组织块再移法分离培养奶山羊乳腺上皮细胞

通过比较组织块贴壁培养法、组织块再移法、胰蛋白酶消化法、胶原酶Ⅱ消化法和胶原酶消化配合组织块贴壁法分离、培养、纯化山羊乳腺上皮细胞,绘制细胞生长曲线并计算细胞群体倍增时间,研究乳腺上皮细胞培养效果。结果显示,利用胶原酶消化配合组织块贴壁法不能获得正常生长的乳腺上皮细胞;利用组织块贴壁培养法、组织块再移法和胶原酶Ⅱ消化法获得大量的乳腺上皮细胞,所得到的上皮细胞生长曲线呈典型的＂S＂型,符合细胞生长的一般规律。组织块再移法不仅可快速获得大量纯化的乳腺上皮细胞,而且所得到的细胞经传代后,细胞群体倍增时间最短、增殖能力最强,表明,该法是获得山羊乳腺上皮细胞最适宜的方法。     

牦牛肺动脉平滑肌细胞的分离培养与鉴定

比较组织块贴壁法和酶消化法对牦牛肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)原代培养的差异,为牦牛PASMCs的分离培养及后续的研究建立细胞模型。采用组织块贴壁法和0.2%Ⅰ型胶原酶消化法分别获取牦牛PASMCs,倒置相差显微镜下比较2种方法分离的细胞形态;台盼蓝染色测定细胞活力;α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和钙调节蛋白(calponin)免疫荧光法对细胞进行鉴定;细胞计数法获得细胞生长曲线并进行观察。结果显示,显微镜下2种方法获得的PASMCs均为长梭形,呈典型的"峰-谷"状结构,且传代存活率均在98.5%以上;2种细胞免疫荧光鉴定结果均表明培养的细胞为PASMCs;组织块贴壁法和酶消化法的PASMCs生长曲线无明显差别(P0.05)。结果表明,2种方法均能顺利分离得到较纯的PASMCs,但各有优缺点,因此可根据具体情况选用牦牛PASMCs的原代分离培养方法。     

绒山羊附睾上皮细胞培养方法的建立及其生长特性

本研究旨在建立一种简单易行、获取细胞纯度高的绒山羊附睾上皮细胞体外培养体系。10~12月龄绒山羊附睾头部分别采用酶消化法和改良组织块消化法进行原代培养,利用免疫细胞化学染色法和免疫荧光化学法对细胞进行鉴定,同时利用流式细胞仪和CCK法分别检测细胞纯度和增殖情况,在电镜下观察细胞超微结构。结果表明,两种培养方法所获的细胞均呈岛屿状克隆生长和较好的增殖能力,具有活跃的分泌和代谢功能;上皮细胞特异性的角蛋白18和附睾特异性的谷胱甘肽过氧化物酶5(GPx5)的表达以及流式细胞仪结果显示,两种方法所获细胞均为纯度较高的附睾上皮细胞,但改良组织块消化法获得原代细胞需要的时间长,酶消化法获得原代细胞时间短,获得的细胞量大。本研究结果为进一步研究绒山羊附睾上皮功能提供了良好的基础。     

奶牛子宫内膜上皮细胞和间质细胞的分离、培养及鉴定

为了分离培养奶牛子宫内膜上皮细胞和间质细胞,给建立奶牛子宫内膜体外模型提供条件,研究采用胰蛋白酶和胶原酶消化法分离细胞,随后传代培养纯化细胞,并通过光镜观察和免疫细胞化学染色对其进行鉴别.结果表明:0.3%胰蛋白酶消化组织块1 h后可得到上皮细胞,纯度＞80%;上皮细胞呈多边型,核大而圆,具有细胞角蛋白免疫反应性.用0.1%胶原酶Ⅱ继续消化2 h,可得到间质细胞,纯度＞90%;间质细胞贴壁后可见梭形和多角形两种形态,免疫细胞化学染色显示这两种细胞均具有波形蛋白免疫反应性,而细胞角蛋白无免疫反应性,提示它们为来源于内膜基质的基质细胞,说明采用酶消化法能够成功地培养奶牛子宫内膜间质细胞和上皮细胞.     

鸽胚胎嗉囊成纤维细胞的分离培养及鉴定

为探究鸽嗉囊成纤维细胞的体外分离及培养方法,研究选择17日胚龄的鸽嗉囊组织,采用胰酶消化法和组织块贴壁培养法进行原代细胞分离,通过差速贴壁法纯化成纤维细胞。通过细胞形态观察、生长曲线测定和免疫荧光反应对细胞类型进行鉴定。结果表明,采用胰酶消化法分离培养30 h后细胞开始生长,采用组织块贴壁培养法的细胞培养72 h后开始从组织块边缘贴壁延伸生长;通过显微镜观察贴壁细胞呈梭型,连接紧密。对组织贴壁培养法获得的细胞传代后状态良好呈纺锤形,细胞培养48～84 h后快速生长,84 h后生长变缓;免疫荧光染色结果显示,波性蛋白染色为阳性,细胞核经DAPI染色呈现椭圆形,鉴定为成纤维细胞。成纤维细胞微丝在细胞周边及内部均丰富分布。研究表明,利用组织块贴壁培养法及胰酶消化法均能成功分离成纤维细胞,为后期深入研究嗉囊成纤维细胞功能奠定基础。     

鹅小肠上皮细胞的分离培养研究

取29～30胚龄的鹅胚为试验材料,通过组织块种植法和酶消化法进行原代鹅小肠上皮的体外培养,采用刮除法、相差消化及相差贴壁法对上皮细胞进行纯化,用0.05%Trypsin-EDTA进行消化传代,通过形态学观察及免疫细胞化学法进行鉴定.结果表明:组织块种植法得到的鹅小肠上皮细胞生长状况良好,细胞活性较强,经过纯化,得到了纯度较高的鹅小肠上皮细胞.而联合使用浓度为300 U/mL的胶原酶(Ⅺ型)和0.1 mg/mL的中性蛋白酶(Ⅰ型)、多次(短时间)消化收获细胞法虽然可获得大量的健全肠绒毛隐窝单位,但传代后其增殖能力明显下降;形态学观察及免疫细胞化学法鉴定为阳性,证明分离出的细胞为小肠上皮细胞,从而为小肠上皮细胞的进一步研究奠定了基础.     

肉鸡肺动脉内皮细胞的体外培养和鉴定

分别采用组织贴块法和胶原酶消化法培养肉鸡肺动脉内皮细胞,并对其进行传代。采用形态学和凝血因子相关抗原免疫组化染色法对所培养的细胞进行鉴定。结果表明,2种方法均能够获取原代肉鸡肺动脉内皮细胞,采用贴块法培养2周左右可获得单层生长的细胞,而采用胶原酶消化法3~5d即可获得单层生长的细胞。原代肉鸡肺动脉内皮细胞在体外可传5~6代。倒置显微镜和HE染色观察培养细胞的形态符合血管内皮细胞的特征,因子抗原免疫组化染色结果呈阳性进一步证明培养的细胞是肺动脉内皮细胞。     

新生猪骨骼肌卫星细胞的培养鉴定及生物学特性

采用Ⅰ型胶原酶和胰蛋白酶两步消化法获取新生猪骨骼肌卫星细胞,并进行体外原代和传代培养.观察细胞各个阶段的形态,通过生长曲线等手段研究骨骼肌卫星细胞的增殖与分化能力,利用RT-PCR以及免疫细胞化学染色对所获得的细胞进行鉴定.结果显示两步消化法适用于骨骼肌卫星细胞的获取.在生长培养基作用下,细胞增殖旺盛;在分化培养基下,细胞分化良好,可融合成肌管.本研究探讨了猪骨骼肌卫星细胞体外培养、鉴定的方法及其生物学特性,为建立猪骨骼肌卫星细胞系打下了一定的基础.     

猫子宫内膜上皮细胞的分离培养与生物学特性

为了分离、纯化、培养猫子宫内膜上皮细胞并分析其生物学特性,本试验采用胰蛋白酶消化法+组织块培养法,于体外分离和培养子宫内膜上皮细胞,并采用免疫荧光法对其进行鉴定;测定第3代(P3)细胞生长曲线和群体倍增时间,比较P3和P6细胞克隆形成率。结果显示：猫子宫内膜上皮细胞呈典型铺路石状,细胞角蛋白染色呈阳性,符合内膜上皮细胞特征;P3细胞生长曲线呈典型S型;P3子宫内膜上皮细胞群体倍增时间为(22.73±2.05) h,其克隆形成率极显著高于P6(P<0.01)。结果表明：本试验采用胰蛋白酶消化法+组织块培养法分离获得的猫子宫内膜上皮细胞具有良好的体外增殖能力。     

藏野驴皮肤成纤维细胞分离培养及生物学特性分析

为了研究藏野驴成纤维细胞分离培养方法及生物学特性,以7岁龄藏野驴耳部皮肤组织为试验材料,采用组织块贴壁法进行细胞原代培养,采用胰酶消化法和差速贴壁法进行细胞纯化,通过细胞形态观察、生长曲线测定、细胞周期和免疫荧光染色对细胞进行鉴定。结果显示,成纤维细胞生长曲线呈“S”形,细胞生长状态良好,细胞特异性标记免疫荧光染色显示FSP-1呈阳性表达。结果表明,成功建立了藏野驴成体耳部皮肤成纤维细胞体外分离、培养和鉴定方法,为藏野驴种质资源保护、细胞水平及分子水平的研究奠定了基础。     

不同培养基对小鼠胚胎干细胞培养的影响

探讨了培养基中各组成(基础培养基、添加物、血清)对小鼠胚胎干细胞(ES细胞)培养的影响.结果如下:GMEM与DMEM这2种基本培养基在对ES细胞维持培养上差异不显著.GMEM 18%血清 4mmol/L谷氨酰胺 0.1mmol/L非必需氨基酸、DMEM 18%血清 4mmol/L谷氨酰胺 0.1mmol/L非必需氨基酸以及DMEM 18%血清,这3种培养基都有较好的对ES细胞维持培养能力.在培养基中不需要额外添加谷氨酰胺和非必需氨基酸.血清浓度会直接影响ES细胞培养效果,应使用18%的优质血清.     

Use of blood culture medium enrichment for synovial fluid culture in horses: A comparison of different culture methods

Reasons for performing study: Standard methods for culturing equine synovial fluid (SF) are often unrewarding. Evidence‐based information on the relative efficiency of different systems used for optimisation of isolation of microorganisms from equine SF is lacking. Objectives: To compare the results of different culture systems performed in parallel on SF samples from horses clinically diagnosed with synovial sepsis. Methods: Synovial fluid specimens were collected between February 2007 and October 2008 from all horses admitted to a referral hospital that were clinically diagnosed with synovial sepsis and from control horses. Synovial fluid samples were cultured in parallel by: 1) direct agar culture (DA); agar culture after: 2) lysis‐centrifugation pretreatment (LC); 3) conventional enrichment (CE); 4) combined LC/CE; or 5) blood culture medium enrichment using an automated system (BACTEC 9050). Results: Ninety SF samples from 82 horses were included, together with 40 control samples. Seventy‐one of 90 samples (79%) were culture‐positive by using blood culture medium enrichment (BACTEC), which was significantly higher compared to all other methods. BACTEC enrichment was never negative while any of the other methods was positive. Although agar culture following LC and/or CE resulted in a slightly higher number of positive samples compared to DA, this difference was not significant. All control samples were culture negative by the 5 different techniques. Although the majority of samples containing isolates recovered without enrichment, culture results after BACTEC enrichment were available on the same day as for agar culture with or without LC (19/23 samples), while CE postponed recovery by at least one day in 20/23 samples. Conclusion: Blood culture medium enrichment is superior to other techniques for isolation of bacteria from SF of horses. The use of an automated system allows enrichment without substantially postponing recovery of microorganisms. Potential relevance: The efficient and fast isolation of microorganisms from infected SF by the BACTEC system allows for rapid susceptibility testing and a more appropriate antibiotic treatment.     

草原文化是华夏文化的活泼元素

游牧是草原文化的基本元素。保存草原文化,就要给游牧以适当的地位。游牧是人类最早的仿生学,其合理内核可为农业现代化作贡献,不可一概视为落后而废除。草原文化从徒步游牧到骑马游牧,是一大进步,对人类文化的沟通交融作出了的重大贡献。一旦草原文化与农耕文化融合,发生系统耦合效应,将产生生态的、经济的巨大变革,从而导致文化的飞跃。我们不妨称为‘文化造山运动’。草原文化在华夏文化发展史中始终是活泼元素。人类文明将离不开草原文化的支撑。     

培养基不同制造工艺对细菌培养效果的影响

用传统工艺和改进工艺制备培养基,进行大肠杆菌的培养,比较不同制备工艺对细菌培养效果。结果：在其他培养条件相同情况下,用传统工艺制备培养基培养三批大肠杆菌,其活菌数分别是4.6×10^5、5.2×10^5、3.9×10^5;平均4.57×10^5。用改进工艺制备培养基培养三批大肠杆菌,其活菌数分别是8.2×10^5、8.6×10^5、8.0×10^5;平均8.27×10^5。后者比前者增加活菌数3.7×10^5。     

论草文化

从古至今、从国内到国外论述了草文化的起源、发展历史与过程,阐述了草与人类社会发展的密切关系.文献资料表明,中国在先秦时代就出现了草文化,在唐宋时代锦上添花,如今更是丰富多彩了.丝绸之路是草原文化与中原文化、中国文化与外国文化交流的纽带.草文化和草原文化在一代一代的劳动人民中流传下来,并得以发扬光大.草文化无国界,世界各地都能找到丰富多彩的草文化,草和草文化早已成为人们生活中不可缺少的一部分.     

肉鹅的科学养殖

一、雏鹅饲养 雏鹅是指从出壳到4周龄的小鹅.雏鹅体温调节机能尚未健全,对外界环境变化适应能力差,对饲料消化能力较差;新陈代谢旺盛,生长发育快.雏鹅的饲养,要以保证营养需要,提高成活率为主要目标.     

企业交化的价值何在

[编者按]有一句话:"小企业看老板,中企业看制度,大企业看文化."企业文化是企业生存与发展的灵魂,这种文化的力量引导企业成员的思想,从根本上成就品牌的差异化,这种独特的竞争力也恰恰是任何竞争对手都无法模仿的.     

不同活性炭对罗汉果快繁生根的影响

本试验研究不同培养基B5、1/2 B5、MS、1/2 MS以及不同类型、不同浓度活性炭对罗汉果快繁生根的影响。结果表明：不添加活性炭的情况下,四种不同培养基中生根率最高的培养基为B5培养基,生根率为70%,且生根数最多,平均根长最长；粗、细两种活性炭均对罗汉果生根有促进作用,但细活性炭培养基诱导的根更长。在不同类型以及不同浓度活性炭的培养基中生根率最高的为细活性炭1.0 g/L的B5培养基和粗活性炭1.0 g/L的B5培养基,但细活性炭1.0 g/L的B5培养基生根数量和平均根长显著高于(P<0.05)后者。因此,较为适宜的生根培养基配方为：细活性炭1.0g/L,培养基为B5。     

Organ culture of chicken colon: physiological observations after 24 and 48 hours of culture

Colon from chickens, four weeks old, can best be maintained for 24 hours in a serum-free organ culture system using Trowell T8 medium-agar sheet at 25 degrees C. From physiological observations of DNA and protein synthesis it was found that the protein content of colonic explants did not change in up to 48 hours of culture while the DNA content did not change in up to 24 hours but decreased significantly to two thirds of the controls in 48 hours of culture. The organ culture system can be maintained satisfactorily for 24 hours.