口蹄疫病毒WFL株基因组全长cDNA的克隆及序列分析

根据口蹄疫病毒基因组的结构特点以及GenBank上公布的全序列，用DNAMAN分别设计了涵盖整个基因组序列的3对引物，从接种口蹄疫病毒WFL株的细胞培养液中提取了病毒基因组RNA，采用RT-PCR方法和RACE法分别扩增了3条基因片段，并将扩增片段分别与T载体连接，在体外分别进行了5-半分子和3’半分子的构建。最后将5’半分子和3’半分子连接成基因组全长cDNA分子。经PCR鉴定、酶切鉴定及全长cDNA测序，证实成功构建了口蹄疫病毒wFL株基因组全长eDNA分子。序列分析结果表明，供试口蹄疫病毒基因组全长为8155nt，5＇UTR长1059nt；具有一个大的读码框，其核苷酸长度为6969nt。包括201aa的前导蛋白基因和2122aa的聚合蛋白基因；3＇UTR长127nt，包括34nt的polv（A）。     

1株E亚群禽白血病病毒的分离鉴定及遗传进化分析

E亚群禽白血病病毒（ALV-E）是指存在于鸡染色体中的内源性逆转录病毒基因组DNA或片段。具有转录活性的ALV-E既会对鸡的生产性能（体重和产蛋率）产生负面影响，又能从抗体水平干扰对外源性ALV的鉴别诊断。为对黑龙江省某鸡场内一禽白血病病毒RT-PCR阳性病料进行病毒分离鉴定及分析其基因组特征和遗传进化情况，通过分子生物学、病毒形态学及全基因组序列测定方法对病毒培养物进行鉴定和分析，结果显示，该分离株可在CEF细胞盲传至第9代，电镜下可观察到近似球形、直径约为80 nm，并具有囊膜和纤突结构的病毒粒子，将其命名为HLJE2020株。序列分析结果显示，其全基因组序列中的gag和pol基因相对保守，LTR和env基因与ALV-E同属一个进化分支，而gp85基因则与ALV-E和ALV-B均具有较高相似性，遗传进化分析显示在ALV-E和ALV-B间出现一个单独的分支，结合RDPv.4和SimPlot软件分析结果，推测该毒株gp85基因可能存在E亚群AF229株与B亚群SDAU09C1株的重组现象。本研究为了解禽白血病病毒基因组遗传演化情况提供数据资料，并为ALV的防控提供参考和依据。     

分子病毒学相关技术在预防兽医学上的应用

病毒（Virus）是广泛存在于人类、动物、植物及微生物体内的一类细小生物，结构非常简单，外面包以蛋白质组成的衣壳，核心为一种核酸DNA或RNA。这种核酸DNA或RNA储存着病毒生命特性的全部遗传物质——基因组。动物分子病毒学的研究于20世纪80年代末由结构基因组时代发展到功能基因组时代或称为后基因组时代。随着对动物分子病毒学研究的深入，     

猪圆环病毒基因组结构与功能研究进展

猪圆环病毒(PCV)是单链环状DNA病毒,有PCV1和PCV2两种血清型,其中PCV2严重危害着世界养猪业。PCV2因其严重的危害性和精简而高效的基因组结构引起众多国内外专家学者的广泛研究,本文参考NCBI上公布的PCV2序列绘制了PCV2基因组结构图谱,就相关基因的结构和功能进行综述,并就与病毒复制、病毒免疫原性、病毒致病力等功能相关的基因进行了归纳和总结,以期能为PCV2分子生物学和新型疫苗的研究提供参考。     

新城疫病毒基因组与基因演化

新城疫在世界范围内出现了4次大流行,造成了极大的经济损失和贸易影响。虽然新城疫病毒仅有1个血清型,但不同毒株生物学特性和毒力相差很大。近来,病毒宿主谱扩大,开始感染水禽,造成鹅的大规模发病。经典的新城疫病毒基因组长度为15 186个核苷酸(nt),如La Sota和V4毒株等,而我室报道的鹅源毒株ZJ1全长为15 192 nt。我们对基因组进行比对分析,发现新城疫病毒是在基因组水平上整体演化的。     

猪繁殖和呼吸系统综合征病毒的分子生物学研究进展

本文综述近年来有关猪繁殖和呼吸系统综合征病毒分子生物学方面的研究概况，内容涉及病毒基因组、蛋白及其变异，尤其对欧洲株和美洲株基因组和蛋白结构方面的不同进行了比较。     

鹅细小病毒分子生物学研究进展

本文根据国内外鹅细小病毒的研究结果，对国小病毒在分类学地位，基因组结构，基因组的转录和调节，基因编码蛋白，与番鸭细小病毒的关系等方面进行综述，为鹅细小病毒的进一步研究提供参考。     

猪瘟病毒分子生物学研究进展

猪瘟病毒 (CSFV)是一种具有囊膜的 RNA病毒 ,在病毒分类上属于黄病毒科、瘟病毒属的成员 ,也是世界上危害最严重的猪的病原之一 ,被国际兽医局 (OIE)列为 A类动物传染病 ,因此开展猪瘟病毒分子生物学研究具有重要的经济意义。1　CSFV基因组结构和功能CSFV基因组为单股正链 RNA,长约 1 2 .3 kb,含有一个大的开放阅读框架 ,并由其编码一种约3 898个氨基酸的多聚蛋白 ,该聚蛋白在翻译的同时和翻译后经病毒和宿主细胞的蛋白酶加工成 1 2种成熟的病毒蛋白 ,其在聚蛋白上从 N端到 C端的顺序依次为 :Npro、C、Ems、E1、E2、p7、NS2、N…     

透明颤菌血红蛋白基因(vgb)表达载体的构建及其诱导表达

利用PCR技术将透明颠菌血红蛋白基因(vhb)克隆到融合表达裁体pET28a，在大肠杆菌BL21(DE3)表达。重组蛋白分别在30℃和37℃诱导表达，30℃诱导获得可溶性表达。结果表明：在30℃，1．5mmol／L和2．5mmol／LIPTG诱导下，诱导4—8h透明颠菌血红蛋白可获得高表达——透明颠菌血红蛋白的表达量分别占菌体总蛋白的18．7％和27．7％。     

抗菌肽Cecropin P1基因表达载体构建与表达

根据大肠杆菌的密码子偏好性,人工设计并合成了3条抗菌肽Cecropin P1基因寡核苷酸片段,通过PCR扩增得到抗菌肽Cecropin P1基因,将此基因克隆到原核表达载体pMAL-p2X中,然后将重组质粒pMAL-p2X-Cecropin P1转化E.coliTB1,经IPTG诱导进行融合表达,以Amylose Resin亲和层析纯化。通过SDS-PAGE分析,融合蛋白MBP-Cecropin P1表达与纯化成功。抗菌肽Cecropin P1基因的成功表达为进一步研究其抗菌活性、抗菌机理及应用研究打下基础。     

牛结核分枝杆菌溶血磷脂酶真核表达载体的构建及在Hela细胞中的表达

为了研究牛结核分枝杆菌溶血磷脂酶基因(Lip)的生物学特性及其功能,试验构建了Lip-pEGFP融合基因的真核表达载体,利用脂质体(lipofectamine2000)将其转染到Hela细胞中,用荧光显微镜检测GFP在细胞中的表达情况。结果显示,重组Lip-pEGFP载体在Hela细胞中获得了高效表达,且能够稳定传代,为进一步研究Lip的生物学功能及其在牛结核分枝杆菌中的作用奠定了基础。     

细胞黏附分子1（ICAM-1）ScFv基因原核载体的构建及表达

应用PCR技术扩增ICAM-1ScFv基因,经纯化测序,得到约750bp的核苷酸片段,并构建了原核重组表达质粒pET20b-ICAM-1ScFv。将重组质粒转化至表达菌BL21（DE3）中,诱导后的SDS-PAGE分析显示,pET20b-ICAM-1ScFv表达量占菌体蛋白总量的18.4%。本试验将重组蛋白的表达条件进行优化,结果表明,ICAM-1ScFv蛋白在pET20b表达载体中的最佳表达条件为37℃诱导5h。     

猪食欲肽受体2基因真核表达质粒的构建及其表达

构建带有myc标签和Kozak序列的猪食欲肽受体2(OX2R)基因的真核表达质粒pcDNA3.1(+)-myc/OX2R,观察在HEK293T真核细胞中的表达。设计带有酶切位点(HindⅢ和XbaⅠ)的特异性引物,采用RT-PCR技术从猪的下丘脑中扩增OX2R基因,并克隆入pcDNA3.1(+)质粒中。用限制性内切酶酶切分析及测序分析证明构建成功后,用脂质体法转染HEK293T细胞,蛋白质印迹法检测OX2R基因的表达。结果,成功构建了带有myc标签和Kozak序列的pcDNA3.1(+)-myc/OX2R重组质粒,蛋白质印迹法检测该质粒可在真核细胞中表达。本研究为将来研究猪食欲肽受体2的功能奠定基础。     

锌与基因表达

锌是动植物体组成的必需成分,也是动植物体生长发育过程中必需的微量元素。在动物的生长发育过程中,锌参与不同的细胞进程,包括催化作用、基因表达和细胞凋亡和氧化应激的抑制剂犤1犦。例如,锌至少是60～80种酶的组成部分犤2犦,它在酶中主要是提供结构或催化作用。碳酸酐酶的活     

戊型肝炎病毒RdRp基因真核表达质粒的构建及表达

目的 构建戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV )RdRp基因真核表达质粒,并检测其在PLC/PRF/5、A549和HepG2 3种细胞中的表达,为后续RdRp的研究提供实验依据.方法 利用RT-nPCR法从阳性HEV粪便中扩增RdRp基因片段,插入pcDNA3.0真核表达载体中,并在其3’端插入EGFP报告基因,构建融合表达质粒pcDNA3.0-RdRp-EGFP,脂质体法转染PLC/PRF/5、A549和HepG2细胞,荧光显微镜观察报告基因的表达,RT-nPCR检测RdRp基因mRNA的转录情况,Western blot检测RdRp蛋白的表达.结果 重组表达质粒经酶切鉴定和测序证实构建正确;RdRp基因和蛋白在A549和HepG2细胞中可高效、特异性表达.结论 成功构建了RdRp基因对真核表达质粒,并在A549和HepG2培养细胞中大量表达,为进一步研究RdRp在HEV复制过程中的功能奠定了基础.