钩棘单睾吸虫和扇棘单睾吸虫ITS2序列测定及其种系发育分析

本试验将从犬猫肠道中分离的钩棘单睾吸虫和扇棘单睾吸虫用盐酸卡红染色后观察其形态学特征;PCR扩增其ITS2基因序列并测序,并将测序结果与GenBank同属异形科的多棘单睾吸虫和横川后殖吸虫序列进行比对;应用Mega 6.05软件采用邻位相连法构建种系发育树进行分析。盐酸卡红染色后显示,钩棘单睾吸虫和扇棘单睾吸虫各形态学特征符合经典的分类学描述。PCR测序后获得钩棘单睾吸虫和扇棘单睾吸虫ITS2序列长度分别为295和297 bp,G+C含量分别为49.5%(146/295)和54.2%(161/297)。提交至GenBank后获得登录号分别为钩棘单睾吸虫KJ137221~KJ137223,KP165437~KP165439;扇棘单睾吸虫KP165440。序列比对结果显示,钩棘单睾吸虫和扇棘单睾吸虫种内差异性为0,4种异形吸虫种间差异为15.2%~28.9%。基于ITS2序列建立的种系发育树显示钩棘单睾吸虫和扇棘单睾吸虫构成自展值为78%的拓扑分支。     

多重PCR鉴定三种颚口线虫方法的建立

为了建立快速、灵敏、可靠的鉴别颚口线虫虫种的方法,根据GenBank中发表的棘颚口线虫、日本颚口线虫和杜氏颚口线虫ITS-2序列,设计了3对特异引物,建立了这3种颚口线虫的单一PCR和多重PCR检测方法,并分别对单一PCR和多重PCR方法的特异性和敏感性进行了鉴定。结果显示单一PCR和多重PCR均能特异扩增出棘颚口线虫、日本颚口线虫和杜氏颚口线虫,其片段大小分别为282、358、183 bp,单一PCR对棘颚口线虫、日本颚口线虫和杜氏颚口线虫虫体DNA最小检出量分别为0.2、0.01、0.01 ng/μL。对宫脂线虫、异尖线虫、棘口吸虫以及迭宫绦虫均不能进行扩增。用建立的多重PCR方法对菲律宾、印度尼西亚、黑龙江颚口线虫等12条颚口线虫DNA模板进行扩增,经鉴定菲律宾与印度尼西亚的颚口线虫为棘颚口线虫,黑龙江的颚口线虫为日本颚口线虫。鉴定结果与原虫体样本的形态鉴定和测序分析结果一致。研究显示建立的多重PCR方法具有很强的特异性和较高的敏感性,可用于棘颚口线虫、日本颚口线虫和杜氏颚口线虫虫种的鉴定和流行病学调查。     

福安市麻鸭寄生蠕虫的初步调查与群落生态分析

剖检福安市麻鸭30只,检得蠕虫11种,总感染率为73.3％。分别为:鸭两尖吸虫23％,楔形前殖吸虫23％,卷棘口吸虫7％,宫川棘口吸虫23％,接睾棘口吸虫3％,似难低颈吸虫3％,细背孔吸虫7％,舟形嗜气管吸虫3％,叉棘单睾绦虫13％,裂刺四棱线虫47％,鸭瓣口线虫20％。群落生态分析表明,优势种为裂刺四棱线虫。两两种间关系中,卷棘口吸虫分别与宫川棘口吸虫和鸭瓣口线虫呈正关联(P<0.05);接睾棘口吸虫、舟形嗜气管吸虫和似锥低颈吸虫之间呈负关联(P<0.05)。种群分布型中属随机分布的有卷棘口吸虫、接睾棘口吸虫和舟形嗜气管吸虫,其余8种均为聚集分布。     

黑河沿江地域及俄罗斯布拉戈维申斯克市伏寄生蠕虫区系调查

本文报道了黑河沿江地域（爱辉区、孙吴县、逊克县）及俄罗斯布拉戈维申斯克市寄生蠕虫调查结果，共剖检44只犬，经鉴定，寄生蠕虫的感染率为100％，分别属于3纲、9科、10属、其中吸虫4种为华枝睾吸虫（Clonorchis sinensis).日本棘隙吸虫（Echinochasmus japonicus).横川后殖吸虫（Metagonimus yokogawai)。有翼翼形吸虫（Alaria alata)；绦虫3种为泡状带绦虫(Taenia hydatigena)。线中殖孔绦虫（Mesocestides lineatus)，犬复孔绦虫（Dipylidium caninum）；线虫3种为犬弓首蛔虫（Toxocara canis)。犬钩口线虫（Ancylostoma caninum)。旋毛形线虫（Trichinella spiralis)。其中以犬弓首蛔虫感染率最高为68．18％，华枝睾吸虫27．27％，线中残孔绦虫22．725，旋毛形线虫13．64％。     

孙吴县犬寄生蠕虫区系调查报告

本文报道了孙吴县犬体寄生蠕虫区系调查结果，共剖检犬１０只，检获蠕虫８种。蠕虫寄生率达１００％，８种虫体经鉴定结果为吸虫两种：华枝睾吸虫；日本棘隙吸虫。绦虫三种：泡状带绦虫；线中殖孔绦虫和犬复孔绦虫。线虫三种：犬弓首线虫；犬钩口线虫和旋毛形线虫。８种虫体隶属于３纲８科８属，其中分布广，感染率高的为犬弓首线虫和华枝睾吸虫，为孙吴县犬寄生蠕虫的优势种。     

贵州省犬猫寄生蠕虫种类

近年来,我们用蠕虫学剖检法对贵州省部分市、县犬(1991～1993年)、猫(1986年)寄生蠕虫进行了系统的调查研究.从调查结果加上文献记载的有关资料,共发现贵州省犬猫寄生蠕虫20种,隶属3纲12科16属.其中吸虫2种,绦虫7种,线虫11种;与人畜共患蠕虫16种,易感且危害人或家畜严重的有8种,即华枝睾吸虫、斯氏并殖吸虫、细粒棘球绦虫、盂氏迭宫绦虫、旋毛线虫、泡状带绦虫、豆状带绦虫和多头多头绦     

萝北县犬寄虫蠕虫的区系调查

对萝北县犬寄生蠕虫区系作了调查，结果，在剖检的１０支犬体内，寄生蠕虫的感染率为１００％，共检获５种虫体，经鉴定结果，其中吸虫１种，华枝睾吸虫。线虫４种，犬弓首线虫，犬钩口线虫；旋毛形线虫和肾膨结线虫。它们隶属于２纲、５科，５属。在这５种蠕虫中华枝睾吸虫，犬弓首线虫和犬钩口线虫的感染率均在５０％以上，为萝北县犬寄生蠕虫的优势种。     

抚远县犬寄生蠕虫区系调查报告

对抚远县犬寄生蠕虫区进行调查。剖检１０只犬体内均有蠕虫寄生，虫体感染率达１００％。１０只犬共检体７种，其中吸虫２种；华枝睾吸虫和横川后殖吸虫；络虫１种；线中殖孔绦虫和线虫４种；犬弓首线虫、犬钩口线虫、肾膨结线虫和旋毛形线虫。７种虫体分别隶属于３纲、７科、７属。     

猫传染性鼻气管炎PCR检测方法的建立

本文通过设计特异性扩增猫疱疹病毒Ⅰ型gD基因的引物,使用猫三联弱毒苗为模板建立了检测猫疱疹病毒Ⅰ型的PCR诊断方法,并对其灵敏性、特异性进行了评价,并将建立的PCR检测方法对临床样品进行了检测。实验结果证实,本实验建立的猫疱疹病毒Ⅰ型的PCR检测方法,其灵敏度可达到最低可检测10^5拷贝的病毒含量;特异性试验结果仅能扩增出猫三联弱毒苗。     

猪囊尾蚴和华支睾吸虫液相基因芯片检测方法的建立

为建立一种可以同时检测猪囊尾蚴和华支睾吸虫的液相基因芯片方法,本研究以猪囊尾蚴ITS基因和华支睾吸虫ITS基因为靶序列,设计并合成特异性探针和引物,通过PCR方法扩增目的片段,构建阳性重组质粒标准品并对其进行测序,建立一种基于双重PCR的液相基因芯片检测方法。结果显示,扩增目的片段长度分别约为150 bp和170 bp,测序结果与Gen Bank登录的猪囊尾蚴和华支睾吸虫相关基因一致性分别为99.35%和98.27%;液相基因芯片对单重PCR产物和双重PCR产物的检测结果一致,特异性和重复性良好。应用该方法检测猪囊尾蚴和华支睾吸虫的灵敏度分别为5.13×104拷贝/μL和2.03×104拷贝/μL,比琼脂糖凝胶电泳灵敏高约8倍;应用该方法检测猪囊尾蚴和华支睾吸虫的变异系数均在8%以内,模拟污染样品的检验试验准确率达98%。本研究初步建立了可以同时高效、灵敏和特异检测猪囊尾蚴和华支睾吸虫的液相基因芯片方法,为人畜共患寄生虫的检测和监控提供了新方法。     

Real—time PCR和PCR方法快速检测犬细小病毒

为适应出入境口岸对进出境宠物快速检疫的需要,本研究在建立PCR方法检测犬细小病毒(CPV)的基础上,进一步采用Taqman探针技术建立了快速检测CPV的Real-time PCR方法.通过灵敏度对比试验,证实Real-time PCR方法比PCR方法检测灵敏度显著提高.通过对大量不同采样部位样品的检测证实,本研究建立的Real-time PCR和PCR方法具有较高的可靠性,并可显著提高CPV的阳性检出率.     

基于等位基因特异性PCR原理建立鸡白痢沙门氏菌PCR方法

根据鸡白痢沙门氏菌与鸡伤寒沙门氏菌的rfbS基因在第237和598位碱基的不同,设计和合成等位基因特异性PCR引物,建立快速检测鸡白痢沙门氏菌的PCR方法,并应用该法对鸡白痢沙门氏菌临床分离样品进行了PCR鉴定。结果显示,该PCR方法能特异性地鉴定鸡白痢沙门氏菌,检测灵敏度达18 pg/μL DNA,4.7×10⁴ CFU/mL菌液,表明建立的等位基因特异性PCR方法能准确而快速地鉴定鸡白痢沙门氏菌。     

Comparison of the specificity and sensitivity of PCR, nested PCR, and real-time PCR for the diagnosis of histomoniasis

Blackhead, also known as enterohepatitis, is caused by a protozoan parasite called Histomonas meleagridis. Clinical symptoms are nonspecific. Until now, diagnosis has been mainly based on postmortem lesions and microscopical and histopathological examination. In many cases, especially in layer flocks, these conventional methods are not sufficient, as the lesions are sometimes not clear. The technique for isolation of histomonads in vitro offers many advantages, but the confirmation of histomonads growing in culture may require a time-consuming procedure of rectal inoculation of culture material into chickens or turkeys. The aim of our investigation was to establish a conventional polymerase chain reaction (PCR), a nested PCR, and a real-time PCR, and to examine their specificity as well as sensitivity in the diagnosis of histomoniasis. The obtained results have shown that the conventional PCR is more sensitive than the real-time PCR. Furthermore, the sensitivity of the PCR can be increased by adding the nested PCR. However, the real-time PCR is more specific.     

Real-time PCR方法和PCR方法检测虾白斑综合征病毒

由白斑综合征病毒引起的虾白斑综合征是国际兽医局（OIE）规定的必须上报的水生动物二类疫病。本研究首先通过设计新的PCR引物，提高了PCR检测白斑综合征病毒的阳性检出率。为进一步提高白斑综合征病毒检测的灵敏度，本研究采用TaqMan探针技术建立了快速检测白斑综合征病毒的real-time PCR方法，通过与常规PCR方法比较，证实其检测灵敏度显著提高。     

实时荧光PCR和常规PCR方法检测饲料中鸡源性成分

根据鸡线粒体DNA序列,设计并筛选了鸡源性特异引物及探针,建立了饲料中鸡源性成分的常规PCR和实时荧光PCR检测方法,结果表明常规PCR方法最低可以从饲料中检出0.1%的鸡源性成分,实时荧光PCR方法最低可以从饲料中检出0.001%的鸡源性成分。该方法具有很高的特异性和灵敏性,可以作为鸡源性成分鉴别检测的常规方法。     

兔黏液瘤病快速检测方法的建立

兔黏液瘤病是由兔黏液瘤病毒引起的兔的一种高度接触性、致死性传染病。为了加强口岸对进境野生及实验用兔中兔黏液瘤病的筛查和流行病学调查,本研究建立了PCR和Real-time PCR快速高通量检测兔黏液瘤病的方法,证实两种检测方法具有良好的特异性和灵敏性,适用于兔黏液瘤病的快速检测。     

非洲猪瘟病毒常规PCR及Real-time PCR检测方法的建立

根据非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)P72基因的核苷酸序列,设计并合成引物以及荧光标记的TaqMan探针,以含P72基因的重组质粒作为阳性模板,用于常规PCR和Real-time PCR方法的建立,结果表明常规PCR的检测灵敏度是600个拷贝的病毒核酸分子,Real-time PCR的检测灵敏度是20个拷贝的病毒核酸分子,两种PCR检测方法均具有特异性强、简单快速的优点。可以用于出入境检验检疫部门对非洲猪瘟病毒的快速检测。     

Real-time PCR和常规PCR方法快速鉴定肉骨粉中的牛源性成份

疯牛病是一种严重危害动物和人类健康的疾病,其病原朊病毒可以通过食物链进行传播,因此建立准确的检测牛源性成份的方法非常重要.我们采用常规PCR和Real-time PCR中的TaqMan技术建立了快速鉴定牛源性成份的方法,使用Chelex-100提取肉骨粉中的DNA,过程简单可靠仅需要20min左右.对不同含量的牛肉骨粉进行检测,常规PCR能够检测到的最低含量是0.001%,而Real-time PCR对相同的样品进行检测所得到的灵敏度更高,最高可达到0.0001%,两种PCR方法的鉴定过程都非常简单快速,各需要2 h左右.这两种方法可以根据各实验室的不同条件作为肉骨粉鉴别的常规检测方法.