正交设计在花椰菜不育系丛生芽诱导培养中的应用

为给“瓯雪60天”制种中核不育系母本9901A组培快繁提供依据,以9901A花球表面花枝为外植体,采用正交设计方法对培养基中TDZ、BA、NAA、2,4-D 4种激素浓度配比进行筛选。结果表明：MS＋6-BA0.5mg/L＋NAA0.001mg/L芽诱导率最大,为94%,但每外植体平均诱导芽数为1.1个;MS＋TDZ0.1mg/L＋NAA0.001mg/L每外植体平均诱导芽数最大,为10个,但芽诱导率为50%。TDZ和NAA浓度适中促进外植体平均芽数的诱导,过高则抑制外植体平均芽数的诱导;2,4-D 和6-BA总体表现为随浓度增加而抑制外植体平均芽数的诱导。     

基于BA/IAA的麻风树离体再生体系的研究

以麻风树无菌苗下胚轴、子叶和叶柄为外植体,在含有不同浓度的BA和IAA MS培养基上进行麻风树再生芽的研究.结果表明,最佳外植体为下胚轴;最佳不定芽诱导培养基为MS＋1.0 mg/L BA＋2.0 mg/L IAA,不定芽诱导率达100%;最佳不定根诱导培养基为MS＋1.0 mg/L IAA,生根率达100%.     

长蕊甜菜树组织培养研究

以长蕊甜菜树不同器官和组织为外植体,研究不同细胞分裂素浓度对芽萌发的影响;同时以长蕊甜菜树的胚乳、胚轴、叶片为外植体,研究在愈伤组织诱导、分化过程中的主要影响因子及其有效浓度范围。结果表明,诱导腋芽萌发的培养基为MS＋6-BA 0.5 mg/L＋NAA 0.1 mg/L＋3%蔗糖＋3%椰乳;诱导愈伤组织的最佳外植体为胚轴;诱导愈伤组织的最佳培养基为MS＋2,4-D 0.05 mg/L＋2%蔗糖＋3%椰乳;愈伤组织分化的培养基为MS＋6-BA 2.0 mg/L＋IAA 0.1 mg/L＋2%蔗糖＋3%椰乳。     

扶芳藤不定芽再生体系的建立

以扶芳藤无芽茎段和下胚轴为外植体,建立了稳定高效的不定芽再生体系。MS＋6-BA 1.5 mg/L＋IBA0.1 mg/L对诱导无芽茎段产生不定芽最为有利,再生率为82.6%。以下胚轴为外植体时,预培养50 d更有利于不定芽的诱导,中浓度的6-BA（1.3 mg/L和1.5 mg/L）对直接分化产生不定芽有利,培养基MS＋6-BA1.5 mg/L＋NAA0.1 mg/L上不定芽再生率最高,达到95.7%。以绵白糖和蔗糖为碳源均能达到较好的再生效果（80%以上）,以葡萄糖为碳源时再生率虽然高达100%,但玻璃化严重。生根培养基以1/2 MS＋IAA（0.7 mg/L）最好,生根率高达92.9%,经驯化后移栽成活率在90%以上。     

龙选蕉组培快繁技术

【目的】探讨不同灭菌剂对外植体的灭菌效果及不同激素浓度和组合对不定芽诱导和增殖的影响,建立龙选蕉的高频再生体系。【方法】以龙选蕉吸芽为外植体,以升汞和0.2%次氯酸钠对外植体灭菌;采用0～6.0mg/L6-BA、0.1～0.2mg/LNAA激素组合对不定芽进行诱导或增殖培养。【结果】相对于升汞,次氯酸钠对龙选蕉外植体灭菌的效果更理想,灭菌率达到90.47%,且外植体生长良好,无中毒现象。在不定芽诱导培养基中,随着6-BA浓度的升高,不定芽萌发率呈先增加后降低趋势,其中以添加6-BA3.0mg/L的诱导效果最理想,萌发率为66.67%;随着6-BA和NAA浓度的提高,不定芽的增殖系数也随之增加,其中以4.0mg/L6-BA＋0.2mg/LNAA为最佳组合,不定芽增殖效果最理想,增殖系数为4.05,芽苗粗壮,叶片颜色正常。【结论】次氯酸钠对龙选蕉吸芽的消毒效果优于升汞,操作简便,易于获得无菌外植体并利于不定芽生长;不定芽诱导最佳培养基为MS＋3.0mg/L6-BA;不定芽增殖最佳培养基为MS＋4.0mg/L6-BA＋0.2mg/LNAA。     

香根草外植体的选择及植株再生试验

为建立香根草组织培养及植株再生体系,分别选取生长健壮无病虫害的植株茎杆、根、叶和幼嫩芽不同部位进行外植体选择及愈伤组织诱导,以及香根草外植体消毒方法和激素处理及培养基对丛生芽诱导的影响试验.结果表明,茎杆、根、叶作为外植体,诱导不出愈伤组织.幼嫩芽是最佳香根草外植体的选择.0.1％升汞对各部位处理效果成功率在65％以上,幼嫩芽消毒浸泡8 min成功率达88％.在MS＋6-BA 1.5 mg/L＋NAA 0.1 mg/L的培养基上培养25 d幼芽愈伤组织诱导率为100％.在MS＋6-BA 0.8 mg/L＋NAA 0.2 mg/L培养基上培养20 d诱导丛生芽效果最好,增殖系数为6.4.生根培养基选用1/2 MS＋NAA 0.3 mg/L＋IAA 0.1 mg/L为最佳,生根率达90％以上.     

白芨组织培养与快速繁殖技术研究

以白芨侧芽和块茎为外植体,采用不同灭菌时间进行灭菌,筛选适宜的外植体和灭菌时间;以MS或1/2MS为基本培养基,附加不同浓度6-BA或NAA进行丛生芽诱导、增殖以及生根培养。结果表明,以白芨侧芽为外植体并采用0.2%升汞消毒灭菌8min的效果较好;侧芽的丛生芽诱导以培养基MS＋1.5mg/L 6-BA＋0.1mg/L NAA的效果较好;继代增殖以培养基MS＋2.0mg/L 6-BA＋0.2mg/L NAA较适合,30d为一个周期,增殖系数为5.0;生根培养基以1/2MS＋1.0mg/LNAA＋0.1mg/L 6-BA为好,生根率为83.3%。     

番茄遗传转化体系的建立

研究以番茄（Lycopersicon esculentum Mill.）栽培品种“中杂9号”、“毛粉802”和“合作908”为试材,通过对番茄茎段的离体培养,研究不同基因型以及不同激素组合对植株再生的影响。结果表明：以茎段为外植体时中杂9号和毛粉802更适合诱导再生植株形成;IAA与IBA比较,IAA利于芽的形成及正常芽的发育。其中中杂9号最适宜诱导愈伤组织和芽分化培养基为MS＋6-BA2.0mg/L＋IAA0.1mg/L、MS＋6-BA2.0mg/L＋IAA0.4-0.5mg/L,分化率均高达100%,毛粉802最适宜诱导愈伤组织和芽分化培养基为MS＋6-BA2.0mg/L＋IAA0.4-0.5mg/L,分化率高达100%。茎段外植体适宜的生根培养基为MS＋IAA0.5mg/L＋6-BA0.6mg/L,生根率高达80.8%。     

雪菊的组织培养研究

以雪菊带芽茎段、茎尖、叶片为外植体以MS为培养基添加不同浓度6BA和NAA进行组织培养实验,结果表明适合带芽茎段愈伤组织诱导的培养基为MS＋6BA1.0mg/L＋XAA0.3mg/L;适合茎尖愈伤组织诱导的培养基为MS＋6BA1.0mg/L＋XAA0.1mg/L;适合叶片愈伤组织诱导的培养基为MS＋6BA3.0mg/L＋NAA0.3mg/L,适合雪菊愈伤组织增殖和不定芽诱导的培养基为MS＋6BA2.0mg/L＋NAA0.3mg/L;适合雪菊试管苗生根的培养基为1/2MS＋6BA0.3mg/L＋XAA0.03mg/L,蔗糖减半,以雪菊无菌苗的带芽茎段、茎尖和叶片为外植体成功地诱导出了愈伤组织,其中带芽茎段愈伤组织诱导率最高时间最短效果最好茎尖次之叶片最差.     

柱杨的高效离体快繁技术

[目的]为利用组织培养技术培育柱杨新品种提供理论依据。[方法]以柱杨试管苗为材料,取其茎段为外植体,筛选最佳芽诱导培养基;分别以试管苗的叶片、茎段和叶柄为外植体,研究不同组织的再生芽诱导率;配制不同激素浓度的生根培养基诱导组培苗生根,筛选最佳生根培养基。[结果]培养基MS＋2.0 mg/L6-BA＋0.40 mg/LIAA诱导再生芽的效率最高,平均每块外植体再生芽8.6个,但芽的质量较差。综合考虑,较理想的芽诱导培养基为MS＋1.0 mg/L6-BA＋0.50 mg/L IAA;柱杨茎段产生再生芽的能力最强,叶柄次之,叶片最差;培养基1/2MS＋0.2 mg/LNAA与1/2 MS＋0.1 mg/LNAA诱导组培苗的生根率最高,每株平均生根数达8条以上,但根的质量较差。综合考虑,最佳生根培养基为1/2 MS＋0.2 mg/LIAA。[结论]柱杨最佳芽诱导培养基为MS＋1.0 mg/L6-BA＋0.50 mg/LIAA,最佳生根培养基为1/2 MS＋0.2 mg/LIAA。     

山苍子外植体初始诱导的研究

[目的]研究山苍子外植体的诱导方法。[方法]以不同类型、不同采集时间的山苍子茎段为外植体材料进行组织培养研究。[结果]以0.1%氯化汞对外植体处理10 min效果较好,此时外植体污染率为40.0%,死亡率为15.0%;以顶芽以下2～5个芽的茎段进行初始诱导效果较好;1月份为最佳取材时间,此时诱导率高达81.1%,污染率仅为11.7%;初始诱导中,以改良MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA培养基为最适培养基配方。[结论]1月采集的半木质化茎段用0.1%氯化汞消毒10 min后,以改良MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA培养基可较好诱导山苍子幼苗。     

长白落叶松愈伤组织诱导与不定芽分化

以长白落叶松成熟胚作为外植体进行消毒和不定芽诱导。研究结果表明:将去皮种子用流水冲洗3d,用70%酒精消毒1min,转入1%的次氯酸钠消毒50min后,再将剥出的胚放入0.5%的次氯酸钠中浸泡2s为最佳消毒方法;在光照条件下(约1600lx),BM培养基中填加1.0mg/LBA,愈伤组织与不定芽的诱导效果最好,愈伤组织诱导率达到100%,不定芽分化率为73.8%;在BM培养基中加入1%活性碳对不定芽有伸长作用。     

石楠的组织培养研究

对石楠的组织培养研究结果表明 :选用冬季休眠芽作为外植体分化效果较好 ,外植体消毒以浓度 0 .10 %升汞溶液浸泡 6min为佳 ,激素不同浓度配比对其诱导、增殖、壮苗有着不同的影响。各培养阶段最适培养基 :①诱导培养基 ,MS + 1.0mg/LBA +0 .1mg/LNAA + 0 .0 5mg/LIBA ;②增殖培养基 ,MS + 2 .0mg/LBA + 0 .5 0mg/LKT + 0 .2 0mg/LNAA ;③壮苗培养基 ,MS + 1.0mg/LKT+ 0 .10mg/LNAA + 0 .2 0mg/LIBA。     

马缨杜鹃离体快繁体系的建立及优化

以马缨杜鹃种子为外植体,建立和优化了马缨杜鹃高效而稳定的离体快繁体系,并采用ISSR标记对试管苗的遗传稳定性进行分子检测.结果表明:种子在接种于1/4MS+1.0mg/L KT培养基上,萌发率在70%以上,丛生芽诱导以无菌苗带顶芽茎段为佳,最适培养基为WPM附加0.5mg/L TDZ和1.0mg/L IBA,丛芽伸长最适培养基为WPM+KT 0.5mg/L+GA 1.0mg/L.在1/2WPM+KT 0.5mg/L+NAA 1.0mg/L+IBA 2.0mg/L培养基上30d开始生根,生根率可达100%.90d后驯化移栽成活率在80%以上.采用20个ISSR引物扩增,对通过上述流程快繁的试管苗的体细胞无性系遗传变异进行分子检测,未检测到多态性带,表明该快繁体系能生产出遗传稳定性高的试管苗.     

哈密瓜顶芽的诱导及植株的再生

为获得一套哈密瓜快速繁殖的方法,以哈密瓜无菌苗幼嫩的顶芽为外植体,研究不同激素配比对顶芽诱导、增殖和生根的影响。结果表明,顶芽在不添加激素的培养基中没有诱导出丛生芽,在添加激素6-BA和NAA的激素中的诱导率达到91%,哈密瓜幼嫩顶芽诱导不定芽的最适培养基为1/2MS+ 6-BA 2.0 mg/L+ NAA 0.5 mg/L。哈密瓜组培苗在不添加激素的培养基中没有根形成,添加激素NAA的生根培养基中生根率达到96%,最佳生根诱导培养基为1/2MS+ NAA 1.0 mg/L。     

驱蚊香草组织培养与快速繁殖研究

以驱蚊香草不同部位为外植体,进行离体快繁试验,结果表明：外植体以叶片和顶芽容易诱导产生愈伤组织,最高诱导率达90％;诱导培养基以Ms＋6-BAl．0～2．0mg／L＋NAA0．2mg／L效果较好,平均芽诱导分化率达85．6％-86．7％;增殖培养基以MS＋6-BA1．0mg／L＋NAA0．1mg／L效果最好,丛生芽增殖最多,繁殖系数达6．12倍;诱导生根培养基以1／2MS＋NAA0．3mg／L最佳,生根率达到100％;假植20d后,移栽成活率达100％。     

枸杞优选优株快繁体系的建立及优质种苗繁殖技术研究

【目的】以枸杞宁杞1号优选优株嫩枝为外植体,研究影响枸杞离体快繁的各种因素,建立优选优株快繁体系,以期达到大量培育枸杞优质种苗的目的。【方法】通过观察采集优选优株,进行外植体的灭菌方法、侧芽诱导及继代培养、生根培养基激素的筛选,确定出相适应的培养基;同时对试管苗的移栽基质也进行了筛选。【结果】加用青霉素注射液500 mg/L浸泡5~8 min后进行外殖体进行表面消毒时,易获得无菌外殖体。适宜培养基:侧芽诱导MS+6-BA0.5 mg/L+IAA0.1 mg/L;增殖培养基为MS+6-BA0.5 mg/L+IAA1.0mg/L;生根培养基1/2MS+IBA0.3 mg/L;移栽基质泥炭∶珍珠岩2∶1,成活率96%。【结论】枸杞优选优株快繁体系的建立,对于加速育种进程和新育良种的繁育、推广奠定了良好的技术基础,通过优选优株进行枸杞优质种苗的培育是可行的。     

旋果苣组织培养的研究

以旋果苣(Streptocarpus wendlanddii)的叶、花葶和花蕾为外植体,以MS为基本培养基,研究了组织培养快繁培养基中细胞分裂素和生长素最佳添加量和不同外植体的最佳灭菌时间。结果表明:在以1 g/L HgCl2溶液进行灭菌时,叶片的最佳灭菌时间是4～5 min,花葶、花蕾的最佳灭菌时间是4 min;在用"84"消毒液进行灭菌时,花葶、花蕾的最佳灭菌时间是5 min。愈伤组织诱导和根分化的最佳培养基均为MS+BA1.0 mg/L+NAA1.0 mg/L;芽分化的最佳培养基为MS+BA4.0 mg/L+NAA0.2 mg/L;继代培养最佳培养基为MS+BA1.0 mg/L+KT0.5 mg/L。     

加工番茄子叶和下胚轴离体植株再生的研究

以加工番茄BO 2和BO 4无菌苗的子叶和下胚轴为外植体,以M S为基本培养基,研究了不同浓度的ZT,6-BA与不同浓度的IAA组合对外植体芽诱导的影响。结果表明,在不同浓度的ZT和IAA组合中,对2个番茄品种的子叶和下胚轴外植体芽诱导均以M S+1.0 m g/L ZT+0.05 m g/L IAA培养基为最好,BO 2品种子叶和下胚轴的出芽率分别为32.7%和24.5%,BO 4品种的分别为37.3%和28.2%;在不同浓度的6-BA和IAA组合中,诱导BO 2外植体出芽率最高的培养基是M S+2.0 m g/L 6-BA+0.2 m g/L IAA,子叶和下胚轴的出芽率分别为27.3%和14.5%;诱导BO 4品种子叶和下胚轴出芽率最高的培养基分别为M S+1.0 m g/L 6-BA+0.2 m g/LIAA和M S+2.0 m g/L 6-BA+0.2 m g/L IAA,子叶和下胚轴的出芽率均为28.2%;在M S+0.1 m g/L IAA培养基上,加工番茄BO 2再生芽1周左右就能长出根,形成完整的小植株。     

野生梭梭的离体培养和植株再生

以野生梭梭带腋芽茎段为外植体进行离体再生研究,探讨不同植物生长调节剂、硝酸银和蔗糖的质量浓度对其愈伤组织诱导、不定芽分化和生根的影响。结果表明,野生梭梭带腋芽茎段愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+2,4-D 2.0 mg/L+6-BA 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6.0 g/L,诱导率为100%;不定芽分化的最佳培养基为MS+NAA 0.5 mg/L+TDZ 1.0 mg/L+AgNO33.5 mg/L+蔗糖26 g/L+琼脂6.5 g/L,不定芽分化率为97.8%;影响野生梭梭再生的最主要因素是NAA,其次是TDZ和AgNO3,蔗糖影响最小。