低温无水乙醇沉淀法提取牦牛血免疫球蛋白的工艺条件研究

以新鲜牦牛血为原料,采用低温无水乙醇沉淀法提取牦牛血中的免疫球蛋白,通过单因素及正交试验,得出最佳工艺条件为:稀释倍数3倍,乙醇添加量25%,盐浓度0.15mol.L-1,pH4.5,在此条件下提取的免疫球蛋白含量为9.283mg.mL-1,提取液经低温冷冻干燥后可得白色固体免疫球蛋白.     

稀释倍数和处理时间对水稀释法提取鸡卵黄抗体的影响

就稀释倍数、处理时间对水稀释法提取鸡卵黄免疫球蛋白的影响进行了探讨,单因素试验结果表明:①处理时间分别为2.5,4.5,6.5,8.5和10.5 h的各个处理所提取的卵黄免疫球蛋白含量之间差异不显著;这5个处理的结果与0.5 h所提取的抗体数量差异极显著。②分别作1∶2,1∶4,1∶6,1∶8稀释处理,所提取的卵黄免疫球蛋白含量之间差异不显著;1∶9和1∶10两个处理所提取的卵黄免疫球蛋白量差异也不显著;1∶2,1∶4,1∶6,1∶8四个处理结果与1∶9和1∶10的两个处理之间差异极显著。③卵黄经2倍以上稀释其免疫球蛋白几乎都存在于稀释液中,沉淀中含量极低。     

外源重组蛋白制备鹅免疫球蛋白轻链特异性多克隆抗体

采用RT-PCR方法扩增鹅免疫球蛋白轻链恒定区编码序列(GoIgCL),构建原核表达载体pET30a-IgCL,在RosettaTM(DE3)pLysS宿主菌中表达鹅免疫球蛋白轻链恒定区重组蛋白rGoCL,以纯化后rGoCL作为免疫原制备兔抗GoIgL多克隆抗体,对多抗进行鉴定分析.结果表明,rGoCL在大肠杆菌中获得可溶性表达,可代替天然分离的轻链作为免疫原制备轻链特异性抗体,多抗效价为1 204800.研究为鹅免疫球蛋白的蛋白结构、功能分析以及鹅免疫诊断试剂研发奠定基础.     

饲喂高蛋白日粮对雏鹅血清尿酸水平、肝脏和肾脏超微结构及ABCG2表达的影响

通过建立雏鹅高尿酸血症模型,研究高蛋白日粮对雏鹅血清尿酸水平、肝脏和肾脏超微结构及ABCG2表达的影响。超微结构观察发现,对照组(CP)肝脏和肾脏细胞器结构完好,高蛋白1组(HP1)、高蛋白2组(HP2)肝脏部分线粒体开始出现肿胀、空泡变性,内质网肿胀消失,糖原减少。肾脏细胞部分线粒体开始出现肿胀、空泡变性,核膜间隙增大。雏鹅7日龄时,HP2组鹅的血清尿酸水平极显著高于CP组和HP1组(P<0.01);雏鹅14日龄时,HP2组鹅的血清尿酸水平极显著高于CP组和HP1组(P<0.01),HP1组鹅血清尿酸水平极显著高于CP组(P<0.01)。qPCR、Western-boltting及免疫组化结果显示,HP2组鹅十二指肠、空肠中ABCG2基因和蛋白的表达显著或极显著高于CP组和HP1组(P<0.05或P<0.01),鹅肾脏ABCG2基因和蛋白的表达显著或极显著低于CP组和HP1组(P<0.05或P<0.01);HP1组鹅ABCG2基因和蛋白在空肠中的表达显著高于CP组(P<0.05),在肾脏中的表达显著低于CP组(P<0.05)。综上所述,饲喂高蛋白日粮导致雏鹅肝脏、肾脏细胞受损,血清尿酸水平升高,引发雏鹅高尿酸血症,空肠、十二指肠中ABCG2的表达增加,而肾脏中ABCG2的表达降低。     

不同水平维生素D3对扬州鹅仔鹅钙磷代谢和免疫机能的影响

【目的】研究在基础日粮中添加不同水平维生素D3（VD3）对仔鹅钙磷代谢和免疫机能的影响。【方法】将300只健康、体重均匀的28日龄扬州鹅公鹅随机分成5个处理组,每个处理组6个重复,每个重复10只。对照组饲喂基础饲粮,试验组分别饲喂添加500、1 000、2 000和4 000 IU•kg-1维生素D3的试验饲粮,饲养至10周龄。【结果】基础日粮中添加1 000 IU•kg-1的维生素D3显著提高了10周龄扬州鹅血清钙含量、胫骨钙含量、胫骨强度和血清免疫球蛋白IgG含量（P＜0.05）;添加2 000 IU•kg-1维生素D3显著提高了血清钙含量（P＜0.01）、胸腺指数和血清白细胞介素-4水平（P＜0.05）;但日粮维生素D3水平对血清磷含量和碱性磷酸酶活性影响不显著（P＞0.05）。【结论】日粮中添加适宜水平的维生素D3（1 000—2 000 IU•kg-1）有利于提高扬州鹅仔鹅的钙代谢和免疫机能。     

免疫球蛋白G(IgG)三种提取方法比较

比较3种提取猪血清中免疫球蛋白IgG方法的提取效果。分别用辛酸沉淀法,硫酸铵分步沉淀法,辛酸-硫酸铵沉淀法粗提猪血清免疫球蛋白IgG,并通过SDS-PAGE凝胶电泳、AlphaEaseFC凝胶成像分析软件、Bradford蛋白浓度测定法等比较3种方法的提取纯度和得率,同时比较3种方法的时效性和经济性。辛酸沉淀法提取IgG所用时间最短,只需1h,得率较高但纯度不高;硫酸铵盐析法提取的IgG纯度较高、得率也高,但时间较长;辛酸-硫酸铵分步沉淀法所得IgG纯度很高,但所用时间较长,得率也较低。3种提取方法各有特点,可根据不同的实验条件和目的选择不同的提取方法。     

山羊抗小鹅瘟血清的研制和应用

本课题采用山羊研制抗小鹅瘟高免血清获得成功,抗体琼扩效价达1:8;雏鹅皮下注射血清 1 ml,经强毒攻击,保护率为 100％;在疫区内免疫接种 25000 余只雏鹅,调查了 394 只,成活率为 92.8％,而 103只未免疫的雏鹅,成活率仅 55.3％;血清对病鹅的洽愈率为 74.3％,证明山羊抗小鹅瘟血清安全、有效。     

抗鹅IgY抗血清制备及在ELISA中的应用

为制备鹅免疫球蛋白特异性抗体,通过主动免疫兔子制备了抗鹅ＩｇＹ抗血清,并在ＥＬＩＳＡ中比较分析了该抗血清的应用效果．结果显示,将制备的抗鹅ＩｇＹ抗血清作为二抗,当抗原包被浓度（１６μｇ／ｍＬ）和血清（１∶１６００）、抗鹅ＩｇＹ抗血清（１∶５１２００）与酶标抗体（１∶２０００）稀释到合适浓度时,在ＥＬＩＳＡ检测鹅抗体水平中呈现出良好效果,其特异性和灵敏度明显好于以兔抗鸡ＩｇＹ作为替代二抗．结果表明所制备的抗鹅ＩｇＹ抗血清在鹅相关的酶联免疫研究方法中是合格和有效的．     

从草鱼血清中提取抗草鱼出血病的IgM

采用sephadex G—200凝胶过滤法,对感染草鱼出血病的草鱼血清进行凝胶过滤,可提取草鱼免疫球蛋白IgM。试验结果:得到Sephadex G-200凝胶过滤的草鱼特异性免疫球蛋白IgM的分离曲线,经分析,在此分离曲线下收集的样品是草鱼特异性免疫球蛋白IgM。     

高、低产蛋量伊犁鹅血清激素与生化指标及卵巢发育差异比较

[目的]研究高、低产蛋量伊犁鹅血清生殖激素、生化指标及卵巢发育的差异,为伊犁鹅产蛋性状的辅助选育提供参考依据.[方法]选择处于产蛋期的高、低产蛋量伊犁鹅各20只,测定其相关血清参数,再分别从高产组和低产组中挑选10只伊犁鹅进行屠宰,取其卵巢样品,进行组织切片观察.[结果](1)在血清生殖激素方面,HEP组伊犁鹅血清中G...     

微波法与传统工艺提取北冬虫夏草多糖的比较研究

为优化北冬虫夏草多糖的提取工艺．采用微波法与传统水提法进行比较,用正交实验设计,以多糖为指标,优化北冬虫夏草多糖微波提取多糖的工艺。结果表明：北冬虫夏草多糖微波提取最佳条件：微波功率550w、固液比1：30、提取时f,130s、提取1次,多糖收率3．67％;传统工艺（热水法）提取最佳条件：60℃加热3h、固液比1：30、提取2次,多糖收率3．35％。优化的微波提取多糖快速、节能、水为溶剂、污染小且有利于萃取热不稳定的物质．工艺简便、合理、可行。     

羊抗鸡酶标二抗用于鹅血清抗体检测的研究

通过比较鸡IgG与鹅IgG的相似性,探讨羊抗鸡酶标二抗用于检测鹅血清抗体的可行性。用辛酸-硫酸铵盐析法提纯鸡、鸭、鹅、小鼠、兔、猪、羊的IgG,比较上述动物IgG粗提物的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱,并用蛋白免疫转印法定性检测上述动物血清IgG与羊抗鸡酶标二抗的结合情况;然后用直接ELISA方法分析不同动物血清分别与抗鸡酶标抗体和抗鹅酶标抗体结合程度的差异;最后用间接ELISA方法比较两种酶标抗体对同一鹅群大肠杆菌抗体的检测结果。结果表明,鸡、鸭、鹅IgG具有较大的相似性,都能够与抗鸡酶标二抗结合;羊抗鸡酶标二抗可以替代抗鹅酶标二抗来检测鹅的血清抗体。     

紫花苜蓿中多糖的提取方法研究

[目的]探究提取紫花苜蓿中多糖的最佳工艺条件。[方法]采用热水浸提法提取紫花苜蓿中多糖,并通过单因素试验和正交试验研究了浸提时间、浸提温度、浸提固液比、浸提次数对提取紫花苜蓿中多糖得率的影响。[结果]紫花苜蓿中多糖的最佳提取工艺条件为浸提时间1 h、浸提温度95℃、固液比1∶30、浸提3次。在该最佳提取条件下,多糖的得率可达6.1%。[结论]为紫花苜蓿多糖的研究和生产提供了理论依据。     

野山楂果中原花青素提取工艺研究

在单因素的基础上,通过正交试验,对野山楂果中原花青素的提取工艺进行了探索,主要考察了料液比、乙醇浓度、温度和提取时间四种因素的影响,得出最佳的提取工艺条件：温度60℃,料液比1：15,时间30min,提取3次,乙醇浓度55%,然后进行纯化,所得原花青素纯度可达60%以上。     

荷叶总黄酮提取工艺研究

以荷叶为原料,采用乙醇水浴浸提对其中总黄酮的提取工艺进行了研究。通过单因素试验和正交试验,确定出各因素对总黄酮得率的影响顺序为:B(料液比)>D(乙醇浓度)>A(提取温度)>C(提取时间),从而得到乙醇提取荷叶总黄酮的最佳工艺条件为:提取时间90 min、乙醇浓度80%、料液比1∶40(g∶mL)、提取温度40℃。正交试验表明,重现性和稳定性试验与正交试验所得的结果一致。该研究为荷叶总黄酮的开发利用提供了新的方法与依据,具有很重要的现实意义。     

小鹅瘟羊源高免血清的制备及比较

为制备高效价的小鹅瘟高免血清,试验采用从贵州某养鹩场病鹅分离的小鹅瘟野生强毒株,接种于9 d鹅胚,收集24 h以后死亡的鹅胚尿囊液,制备小鹅瘟病毒抗原,与弗氏佐剂混合均匀,多次免疫山革后,颈动脉一次性放血,离心收集血清即得到小鹅瘟羊源高免血清,以琼脂扩散进行血清效价测定,并与市售小鹅瘟鹅源高免血清进行保护率比较.结果显示,试验制备的小鹅瘟羊源高免血清抗体效价在1:8以王,对人工感染雏鹅的保护率为95%,而市售小鹅瘟鹅源高免血清的保护率只有85%.结果表明,本试验制备的小鹅瘟羊源高免血清具有效价高、成本低、安全性好等优点.     

梵净山七叶一枝花总黄酮提取工艺的优化

[目的]优化梵净山七叶一枝花总黄酮提取工艺,为其综合开发与利用提供技术支持.[方法]以梵净山七叶一枝花为材料,通过单因素试验和正交试验,考察料液比、乙醇体积分数、浸提温度和浸提次数对七叶一枝花总黄酮提取效果的影响.[结果]影响七叶一枝花总黄酮提取的因素顺序为：乙醇体积分数＞料液比＞浸提次数＞浸提温度,其最佳提取工艺条件为：料液比1∶15,乙醇体积分数90％,浸提温度70℃,浸提3次.在最佳工艺条件下,提取获得的七叶一枝花总黄酮含量为4.92 mg/g.[结论]乙醇超声波浸提法具有稳定性好、成本较低、易操作等特点,可有效提取获得七叶一枝花总黄酮.     

柚皮中黄酮物质的提取工艺研究

研究了黄酮物质的最佳提取工艺以及提取过程中影响得率的因素。通过单因素和正交试验对提取工艺参数进行分析,结果显示,黄酮得率的影响因素由大到小依次为:固液比乙醇浓度提取温度提取时间,最佳工艺条件为固液比1∶20,乙醇浓度85%,提取温度75℃,提取时间3.0 h,在此条件下所得柚皮黄酮得率为0.536%。     

葎草中多糖微波提取工艺研究

采用单因素和正交实验法,以葎草多糖提取率为考察指标,对葎草叶中多糖的提取条件进行优化。结果表明,葎草叶中多糖的微波提取工艺中各因素影响程度为：液料比〉微波时间〉微波功率,葎草叶中多糖成分提取的最适宜工艺为：液料比40∶1,微波功率：425 W,微波时间：90 s。微波提取葎草叶中多糖,所需时间短、提取率高,多糖提取率达12.3556%。     

罗非鱼鱼皮酸溶性胶原蛋白的制备工艺研究简

[目的]研究从罗非鱼鱼皮中用酸溶剂提取胶原蛋白的最佳条件.[方法]以罗非鱼鱼皮为原料,利用酸处理提取胶原蛋白.以提取溶液、浓度、浸提时间、料液比为因素,通过测定其羟脯氨酸含量,计算不同提取条件下胶原蛋白的得率.再利用响应面法对提取条件进行优化,对拟合多项式回归模型进行分析.[结果]由响应面优化得到罗非鱼鱼皮中胶原蛋白最佳酸提取工艺条件为：乙酸浓度0.53 mol/L,浸泡时间64.8h、料液比1∶25 g/ml,此条件下胶原蛋白提取量试验均值为244.86 mg/g.[结论]研究可为罗非鱼鱼皮中胶原蛋白的提取利用提供参考.