禽星状病毒研究进展

禽星状病毒属于星状病毒科。禽类临床感染禽星状病毒可引起病毒性腹泻,鸡肾炎、鸭致死性肝炎、鹅内脏痛风等疾病,导致生长发育迟缓、生产力低下,严重可导致死亡,给养殖业造成了一定的损失。文章就近年来禽星状病毒的病原、流行特点、检测方法及防控措施进行综述,以期为后期进一步研究提供参考。     

禽星状病毒感染的流行特点

禽星状病毒能够感染多种禽类,产生病毒性腹泻,是一种流行范围广、致病性强、发病率高的病原体。目前发现禽星状病毒可导致鸡、火鸡、珍珠鸡、鸭、鸽子和鹅等,出现痛风、关节肿大等临床症状,患病动物表现出生长发育迟缓、产蛋下降,严重可导致死亡。本文对近年来国内外禽星状病毒的流行病学特点、基因组结构以及禽星状病毒感染的主要临床症状、临床检测方法等方面进行了综述。     

Ⅱ型鸡星状病毒衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达以及多克隆抗体的制备

为构建Ⅱ型鸡星状病毒衣壳蛋白昆虫细胞表达载体,并免疫小鼠制备多克隆抗体,研究根据病毒衣壳蛋白基因序列设计引物,采用RT-PCR扩增衣壳蛋白基因全长,亚克隆至杆状病毒转移载体p Fast-Bac-HTA,经过蓝白斑筛选获得重组杆状病毒质粒r Bacmid-cap,将鉴定正确的阳性质粒转染至昆虫Sf9细胞获得重组杆状病毒。Western-blot和间接免疫荧光检测结果表明,Ⅱ型鸡星状病毒衣壳蛋白在昆虫Sf9细胞中成功表达,利用表达衣壳蛋白的昆虫细胞免疫小鼠制备的多克隆抗体血清与天然病毒也具有良好的反应性。试验结果为进一步研究鸡星状病毒衣壳蛋白的生物学功能以及病毒检测方法的建立提供了生物材料。     

鹅星状病毒的分离鉴定及全基因组序列分析

2017年10月—2019年5月,本实验室从广东、四川、河北、山东、安徽、辽宁等广大养鹅地区采集了67份典型雏鹅痛风样品进行了实验室检测以及病原的分离鉴定,检测结果表明：所有样品中均检测到了鹅星状病毒,并且约有94.03%的样品为两个不同种的鹅星状病毒混合感染。病原分离结果表明：鹅星状病毒FLX株的变异株病毒（命名为SCCD）可以在鹅胚上稳定增殖,并且能稳定致死10日龄鹅胚,致病力较鹅星状病毒FLX增强;新型鹅星状病毒株（命名为SDPD）不能在鹅胚和SPF鸡胚上稳定增殖。病毒的基因组测序结果表明：鹅星状病毒FLX株与鹅星状病毒FLX的变异株病毒SCCD株、新型鹅星状病毒SDPD株全基因组核苷酸相似性分别为89.7%、58.1%,ORF1b基因氨基酸相似性分别为98.4%、61.0%,ORF2基因氨基酸相似性分别为81.0%、42.5%。将新分离的鹅星状病毒株接种1日龄健康雏鹅,结果表明,鹅星状病毒SCCD株和鹅星状病毒SDPD株虽然能使雏鹅发生死亡,引起肝炎、肾肿胀和增重减少等变化,但雏鹅均无典型痛风（脏器尿酸盐沉积）表现,而两种鹅星状病毒株混合攻毒能使44%的雏鹅发生典型痛风,并与临床发病症状一致。因此,临床上引起雏鹅痛风的病原可能是两种鹅星状病毒,即新型鹅星状病毒和鹅星状病毒FLX的变异株病毒。     

星状病毒鸽群分离株的全基因分析

为分析鸽星状病毒中国分离株的特性,采用高通量测序方法,测定从山东省青岛市某活禽市场分离的鸽星状病毒基因组,并对其进行特性分析与比较基因组研究。结果显示:该病毒全基因大小为6 872 bp,具有与其他星状病毒相似的结构和基因顺序;5'端有一段非编码区,3'端为聚A尾。与15株代表性毒株的全基因组和衣壳蛋白氨基酸序列同源性分析证实,该病毒与挪威2003年分离的鸽星状病毒同源性高,属于GroupⅠ基因群禽星状病毒,而与我国2011年报道的鸽星状病毒存在差异。分析结果表明,我国鸽群中的星状病毒较为多样。     

利用宏病毒组学对鹅痛风病原的鉴定

为确定2020年江苏盐城一鹅场雏鹅痛风的病原,试验对病料样品进行宏病毒组测序,通过比对分析原始数据发现疑似病原;通过从头组装获得其全基因组序列,并进行相似性比对和遗传进化分析;通过对疑似病毒的分离、鉴定和动物回归试验进行验证。宏病毒组学测序结果显示,在获得的全部599 733条原始读长(reads)中,病毒reads有278 593条,其中鹅星状病毒序列占95%,未发现其他疑似病毒序列;经从头组装获得了一条完整的鹅星状病毒全基因组序列,命名为YC20,该病毒基因组全长7 137 nt,GenBank登录号为:MW536497,基因组结构及特征与其他星状病毒相同。全基因组序列相似性比对结果显示,YC20与新型鹅星状病毒SD01相似性最高,达98.2%;遗传进化分析结果显示,YC20与其他新型鹅星状病毒在同一分支,属于新型鹅星状病毒。禽胚分离结果显示,用鹅胚进行病原分离时,前3代次未出现死亡,第5代次后,可对鹅胚100%致死,而用SPF鸡胚或SPF鸭胚分离病原时,均未出现病变或死亡,PCR检测亦为阴性;纯化的尿囊液经负染后,电镜下可见大小约25 nm的病毒粒子。雏鹅回归试验结果显示,YC20接种3日龄雏鹅后,第6~8天出现死亡高峰期,死亡率为58.3%,剖检死亡鹅可见心脏、肝脏表面覆盖一层白色包膜,膝关节有大量白色颗粒样沉淀,肾脏充血肿大。以上结果说明,该鹅场痛风的病原为新型鹅星状病毒。本研究将宏病毒组学与传统的病毒分离鉴定技术相结合,证实了鹅痛风的病原,对病原的鉴定和研究具有指导意义。     

犬瘟热病

1病原犬瘟热病毒(CDV)属于RNA病毒,大小为100～300nm,圆形体.该病毒可以在犬、雪貂和犊牛肾细胞以及鸡成纤维细胞中进行培养,在犬肾单层细胞培养中可生长繁殖,并形成多核体(合体细胞)及核内、胞浆内包涵体及星状细胞,还可以用鸡胚培养,接种1～2d,在绒毛尿囊膜上可以见到水肿,外胚层细胞的增生和部分坏死.     

犬瘟热病

1病原 犬瘟热病毒（CDV）属于RNA病毒，大小为100～300nm，圆形体。该病毒可以在犬、雪貂和犊牛肾细胞以及鸡成纤维细胞中进行培养，在犬肾单层细胞培养中可生长繁殖，并形成多核体（合体细胞）及核内、胞浆内包涵体及星状细胞，还可以用鸡胚培养，接种1～2d，在绒毛尿囊膜上可以见到水肿，外胚层细胞的增生和部分坏死。     

江苏省某鸡场CAstV、CIAV和REV感染情况的调查及分析

为研究鸡星状病毒(Chicken-origin astrovirus,CAst V)、鸡传染性贫血病毒(Chickeninfectious anemia virus,CIAV)和禽网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)在江苏某鸡场的流行和混合感染情况,采集该鸡场1日龄雏鸡的脏器,应用PCR和RT-PCR检测CAst V、CIAV和REV的单独感染以及混合感染情况。结果显示:1日龄雏鸡CAst V、CIAV、REV单独检出率分别为45%、37.5%和0%,其中CAst V和CIAV双重感染率为25%。表明该鸡场CAst V阳性率较高,提示养禽企业需增强对该病毒的关注。     

新型鹅星状病毒的分离鉴定与全基因序列分析

为了解近年鹅星状病毒的流行情况,通过鹅胚接种、鹅胚半数致死量测定(ELD_(50))、RT-PCR检测和基因组序列测定等方法,从2019年山东某养鹅场雏鹅疑似星状病毒引起鹅内脏痛风病的病料中分离出1株新型鹅星状病毒,命名为AstV/Goose/SD776/2019。该分离株能引起鹅胚典型的临床症状,病毒无血凝活性,ELD_(50)为10~(-4.0)/0.2 mL,动物回归试验中死亡的雏鹅可以复制出与临床自然感染相似的病变。用RT-PCR对分离株全基因组序列分析结果显示,分离株的3个ORF和与新型鹅星状病毒毒株(JSHA、SD01、SDPY、GD)的核苷酸和氨基酸同源性较高(99.2%以上);与能导致雏鹅肠炎的鹅星状病毒(FLX)及其他种属禽源星状病毒同源性相对较低,遗传进化分析结果显示,分离株在进化树上与4株新型鹅星状病毒的亲缘关系接近,表明分离毒株为新型鹅星状病毒。     

猪星状病毒的分离鉴定及其致病性研究

猪星状病毒(porcine astrovirus,PAstV)感染猪后可引起腹泻、呕吐、脱水和生长迟缓等临床症状,对断奶前仔猪侵害尤为严重,对养猪业造成一定的经济损失。本研究对猪星状病毒广西流行株用PK-15细胞进行分离,用RT-nPCR、间接免疫荧光、电镜和免疫印迹分析进行鉴定并进行致病性试验,结果分离到2株具有细胞病变和致病性的猪星状病毒,为进一步研究猪星状病分子生物学、致病机制及构建发病动物模型等奠定了基础。     

一例鹅痛风病的诊断

为了探究河南省某鹅场患病鹅的发病原因,采集患病雏鹅病料进行小鹅瘟病毒和鹅星状病毒的PCR检测,通过序列的测定与比对,发现发病鹅为星状病毒感染,并未检测到小鹅瘟病毒,结合临床剖检病理变化,最终确诊导致痛风病的病原为鹅星状病毒。     

2024年监测中心第一季度禽病检测动态

2024年第一季度实验室共接收家禽临床送检样品1 480份,利用PCR或荧光定量PCR方法对家禽主要疫病病原进行检测,结果发现鸡病原以呼吸道疾病病原和免疫抑制性病原占绝对优势,其中位居前三位的是传染性法氏囊病毒（IBDV）、H9亚型禽流感病毒（AIV-H9）和鸡传染性支气管炎病毒（IBV）,阳性检出率分别为28.13%、22.92%和21.88%。鸭病原中鸭圆环病毒1型(DCV-1)占首位,阳性检出率为21.43%,其次为鸭新型呼肠孤病毒(D-REOV)和鸭肠炎病毒（DPV）,阳性检出率分别为19.05%和16.67%。鹅病原中番鸭呼肠孤病毒（MD-REOV）占居首位,阳性检出率为34.62%,其次为鹅星状病毒（GastV）、细小病毒（GPV）和鸭圆环病毒1型（DCV-1）,阳性检出率均为15.38%。     

鸡星状病毒、禽肾炎病毒和鸡传染性支气管炎病毒多重PCR检测方法的建立

为有效确定引起鸡痛风的病原，本试验建立了同时检测鸡星状病毒(CAstV)、禽肾炎病毒(ANV)和鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的多重PCR方法。针对IBV的N基因、CAstV和ANV的ORF-1b基因分别设计了3对特异性引物，通过优化退火温度等反应条件建立了多重PCR检测方法，并评估了该方法的特异性和敏感性，而后对临床痛风样本进行了检测。结果显示，多重PCR方法对3种病毒扩增产物的大小分别为1 600 bp(IBV)、794 bp(ANV)和350 bp(CAstV);该多重PCR检测禽马立克氏病毒、血清4型禽腺病毒、减蛋综合征病毒和J亚型禽白血病病毒均为阴性；病毒最低检测限IBV为1.96×10~2 copies/μL,ANV为2.10×10~2 copies/μL,CAstV为1.33×10~5copies/μL;多重PCR对临床病料的检测结果与单项PCR的检测结果一致。结果表明，本试验建立的多重PCR检测方法具有较好的特异性、敏感性和可靠性，为临床鸡痛风的诊断提供了准确、有效的技术手段。     

鹅星状病毒的研究进展

鹅星状病毒所引起的鹅痛风是一种传播范围广、致死率高的病毒性疾病。自2017年国内发现鹅痛风致死病例后，陆续在全国各个养鹅省份流行，不同省份之间株系差异较大，且存在新型鹅星状病毒和暂无特效药等因素，对养鹅业造成巨大的经济损失同时严重制约着养鹅业的发展。本文综述了鹅星状病毒的病原学特征、分子生物学特征、临床诊断特征和检测技术等方面的相关研究，以期为鹅星状病毒病的综合防控提供技术支撑。     

新型鹅星状病毒现地株的分离鉴定

为了解齐齐哈尔地区新型鹅星状病毒（Goose Astrovirus,GAstV）的流行情况,本试验采用从查哈阳农场某养殖场采集的疑似新型鹅星状病毒感染致死的雏鹅肝脾病料,进行病毒分离培养,对获得的病毒尿囊液进行RT-PCR检测、病毒半数致死量测定、血凝性检测及动物回归试验。结果表明：分离到的病毒株能使12日龄鹅胚在144 h内死亡;测定病毒的半数致死量（EID50）为10～3.5;血凝性检测未检测出血凝价;动物回归试验,可复制该病,致使5日龄雏鹅发病死亡;ORF1b基因R T-PCR扩增条带大约为210 bp,与目的条带大小相符;对其进行核苷酸序列比对,与在NCBI上已发表的新型鹅星状病毒核苷酸同源性高达99.64%。说明该分离株为新型鹅星状病毒毒株。     

鸡慢性呼吸道病

1 病原 引起鸡慢性呼吸道病的病原体,是一种介于病毒与细菌之间的微生物,叫败血霉形体,也称支原体、鸡毒霉浆体.以姬姆萨染色良好,革兰氏染色呈弱阴性.由于它没有僵硬的细胞壁,而有较韧的细胞膜,因此,它具有可塑性及良好的弹性,表现为多形性,一般呈球形(直径0.2～0.5μm),也可呈杆状、星状及丝状等.     

一株鹅星状病毒变异毒株的基因组特征与致病性分析

旨在研究引起雏鹅痛风的新型鹅星状病毒流行株特征。本试验从安徽省鹅星状病毒阳性雏鹅组织中进行病毒分离,并对分离的毒株进行全基因组测序,随后进行遗传进化分析。结果表明,病毒液接种9~11日龄鹅胚可成功分离到病毒,将其命名为GASTV-ZM株。IFA （indirect immunofluorescence assay）鉴定为阳性。基因组序列分析表明,ZM株鹅星状病毒基因组全长7 175 nt,ORF2基因核苷酸和氨基酸与2014—2020年间分离毒株的同源性分别为96.7%~98.9%和96.9%~99.0%,ORF2基因编码的氨基酸序列结果显示,3个氨基酸突变位点与以往存在显著差异,ZM株与2016年以来在我国流行的新型鹅星状病毒处于同一进化分支,与2020分离株HNSQ-6株和XT1株同源性较高。本研究为进一步研究该病毒的致病性和致病机理奠定基础。     

鸭的病毒性肝炎的防治

近年来北方养鸭业迅速发展,特别是山东肉鸭养殖量大增。鸭的病毒性肝炎病已成为危害养鸭业的主要疾病之一,笔者就本病的防治情况做一介绍。1病原鸭病毒性肝炎是由鸭H病毒性肝炎H病毒引起的,鸭H病毒性肝炎H病毒分为三个型,一型属于小RNA病毒科,呈球形或类球形,直径在20-40NM,无囊膜,无血凝性,可在鸭、鸡、鹅胚尿囊腔增殖。病毒抵抗力强，在自然环境中可较长时问存活。二型属于星状病毒，三型属于小RNA病毒。三种血清型之间无交叉保护作用。     

猪星状病毒ORF2基因的克隆及序列分析

参考GenBank上发表的猪星状病毒亚基因组序列,设计1对引物,对猪星状病毒广西流行株衣壳蛋白ORF2基因进行扩增,最终克隆得到PAstV/NNJG7株的衣壳蛋白完整序列.序列分析发现,其ORF2全长2 358 bp,编码786个氨基酸;与猪星状病毒Ⅰ型参考株核苷酸同源性最高,为77.3％～79.4％;在ORF1b和ORF2连接处有一段高度保守的序列,在ORF2 3'端有一段长83 bp非翻译序列及一个含43 bp高度保守的茎环样基序.本试验不仅丰富了猪星状病毒衣壳蛋白基因序列,也为基因疫苗和诊断试剂盒的研制提供材料及理论依据.