs酶和AmpC酶4种耐药基因。结果提示兔源大肠杆菌对β-内酰胺类耐药未产生较为广泛的耐药性。     

鹤源大肠杆菌ESBLs基因型检测及其耐药性分析

采用K-B法检测40株鹤源大肠杆菌对17种抗菌药物的耐药性。根据耐药表型和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的基因型流行情况,指导临床合理用药。结果表明:15株大肠杆菌为产ESBLs株。扩增出了与预期片段大小相符的TEM型、SHV型、CTX-M型、OXA型基因。产酶大肠杆菌耐药性明显比非产酶大肠杆菌严重。     

食品动物源产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌的流行状况调查

本研究旨在了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠杆菌和CTX-M型耐药基因在食品动物的流行状况。对分离自养殖场的1273株大肠杆菌(健康动物源755株,患病动物源518株),采用双纸片协同试验筛选ESBLs阳性菌,并通过PCR法和基因测序鉴定阳性菌CTX-M型的基因型。1273株食品动物源大肠杆菌中筛选出产ESBLs阳性菌181株,阳性率为14.2%,其中患病动物阳性率比健康动物高,分别为19.9%和10.3%。151株(83.4%)产ESBLs大肠杆菌中检测到CTX-M型基因,占所有食品动物源大肠杆菌的11.8%,其中以CTX-M-9G为主,阳性率为79.5%(120/151),远高于CTX-M-1G的携带率25.8%(39/151),其中8株同时携带了CTX-M-1G和CTX-M-9G。产ESBLs的大肠杆菌在食品源动物中流行普遍,CTX-M是产ESBLs阳性菌中的主要流行基因型。     

宁夏地区牛源产与非产ESBLs大肠埃希氏菌耐药性差异比较

旨在明确宁夏地区牛腹泻源与健康源大肠埃希氏菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株及非产ESBLs菌株的耐药性差异.采集牛肛拭子样本277份,采用麦康凯培养基和伊红美蓝培养基进行筛选,进行生化鉴定和PCR鉴定,采用K-B纸片法进行药物敏感性试验,用ESBLs表型检测方法进行产ESBLs菌株的筛选.结果显示,分离得到14...     

临床分离鸡致病菌超广谱β-内酰胺酶的检测及药敏分析

用全自动微生物鉴定系统(VITEK-32)鉴定了临床分离鸡致病菌,并分别进行了超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的检测,并用试管两倍稀释法测定了各种抗生素对非产酶菌、产ESBLs菌的抗菌活性。结果表明,鉴定分离的33株致病菌有大肠埃希氏菌30株、阴沟肠杆菌1株、铜绿假单胞菌1株、法氏柠檬酸杆菌1株。在这些菌株中,首次从鸡中检测出法氏柠檬酸杆菌,所分离的33株致病菌中产ESBLs8株。产酶菌株对抗生素的耐药性严重,而抗生素与抑制剂联用能降低药物对细菌的最低抑菌浓度(MICs)。     

鸡源大肠杆菌ESBLs基因型检测及耐药性分析研究

为调查哈尔滨市周边地区鸡源大肠杆菌中超光谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因型的流行情况,探索携带ESBLs对鸡源大肠杆菌耐药性的影响,从哈尔滨市周边地区多个养殖场分离了137株鸡源大肠杆菌,用微量肉汤稀释法测定137株菌对18种抗菌药物的最小抑菌浓度,采用CLSI推荐的表型筛选和确证试验检测大肠杆菌携带ESBLs情况,用PCR方法检测ESBLs基因(blaTEM、blaSHV、blaCTX-M、blaOXA)的流行分布情况。结果显示:109株大肠杆菌为产ESBLs菌株,占79.6%;137株鸡源大肠杆菌对临床常用18种抗菌药物产生不同程度耐药,且产ESBLs大肠杆菌的耐药性比非产ESBLs大肠杆菌的耐药性严重;blaTEM、blaCTX-M基因阳性率分别为40.9%、71.5%,所有菌株均未扩增出blaSHV和blaOXA基因。提示,blaTEM和blaCTX-M基因为哈尔滨地区鸡源产ESBLs大肠杆菌的流行基因型,且鸡源产ESBLs大肠杆菌菌株分布广泛,应加强当地用药监管。     

鸡源大肠杆菌中耐药基因bla_(CTX-M)的水平转移研究

本研究对四川省规模化鸡场分离出的29株产ESBLs的大肠杆菌进行了bla_(CTX-M)耐药基因检测和接合试验,并对供体菌和得到的接合子进行了耐药表型及基因型比较。结果显示:29株产ESBLs的大肠杆菌中均检出bla_(CTX-M)基因,包括7个亚型;29株大肠杆菌中有11株接合成功,接合效率在在10~(-5)～10~(-3)之间;所有接合子均表现出头孢噻肟耐药性,11株接合子中有3株接合子为多重耐药菌;与供体菌相比,100%接合子的耐药谱变窄;所有接合子的bla_(CTX-M)基因型与其供体菌相同。试验表明:规模化鸡场中产ESBLs大肠杆菌中的耐药基因bla_(CTX-M)可通过接合的方式水平传播。     

鸡源大肠杆菌ESBLs基因型检测及其耐药性分析

采用K-B法检测30株鸡源大肠杆菌对16种抗菌药物的耐药性,根据耐药表型和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的基因型流行情况,指导临床合理用药.结果表明,24株大肠杆菌为产ESBLs株.扩增出了与预期片段大小相符的TEM型、SHV型、CTX-M型、OXA型基因.有5株同时检测出TEM和CTX-M基因.产酶大肠杆菌对氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、环丙沙星的耐药率100%.其多重耐药性明显比非产酶大肠杆菌严重.     

我国5省区部分猪、鸡源产ESBLs沙门菌的耐药差异及MLST流行特征

为了解不同地区猪鸡源沙门菌的流行分布和耐药特征，采用PCR法、药敏纸片法、微量肉汤稀释法及Bionumerics和SPSS软件等，对来自我国安徽、浙江、山东、新疆、江苏5省区的沙门菌进行血清型鉴定、ESBLs表型和基因型检测、药物敏感性试验以及数据处理。结果显示，85株沙门菌共鉴定出15种血清型；分离出25株(29.4%)产ESBLs菌株，猪源产超广谱β内酰胺酶(extended-spectrumβ-lactam, ESBLs)沙门菌检出率(4.7%)远低于鸡源(54.8%)(P<0.01);产ESBLs沙门菌对7种抗菌药的耐药率显著高于非产ESBLs的菌株(P<0.01);85株沙门菌中基因型检测结果为：TEM型44.7%(38/85),CTX-M型12.9%(11/85),OXA型10.6%(9/85),SHV型9.4%(8/85),有基因型共存现象；产ESBLs沙门菌中有19株携带4种耐药基因，相关性达到76%;各省分离菌株对氨苄西林、庆大霉素、大观霉素、头孢噻呋、四环素、头孢他啶的耐药率有极显著差异(P<0.01),对恩诺沙星的耐药率有显著差异(P<0....     

牦牛源志贺菌分离鉴定、毒力基因检测与分型

本试验旨在阐明牦牛源志贺菌致病性及分子流行特性,为探索志贺菌流行途径,制定合理的防控策略提供新思路。2017年在甘肃、青海、西藏三省(区)共采集牦牛肛门棉拭子样品1 396份,通过选择培养基筛选、生化鉴定、血清凝集试验对分离菌株进行系统鉴定,应用PCR方法检测分离株中ipaH、ipaBCD、ial、sen、set1A、set1B和stx七种毒力基因流行情况。参照McMLST网站数据库提供的15对管家基因序列进行MLST分型;并参考美国CDC的PulseNet实验方法,用限制性内切酶NotⅠ和XbaⅠ分别对福氏志贺菌和宋内志贺菌染色体进行酶切,对这些分离菌株进行PFGE分析。结果显示,41株分离株符合志贺菌生化特征,分为4个生化表型,B3(36.59%)和B4(32.35%)为主要生化表型。血清凝集试验鉴定23株为福氏志贺菌,包括四个血清型1a(n=2)、2a(n=16)、2b(n=3)、Xv(n=2);18株为宋内志贺菌,分为Ⅰ相(n=12)和Ⅱ相(n=6)。共检测到6种毒力基因ipaH、ipaBCD、ial、sen、set1A、set1B,携带率分别为100%、92.68%、73.17%、70.73%、26.83%、26.83%。具有7种毒力基因型,其中VT5和VT7型为主要流行型,分别占43.9%和24.39%,同时携带两种及以上毒力基因的志贺菌占92.68%。41株志贺菌共分为10个ST型,其中ST100、ST116、ST155型为主要流行型。NotⅠ酶切的福氏志贺菌分为13个PT型,而XbaⅠ酶切的宋内志贺菌分为14个PT型。综上所述,牦牛源志贺菌生化表型、血清型、ST型和PT既存在多态性,又有优势流行型。本试验分离的志贺菌与人源志贺菌携带相同的毒力基因,其中ipaH、ipaBCD、ial、sen基因携带率较高,对公共安全具有潜在的威胁。