虾夷扇贝肌原纤维蛋白热稳定性的季节性差异

为探究虾夷扇贝原料特性的季节差异,分别对春(4月)、夏(7月)、秋(10月)和冬(1月)产活品虾夷扇贝的商品属性及闭壳肌ATP与ATPase分布进行了分析比较;以肌原纤维蛋白(Myofibrillar protein ,Mf)-Ca_²⁺ATPase活性为检测指标,重点探索闭壳肌蛋白热稳定性的季节性差异,并对闭壳肌两种肌肉即横纹肌与平滑肌的蛋白热稳定性做了对比分析。结果显示：春季虾夷扇贝最肥满,生殖腺占总重的比率高达6.96%,其他三个季节仅为1.79%~2.95%。主要可食部位闭壳肌的蛋白质、脂肪和ATP含量的季节性差异都不明显,闭壳肌富含蛋白质,含量占干基75%~80%,脂肪含量很低,仅为0.63%~1.00%;值得关注的是,在春和夏两个季节闭壳肌总糖含量分别为11.14%和13.84%,显著高于秋冬两季,,而冬季含量最低,仅为2.67%。横纹肌ATP含量在各个季节都高于平滑肌,二者分别为4.3-5.0 μmol/g和1.2-1.6 μmol/g;横纹肌与平滑肌的ATP及其关联物含量的季节性差异均不明显;此外,横纹肌与平滑肌具有相似的热稳定性,在30℃和35℃下加热30min后,Mf-Ca_²⁺ATPase活性均并未有显著变化,而40℃加热Mf-Ca_²⁺ATPase酶活开始降低,45℃酶活下降加剧,50℃加热10min内二者的Mf-Ca_²⁺ATPase活力均丧失殆尽。春季虾夷扇贝的肌肉蛋白热稳定性最差,其横纹肌与平滑肌Mf-Ca_²⁺ATPase易于失活,且横纹肌失活速率略高于平滑肌;秋冬和夏季则差异不大;研究还发现,肌肉蛋白Mf存在两种热变性速率,推测在虾夷扇贝闭壳肌蛋白中具有两种稳定性不同的肌球蛋白,尚需进一步分析探明。     

日本枪乌贼(Loligo japonica)不同温度冻藏过程中的品质变化

选取-20℃、-30℃和-50℃3个冻藏温度,以TVB-N值、肌原纤维蛋白含量、Ca~(2+)-ATPase活性、巯基含量、TBARS值及肌肉组织微观结构为指标,结合感官评分,对比分析90 d内日本枪乌贼(Loligo japonica)的品质变化规律。结果显示,在不同冻藏温度下,随着时间的延长,Ca~(2+)-ATPase活性和感官评分不断下降;肌原纤维蛋白和巯基含量,则先略微上升而后快速下降;TVB-N值和TBARS值呈不断上升的趋势,且温度越高上升速率越快;肌肉组织微观结构分析表明,枪乌贼肌纤维结构在冻藏过程中逐渐变得松散。相比-20℃,-30℃和-50℃冻藏温度条件下更能长久地保持枪乌贼品质,且品质无显著差异。综合分析认为,冻藏温度低于-30℃时,可较好地保持枪乌贼品质。     

长牡蛎闭壳肌肌纤维的组织学特性

分别利用石蜡切片苏木精-伊红染色法、冷冻切片烟酰胺腺嘌呤二核苷酸四唑氧化还原酶(NADH-TR)组化染色法、肌球蛋白ATP酶染色法对长牡蛎闭壳肌平滑肌和横纹肌进行了组织学特性研究,并比较平滑肌和横纹肌肌纤维组成的差异。石蜡切片结果显示,闭壳肌中平滑肌和横纹肌肌纤维形态结构不同,肌纤维直径、肌纤维密度和横截面积存在显著差异,其中平滑肌肌纤维直径为(5.97±0.631)μm,肌纤维密度为(25 485.65±3917.807)根/mm~2,肌纤维横截面积为(26.25±5.365)μm~2;横纹肌肌纤维直径为(7.41±0.847)μm,肌纤维密度为(16 908.25±3917.807)根/mm~2,横截面积为(40.45±10.083)μm~2。NADH-TR染色结果显示,平滑肌中富含NADH,肌纤维染色较深,呈现深蓝紫色,主要是I型肌纤维,为氧化代谢的慢速收缩型肌纤维;横纹肌染色较浅或者基本不着色,主要是II型肌纤维,为糖酵解代谢的快速收缩肌纤维。ATPase酶染色结果显示,横纹肌ATPase活性强,染色较深,呈现黑色,主要是II型肌纤维;平滑肌中ATPase活性弱,着色浅或基本不着色,主要是I型肌纤维。ATPase酶染色结果与NADH-TR染色结果一致。研究阐明了长牡蛎闭壳肌中平滑肌和横纹肌肌纤维的组织学特性及收缩、代谢特性差异,为深入研究长牡蛎肌纤维生物学特性提供了重要的基础资料,为提高我国贝类肉质品质提供理论依据。     

浸渍冻结对调理草鱼冻藏过程中肌原纤维蛋白特性的影响

为了探讨浸渍冻结对草鱼(Ctenopharyngodon idellus)冻藏过程蛋白质变性的影响,对蛋白质溶解性、巯基、Ca~(2+)-ATPase活性、肌原纤维的降解及二级结构进行了研究。结果发现浸渍冻结的肌原纤维蛋白的溶解度、总巯基含量、活性巯基总量和Ca~(2+)-ATPase的活性均比空气冻结的高,冻藏150 d后分别比空气冻结的高17.51%、14.20%、4.86%和28.73%。初步表明浸渍冻结更有利于减缓蛋白质变性。电泳结果表明,冻藏过程中浸渍冻结的肌球蛋白重链的电泳条带颜色比空气冻结的深,原肌球蛋白的电泳条带颜色比空气冻结的浅,说明浸渍冻结可减缓调理草鱼块蛋白质的降解。红外光谱的结果进一步发现浸渍冻结的肌原纤维蛋白的α-螺旋含量的下降程度较空气冻结的小,β-折叠、无规卷曲和β-转角含量的增加程度无空气冻结的明显。结果揭示了浸渍冻结更有利于维持冻藏过程中肌原纤维蛋白的二级结构。总的来说,浸渍冻结更有利于减轻蛋白质变性而引起调理草鱼块品质下降的问题。     

海洋经济软体动物肌肉副肌球蛋白分布特性初探

以肌肉组织的蛋白为切入点,探索海洋经济软体类主要可食部位的化学特性与差异,并对软体类副肌球蛋白的分布特点进行初步探索。研究对象为商品活体经济软体类,包括菲律宾蛤仔、毛蚶、脉红螺、皱纹盘鲍及长蛸5个种类。首先,对可食部位化学组成及氨基酸组成进行分析比较,结果显示,5种软体动物间一般化学组成差别不大,肌肉中均含有17种氨基酸,且亮氨酸和赖氨酸含量均较高,氨基酸含量无显著差异。然后,对肌肉组织蛋白组分及各组分含量分布进行分析与比较,SDS-PAGE分析表明,5种软体动物肌肉中均含有肌球蛋白、肌动球蛋白、副肌球蛋白及原肌球蛋白等重要组分;同时在菲律宾蛤仔、毛蚶及皱纹盘鲍的肌肉中含有分子量高于200 ku的未知蛋白聚合物。基于质谱分析鉴定并结合分子量进一步计算,确定该蛋白聚合物为副肌球蛋白聚合体。综上可知,不同软体类肌肉蛋白组分分布的差异主要体现在副肌球蛋白,因此,副肌球蛋白及其聚合体的分布特性值得进一步探索。     

紫色土吸附Cu2+、Zn2+对水体中土壤颗粒凝聚沉降的影响

研究中性紫色土表面吸附Cu~(2+)、Zn~(2+)后对其在水体中凝聚沉降的影响,为重金属离子释放对三峡库区水-土界面生态系统造成的风险提供数据参考。2014年10月,采集西南大学桑园的中性紫色土表层土壤,以Cu-(NO_3)_2和Zn(NO_3)_2配制重金属离子,进行Cu~(2+)和Zn~(2+)对中性紫色土凝聚沉降实验、测定中性紫色土颗粒吸附Cu~(2+)和Zn~(2+)后zeta电位值。研究结果表明:(1)中性紫色土吸附Cu~(2+)、Zn~(2+)后水体中土壤颗粒含量随时间不断减小,并且呈先快速后缓慢减小的规律,在不同浓度条件下土壤颗粒含量变化规律表现差异较大,其临界浓度分别为0.3~0.5和0.5~0.7 mmol/L。(2)水体中中性紫色土颗粒平均沉降速率均随Cu~(2+)、Zn~(2+)浓度升高而增大,分别从1.01 cm/min增加到2.92和2.58 cm/min,表现为Cu~(2+)Zn~(2+);过程分为3个阶段:缓慢增加,快速增加和基本不变,平均沉降速率随浓度变化临界范围分别为0.3~0.5和0.5~0.7 mmol/L。(3)水体中中性紫色土颗粒zeta电位绝对值随Cu~(2+)、Zn~(2+)浓度升高而变小,同时表现为Ca~(2+)Zn~(2+)Cu~(2+),土壤颗粒吸附Ca~(2+)、Cu~(2+)和Zn~(2+)后zeta电位绝对值随浓度变化临界浓度范围分别为0.8、0.3~0.5和0.5~0.7 mmol/L。重金属离子吸附在中性紫色土表面减小zeta电位值和静电斥力,加速土壤颗粒凝聚沉降过程。     

罗非鱼皮酶解物钙离子结合能力及其结合物的抗氧化活性

该研究利用中性蛋白酶、Protamex1.5L和碱性蛋白酶酶解罗非鱼(Oreochromis mossambicus)鱼皮,研究了各种酶解产物对钙离子(Ca~(2+))的结合能力,比较了酶解物结合Ca~(2+)后的抗氧化能力,并分析了结合物的傅里叶红外光谱(FT-IR)。结果显示,Protamex1.5L水解罗非鱼皮2 h的酶解产物具有最高的Ca~(2+)结合率(87.79%);3种罗非鱼皮酶解产物均存在抗氧化性,其中Protamex1.5L酶解罗非鱼皮产物的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除率、·OH自由基清除率和还原力最高分别为51.46%、17.26%和0.09;罗非鱼皮酶解物(TSH)结合Ca~(2+)后,钙离子结合物(TSH-Ca)的DPPH自由基清除率和羟基自由基清除率减弱,还原力增强;FTIR分析结果表明了Ca~(2+)与TSH中氨基氮原子和羰基氧原子发生了结合。     

日本枪乌贼(Loligo japonica)不同温度冻藏过程中的品质变化

选取-20℃、-30℃和-50℃3个冻藏温度,以TVB-N值、肌原纤维蛋白含量、Ca2+-ATPase活性、巯基含量、TBARS值及肌肉组织微观结构为指标,结合感官评分,对比分析90 d内日本枪乌贼(Loligo japonica)的品质变化规律。结果显示,在不同冻藏温度下,随着时间的延长,Ca2+-ATPase活性和感官评分不断下降;肌原纤维蛋白和巯基含量,则先略微上升而后快速下降;TVB-N值和TBARS值呈不断上升的趋势,且温度越高上升速率越快;肌肉组织微观结构分析表明,枪乌贼肌纤维结构在冻藏过程中逐渐变得松散。相比-20℃,-30℃和-50℃冻藏温度条件下更能长久地保持枪乌贼品质,且品质无显著差异。综合分析认为,冻藏温度低于-30℃时,可较好地保持枪乌贼品质。     

复合鱼肉肌原纤维蛋白加热过程中理化特性变化的研究

考察了鲢(Hypophthalmichthys molitrix)、小黄鱼(Pseudosciaena polyactis)及其以质量比1∶1复合的肌原纤维蛋白的浊度、Ca2+-ATPase活性和巯基含量在加热过程中的变化规律。结果显示:随着加热温度的升高,三种蛋白溶液的浊度呈S型曲线增加。复合肌原纤维蛋白的增加模式与小黄鱼肌原纤维蛋白的增加模式相似,不同于鲢肌原纤维蛋白的增加模式。鲢肌原纤维蛋白和小黄鱼肌原纤维蛋白的Ca2+-ATPase活性随温度的升高逐渐下降。复合肌原纤维蛋白的Ca2+-ATPase活性在20～35℃略有上升,而后剧烈下降,55℃时活性完全丧失。复合肌原纤维蛋白的总巯基含量随着加热温度的升高呈下降趋势。当温度在30～60℃时下降缓慢,高于65℃时剧烈下降。     

高温与氨氮复合胁迫对凡纳滨对虾渗透调节的影响

将体质量(6.77±0.51) g凡纳滨对虾饲养在200 L玻璃纤维桶中,每桶50尾,设置2个温度(恒温30℃和1 h内由30℃急升至33℃),每个温度设置以氯化铵溶液调节的4个氨氮质量浓度(0、5、15、25 mg/L),共8个试验组,每组3个平行。胁迫72 h时测定鳃中Na~+/K~+-ATP酶与Ca~(2+)-ATP酶活性以及肌肉和鳃中游离氨基酸含量,分析高温与氨氮复合胁迫对凡纳滨对虾渗透压生理调节的影响。试验结果显示:(1)同一温度下,30℃时,25 mg/L氨氮组的Na~+/K~+-ATP酶活性和5 mg/L氨氮组的Ca~(2+)-ATP酶活性均显著升高,而33℃时,3个氨氮胁迫组Na~+/K~+-ATP酶和Ca~(2+)-ATP酶活性均显著升高(P0.05);(2)同一氨氮质量浓度下,30℃和33℃试验组的Na~+/K~+-ATP酶和Ca~(2+)-ATP酶活性均差异显著,且25 mg/L氨氮质量浓度下33℃试验组酶活性显著低于30℃试验组(P0.05);(3)氨氮质量浓度为15 mg/L和25 mg/L时,33℃试验组鳃和肌肉游离氨基酸总含量均显著高于30℃组(P0.05);(4)30℃和33℃试验组与氨氮胁迫下,肌肉中丙氨酸含量均随氨氮质量浓度升高而显著增加,且33℃试验组显著高于30℃组(P0.05)。试验结果表明,高温与氨氮复合胁迫对凡纳滨对虾Na~+/K~+-ATP酶和Ca~(2+)-ATP酶活性以及游离氨基酸含量影响显著,会造成凡纳滨对虾渗透压生理调节功能紊乱。     

Thermally induced gelation of paramyosin from scallop adductor muscle

ABSTRACT:   Thermally induced gelation of paramyosin from scallop smooth adductor muscle was investigated by dynamic rheological measurements under various conditions. The paramyosin thermal gel was produced at pH 6.5 and 7.2 at temperatures above 30°C through a two-step increase in storage (G') and loss (G') moduli; these values were higher than in gels produced from actomyosin at a high temperature. The thermal gel properties were very firm and brittle. In contrast, one main peak of G' was observed during gelation at pH 8.0. The gel produced at pH 8.0 was more transparent and less soluble in a 6 M urea−0.5 M NaCl solution than those formed either at pH 6.5 or 7.2. These differences in the thermal gel properties are presumed to derive from the pH dependence of the gel matrix-forming process, such as oxidative cross-linking between cysteine residues, rather than from the thermal unfolding of the paramyosin molecules. The thermal gelation profile of chymotrypsin-digested paramyosin showed marked depression of G' at high temperature.     

Gelation of low salt soluble proteins from scallop adductor muscle in relation to its freshness

ABSTRACT: The low salt extract from scallop striated adductor muscle contained extra proteins in addition to sarcoplasmic proteins and was turned into a gel upon standing or immediately by the addition of Ca²⁺. The amount of extra protein, which was composed of a large amount of actin and a small amount of myosin, decreased with a decrease in adenosine triphosphate (ATP) content in the muscle during storage at 5°C. Actin was easily extracted from scallop myofibrils in low salt solution with ATP at 1 mM or above. Furthermore, ATP was required to induce the gelation of the low salt extract. A visual observation of the gelation of low salt extract is therefore a simple and easy method to inspect prerigor state of scallop adductor muscle.     

臭氧减菌化处理罗非鱼片冰温贮藏过程中蛋白质生化特性的变化

为研究臭氧减菌化处理罗非鱼片冰温贮藏过程中蛋白质生化特性变化规律,本研究对冰温贮藏过程中经臭氧处理罗非鱼片肌原纤维蛋白盐溶性、Ca2+-ATPase活性、表面疏水性、巯基及羰基含量变化进行了评价。结果显示：在冰温贮藏过程中,臭氧处理组和对照组罗非鱼片蛋白质均发生了不同程度的变性,表现为：随贮藏时间的延长,肌原纤维蛋白盐溶性、Ca2 -ATPase活性及巯基含量均呈下降趋势,而肌动球蛋白表面疏水性和羰基含量则呈上升趋势;冰温贮藏20 d后,臭氧处理组罗非鱼片肌原纤维蛋白盐溶性、Ca2 -ATPase活性和巯基含量分别下降了76.57%、89.76%和66.72%,而对照组则分别下降了69.05%、86.45%和62.29%;另一方面,臭氧处理组罗非鱼片肌动球蛋白表面疏水性和羰基含量分别上升了111.75%和76.46%,对照组则分别上升了104.77%和58.23%。在同一贮藏时间臭氧处理组罗非鱼片肌原纤维蛋白盐溶性、Ca2 -ATPase活性及巯基含量较对照组低,而肌动球蛋白表面疏水性和羰基含量较对照组高。研究表明：臭氧水的氧化性及处理过程中产生的ROS加速了冰温贮藏过程中罗非鱼肌肉蛋白质的变性。     

红藻糖苷的提取及其对草鱼鱼糜抗冻性能的影响

为探讨红藻糖苷的醇提工艺以及红藻糖苷对冷冻草鱼鱼糜蛋白变性作用的影响,首先采用响应面分析法对乙醇浓度、提取温度、时间和液料比4个因素进行优化,随后以冷冻鱼糜的盐溶性蛋白含量、巯基含量及肌原纤维蛋白Ca~(2+)-ATP酶活性等参数为指标,探测冷冻草鱼鱼糜在冷藏过程中添加红藻糖苷对蛋白质变性作用的影响。结果显示,红藻糖苷的最佳醇提条件为乙醇72.3%、提取温度60°C、时间4 h、液料比14∶1(m L/g),在此条件下的提取率为3.46%;抗冻性能结果显示,随红藻糖苷浓度升高,抗冻效果增强;以10%红藻糖苷处理冷冻鱼糜4周后,盐溶性蛋白含量和巯基含量分别比空白组高30.62%、32.80%,肌原纤维蛋白的Ca2+-ATP酶活性的下降率比空白组低37.51%,解冻失水率的增长率比空白组低133.07%。研究表明,红藻糖苷能有效延缓草鱼鱼糜肌原纤维蛋白的冷冻变性。     

鱼贝类肌肉品质变化与能量代谢关联

水产养殖是满足人们对蛋白质需求的重要途径,减少鱼贝类捕后因鲜度下降导致的资源浪费是水产品加工领域的重要研究课题之一。横纹肌作为鱼贝类肌肉中主要的食用部位,其品质变化与肌肉能量代谢状况密不可分。本文详细综述了ATP在线粒体、肌质网和肌原纤维蛋白间的产生、转运和消耗的过程。回顾了基于横纹肌能量代谢过程所提出的一系列鱼贝类肌肉鲜度评价指标,包括ATP及其关联化合物相关的K值、K_max值、AEC值,以及肌原纤维蛋白和肌质网的ATPase活性、线粒体结构和呼吸活性等。进一步根据消费现状综述了各鲜度指标在鱼类鲜品和贝类活品中的适用性,提出加强鱼贝类捕后初期（品质易逝期）控制的必要性和紧迫性。在众多指标中,线粒体活性可作为易逝期品质控制的有效指标,可有效开展易逝期的品质评价,减少因捕后处置不当造成的品质损失和资源浪费。     

Isolation and characterization of a novel 45 kDa calponin-like protein from anterior byssus retractor muscle of the mussel Mytilus galloprovincialis

SUMMARY: A calponin-like protein of 45 kDa was isolated from mussel anterior byssus retractor muscle (ABRM) and its inhibitory effects on actomyosin Mg²⁺-ATPase was demonstrated. The 2-D electrophoresis for ABRM myofibrils gave a spot of 45 kDa protein in addition to myofibrillar proteins such as myosin and actin. The 45 kDa protein, which was more basic and showed a slightly higher molecular weight than actin, was isolated by ion-exchange chromatography and subjected to chymotryptic digestion. N-terminal amino acid sequencing of polypeptide fragments produced gave two sequences, ASQKGMTSFGAVRHH and GMDRALISKMGSKYDSGL, both of which showed a high homology to those of vertebrate calponins and invertebrate calponin-related proteins. Furthermore, the 45 kDa protein strongly reacted with commercially available antibody raised against chicken smooth muscle calponin, demonstrating that the mussel ABRM 45 kDa protein is a new member of the calponin family. Then, actomyosin Mg²⁺-ATPase activity of ABRM was measured in the presence and absence of the 45 kDa protein. The 45 kDa protein clearly inhibited actomyosin Mg²⁺-ATPase activity in a dose-dependent manner as in the case of other vertebrate calponins. These results indicate that the 45 kDa calponin-like protein is involved in the thin filament-associated regulation of molluscan smooth muscle contraction, possibly of a unique contraction called catch.     

Thermal denaturation and autolysis profiles of myofibrillar proteins of mantle muscle of jumbo squid Docidicus gigas

ABSTRACT:    Jumbo squid was very similar to Japanese common squid in terms of myofibrillar Ca²⁺-, Mg²⁺- and K⁺(EDTA)-ATPase activities. Myofibrils of jumbo squid were significantly stabilized upon addition of Ca²⁺ and destabilized by increasing KCl concentration for heating. Incubation of muscle homogenate of jumbo squid induced a selective cleavage of myosin into two major fragments and the cleavage was inhibited by EDTA. Autolysis was prominent at and above 0.3 M NaCl where myosin filaments dissolve. The enzyme involved in the autolysis was proved to be unstable showing maximal autolysis rate at 25°C. Washing the homogenate partially reduced the autolysis activity.     

我国鲢鳙鳊鲫鱼肉蛋白质冷藏稳定性的研究

采用肌原纤维（Ｍｆ）ＡＴＰ酶活性和溶解度考察鲢鳙鳊鲫四种淡水鱼的冷藏稳定性,显示出完全一致的对应结果,即－２０℃鲢鳙变性严重,鳊鲫轻微,结果表明：ＭｆＣａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性在考察蛋白质冷藏变性中是一个可靠而又实用的指标。