牛白血病病毒反转录酶的理化及生物学特性

采用外源法及内源法对牛血病病毒反转录酶（BLV－RT）的理化及生物学特性进行了探讨，结果表明：纯化的BLV－RT对病毒RNA和细胞RNA没有模板特异性；对细胞DNA和poly(dA).oligo(dT)12-18仅有较低的亲和性；以poly(A).oligo(dT)12-18为模板引物时酶活性最高。BLV－RT对热不稳定。酶作用的最适PH为8．3；在内源性反应中，Mn^ 和Mg^ 对酶活性均有促进作用；高浓度K^ 及放线菌素D对BLV－RT有抑制作用；无机磷酸直酶活性影响不大。     

牛白血病病毒反转录酶的理化及生物学特性

采用外源法及内源法对牛白血病病毒反转录酶(BLV-RT)的理化及生物学特性进行了探讨。结果表明;纯化的BLV-RT对病毒RNA和细胞RNA没有模板特异性;对细胞DNA和poly(dA)。oligo(dT)12-18仅有较低的亲和性;以poly(A)。oligo(dT)_(12-18)为模板引物时酶活性最高。BLV-RT对热不稳定;酶作用的最适pH为8.3;在内源性反应中。Mn~( )和Mg~( )对酶活性均有促进作用;高浓度K 及放线菌素D对BLV-RT有抑制作用;无机磷酸盐列酶活性影响不大。     

抽提条件对饲料酶活性测定的影响

用蒸馏水、0.02M磷酸缓冲液(pH7.4)、0.1M氯化钠,于40℃对酶制剂分别抽提1.5小时、0.5小时和0.5小时及用蒸馏水于4℃对酶制剂抽提12小时,分别对酶制剂中的纤维素C_x酶、酸性蛋白酶和淀粉酶活力测定.结果表明,用40℃蒸馏水抽提1.5小时,对纤维素C_x酶抽提效果最好;用4℃蒸馏水抽提12小时,对酸性蛋白酶效果最佳;而用40℃0.02M磷酸缓冲液(pH7.4)抽提0.5小时对淀粉酶的抽提效果则优于其他3种方法.     

用于ELISA的牛白血病病毒抗原的制备

人工感染牛白血病病毒(BLV)的绵羊血清IgG与溴化氰活化的Sepharose4B偶联,制成免疫吸附柱Ⅰ:用兔抗牛血清IgG与之偶联,制成免疫吸附柱Ⅱ.将BLV粗提抗原经柱Ⅰ和柱Ⅱ亲和层析后获得无色透明抗原。该抗经AGID试验表明具有gp和P抗原活性,回收率分别为38.8％和51.8％;经SDS-PAGE分析表明,含有5种蛋白组分,分子量分别为15、24、64、70和80K道尔顿;经薄层扫描,测得5种组成的百分含量之和为72.08。将提纯抗原同提纯各阶段不同纯度的抗原同时进行ELISA测定,结果以提纯抗原最理想,本底很浅,工作浓度仅为5μg/ml。     

大肠杆菌pSLM_(004)质粒的酶切分析及其肠毒素ST_Ⅰ基因探针的制备

利用硷变性及羟基磷灰石柱层析法提纯了大肠杆菌pSLM004质粒,经酶切分析证实了耐热肠毒素(STⅠ)基因片段在pSLM004中的定位,并成功地分离回收了STⅠ基因片段;采用随机引物法对STⅠ基因片段进行了α-32P标记,成功地制备了STⅠ基因探针,菌落杂交效果良好。     

鹅卵黄抗体IgY的提纯及其酶标抗体的制备

本试验采用辛酸去脂、饱和硫酸铵溶液盐析法提纯鹅卵黄抗体IgY,采用SDS-PAGE方法分析其纯度;用纯化后的IgY免疫试验兔,收集血清,测定血清抗体效价;采用辛酸-硫酸铵法结合Protein G树脂亲和层析法纯化免血清IgG,用改良的高碘酸钠法进行辣根过氧化物酶标记,直接ELISA法测定标记物效价.结果表明,提纯的鹅卵黄IgY浓度为11.5 mg/mL,纯度约为92％;血清琼脂扩散抗体效价为1∶32;Western Blotting试验证明,兔血清中含有抗鹅卵黄抗体IgY重链及轻链的特异性抗体;直接ELISA法测得标记物效价为1:1 100.     

酶制剂在鱼虾饲料中的应用研究

现在酶制剂已被广泛应用于畜禽日粮中 ,但在鱼虾饲料中的应用却较少 ,本文就酶制剂在鱼虾饲料中的应用作一简述。1　酶的种类及作用特点世界上已发现的酶有 1 70 0多种 ,生产的酶类已达 30 0多种 ,饲料用酶有 2 0多种 ,主要有纤维素酶 (C1酶、CX酶、β -葡萄糖苷酶 )、β -葡聚糖酶、果糖酶、淀粉酶 (α -淀粉酶、糖化酶 )、蛋白酶(中性蛋白酶、酸性蛋白酶 )、果胶酶、植酸酶。1 1　纤维素酶　有C1酶和CX酶。C1酶对纤维素起作用 ,能破坏纤维素的结晶结构 ,起到水化作用 ,将形成结晶结构的纤维链裂开 ,使长链分子的末端部位游离。CX酶作…     

家蚕的金属结合蛋白质:卵黄素和卵特异蛋白质

家蚕卵的特征是能够大量积累锌,为探明包括锌在内的一些金属,是否以与蛋白结合的形式而存在,我们用原子吸收/火焰分光光度法测定了家蚕三种卵黄蛋白即30kDa蛋白质、卵黄素和卵特异蛋白中的主要六种金属(Zn、Ca、Mg、Fe、Cu和Mn)的含量.卵黄蛋白从成熟的家蚕卵中,通过DEAE—纤维素柱层析法和高性能液相层析法提纯.在提纯的30kDa蛋白质中没有发现金属,而卵黄素含有Zn\Ca和Mg其摩尔比率为2～     

应用碱性抽提法和羟基磷灰石柱层析法提纯质粒DNA

用碱性抽提法和羟基磷灰石柱层析法,加以改进,总结出一套简便易行、低花费的质粒提纯方法。此法适用于一般条件试验室,可进行质粒的批量制备,所提纯质粒经限制性内切酶消解和转化试验,其产量(900μg/500 ml)、纯度和生物学活性均可满足重组DNA的需要。     

中华蜜蜂工蜂碱性磷酸酶的纯化及部分性质研究

以中华蜜蜂的工蜂成体为提酶材料,经正丁醇提取、硫酸铵分级沉淀,0.1 5%NaCl溶液透析,得粗酶液.用Sephadex G-150葡聚糖层析柱纯化粗酶,获得提纯的碱性磷酸酶,提纯倍数为16.79,比活力达到135.85 U/mg.以对硝基苯磷酸二钠(PNPP)为底物,测定提纯后的碱性磷酸酶的理化性质.结果表明:该酶的最适温度为45℃,最适pH值为8.6,米氏常数(Km值)为0.97×10-3mol/L.甲醛、甲醇、乙醇和乙二醇对碱性磷酸酶均有抑制作用.     

ZL_(8901)酶制剂提高肉鸡性能的研究(摘要)

应用ZL8901饲用酶制剂对1288只伊莎明星(ISA VEDETTE)肉用仔鸡分两期重复试验,7或8周龄结束,试验组比对照组体增重提高10.23-18.38％(p<0.01)、饲料利用效率提高:8.52-8.30％(p< 0.01)、成活率提高4.75-6.56％(p<0.05),体重整齐度提高5-7％(p<0.01)、用于预防和治疗的药品费平均减少0.29-0.40元/只、肉质测定屠宰率提高6.39％,胸肌和腿肌含水率呈降低趋势。核算表明平均新增盈利1.17-1.87元/只、投入1元新增收入5.80-7.06元。ZL8901酶制剂酶系全,酶活力     

柞蚕蛹溶菌酶的诱导与提取

本文报道热空气、大肠杆菌K_(12)D_(31)诱导柞蚕蛹(Antheraea pernyi)血淋巴溶菌酶活力提高的最适条件以及从柞蚕蛹免疫血淋巴中提取溶菌酶.以Sephadex G-50和CM-Sepharose柱层析法从柞蚕蛹免疫血淋巴中提取溶菌酶,并首次获得柞蚕蛹溶菌酶结晶,溶菌酶制剂比活力达到57353单位/mg蛋白,提高了257倍,总活力回收79.2%.首次应用选择性热变性,等电点沉淀、DEAE-纤维素离子交换层析、包被甲壳素-纤维素亲和层析等分离技术从柞蚕蛹免疫血淋巴中提取溶菌酶.溶菌酸制剂比活力达25 375单位/mg蛋白,提高了140倍,活力回收51%.用15%、pH4.0聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和3.0-100%.pH6.7-8.9SDS-PAGE鉴定了酶制剂的纯度,并测定了柞蚕蛹溶菌酶的部分氨基酸组成.     

促肾上腺皮质激素对母猪肝中葡萄糖代谢相关酶转录表达及活性的影响

旨在研究促肾上腺皮质激素(adrenocorticotropic hormone,ACTH)对母猪肝中葡萄糖代谢相关酶转录表达及活性的影响,以探讨应激状态下肝调节血糖水平的分子机制。本研究选取9头健康经产断奶苏淮母猪,随机分成处理组(5头)和对照组(4头)。对处理组母猪注射外源ACTH,对照组母猪注射生理盐水;每天处理3次,连续7d。试验期间每天采集母猪血液;试验结束后,取母猪肝组织。利用放射免疫分析方法测定血液皮质醇浓度,利用生化分析仪测定血糖浓度,通过荧光定量PCR检测葡萄糖代谢相关酶和糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)的转录表达,利用分光光度法检测葡萄糖代谢相关酶的酶活性。结果表明,ACTH处理组母猪血液中皮质醇及葡萄糖水平均显著高于对照组(P0.05)。ACTH处理对母猪肝中丙酮酸羧化酶(PC)、果糖-1,6-二磷酸酶(FBP)、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶2(PCK2)、磷酸果糖激酶(PFKL)、丙酮酸激酶(PKLR)、己糖激酶1(HK1)、己糖激酶3(HK3)、糖原合成酶1(GYS1)、糖原磷酸化酶(PYGL)及6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PD)的mRNA表达无显著影响(P0.05)。ACTH处理显著上调母猪肝中葡萄糖-6-磷酸酶(G6PC)、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶1(PCK1)和己糖激酶2(HK2)的mRNA表达水平(P0.05)。此外,ACTH处理显著上调母猪肝中葡萄糖-6-磷酸酶(G6PC)的酶活性(P0.05),显著下调磷酸果糖激酶(PFKL)的酶活性(P0.05)。与对照组相比,ACTH处理组GR mRNA表达水平呈上调趋势,但组间差异不显著(P0.05)。结果提示,ACTH处理上调母猪血糖水平,不仅通过促进肝中糖异生关键酶G6PC、PCK1和HK2的转录表达及增强G6PC的活性增加糖异生反应,还通过降低糖酵解关键酶PFKL的活性抑制糖酵解反应。此外,ACTH处理未影响肝中GR的转录表达。     

纤维素组合酶在不同品种生长猪饲粮中的适宜添加量

本试验利用体外消化试验筛选出3种纤维素酶的最优组合,采用消化代谢试验来确定所筛选的纤维素组合酶在2个品种猪纤维性饲粮中的适宜添加量.试验以酸性洗涤纤维(ADF)为评定指标,以地瓜蔓为粗纤维来源,配制3.8％ ADF和5.8％ ADF的2种纤维水平的饲粮.分别选取5头体重[(25±1) kg]相近、健康去势的烟台黑猪和杜×鲁烟白杂交猪,于回肠末端安装T型瘘管,设5个最优纤维素组合酶添加量:0(对照组)、0.05％、0.10％、0.15％、0.20％,采用5×5拉丁方设计进行消化代谢试验.结果表明:在5.8％ ADF水平饲粮中,与对照组相比,纤维素组合酶添加量分别为0.10％和0.15％时,对2个品种猪养分消化率以及氮平衡的影响达到了显著水平(P＜0.05),但在3.8％ ADF水平饲粮中差异不显著(P＞0.05).在5.8％ ADF水平饲粮中,在纤维素组合酶添加量相同的情况下,对于必需氨基酸,蛋氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸的回肠表观消化率烟台黑猪极显著高于杜×鲁烟白杂交猪(P＜0.01);对于非必需氨基酸,除丝氨酸和甘氨酸回肠表观消化率差异不显著(P＞0.05)外,其他氨基酸回肠表观消化率差异极显著(P＜0.01).结果提示,在5.8％ ADF水平饲粮中,烟台黑猪纤维素组合酶适宜添加量为0.10％,杜×鲁烟白杂交猪为0.15％.     

饲粮中添加不同组合非淀粉多糖酶制剂对1～21日龄肉仔鸡小肠黏膜结构及其养分表观利用率的影响

本文旨在研究小麦-豆粕型饲粮中添加不同组合的非淀粉多糖酶制剂对1～21日龄肉仔鸡生产性能、养分表观利用率及小肠黏膜形态结构的影响.选用1日龄AA肉鸡360羽,随机分为6组,每组4个重复,每个重复15只鸡.对照组饲喂基础饲粮、低能对照组饲喂低能饲粮,4个酶制剂添加组饲喂低能饲粮+0.01%酶制剂(酶制剂1组:木聚糖酶,酶制剂2组:木聚糖酶+β-葡聚糖酶,酶制剂3组:木聚糖酶+β-葡聚糖酶+β-甘露聚糖酶,酶制剂4组:木聚糖酶+β-葡聚糖酶+β-甘露聚糖酶+纤维素酶),饲养试验时间21 d.结果显示:1)酶制剂2组、酶制剂3组和酶制剂4组3种酶制剂添加组肉仔鸡的日增重和饲料表观利用率比低能对照组显著提高(P<0.05),其中酶制剂3组和酶制剂4组肉仔鸡的日增重和饲料表观利用率与正常对照组差异不显著(P>0.05).2)酶制剂3组、酶制剂4组肉仔鸡的蛋白质和能量表观利用率显著高于低能对照组(P<0.05),与正常对照组无显著差异(P>0.05).3)添加酶制剂后能使21日龄肉仔鸡小肠黏膜厚度和绒毛长度增加,隐窝深度降低,其中酶制剂4组对空肠黏膜形态结构有较好改善作用,酶制剂3组对回肠黏膜形态结构效果最好(P<0.05),各酶制剂组对十二指肠黏膜形态结构无显著影响(P>0.05).这表明酶制剂3组和酶制剂4组能提高能量表观利用率,改善低能饲粮下肉仔鸡的小肠黏膜形态结构,使肉仔鸡的生产性能提高到正常饲养水平.     

纤维素复合酶对羔羊消化道组织结构的影响

为了探明纤维素复合酶提高羔羊饲料消化率的消化道组织学基础,选择刚出生且体重相近的波尔山羊公羔30只(20日龄开始自由采食优质苜蓿干草, 80日龄断奶)分为对照组和试验组(添加0.2%酶制剂),分别在2、3和4月龄每组各选体重相近的3只羔羊屠宰.结果表明,瘤胃乳头长度、宽度和单位面积瘤胃乳头表面积随月龄增加而增加,而单位面积乳头数随着月龄的增加而减少(P ＜ 0.01).酶制剂提高3、4月龄羔羊瘤胃乳头长度(P ＜ 0.01)、宽度(P ＞ 0.05)和单位面积瘤胃乳头表面积(P ＜ 0.01),减少单位面积乳头数(P ＜ 0.01).显著提高3月龄十二指肠肠绒毛的长度(P ＜ 0.05).在3、4月龄,酶制剂有增加小肠隐窝深度和黏膜厚度的趋势,但未达到显著水平(P ＞ 0.05).     

巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)地理株研究Ⅲ.11株巨型艾美耳球虫的同工酶分析

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳(PAGE)技术,对11株Ei meria maxima和1株E.tenella的孢子化卵囊,进行了乳酸脱氢酶(LDH)、葡萄糖磷酸异构酶(GPI)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)、葡萄糖磷酸变位酶(PGM)和苹果酸脱氢酶(MDH)的同工酶分析。试验结果显示,E.maxima和E.tenella在LDH、GPI、G6PD、PGM和MDH的酶谱上有明显差异,而在11株E.maxima之间无差异,表明E.maxima的酶变异相当保守。     

表达牛流行热病毒G基因的牛传染性鼻气管炎病毒转移载体的构建

本试验将克隆到 p BLG中的牛流行热病毒 (BEFV)糖蛋白 G基因亚克隆到含有 CMV启动子和 Poly(A)信号尾的 p CR3- Uni载体上 ,获得 p CR3- G重组体 ,酶切后将含有 CMV、G基因和 Poly(A)的目的片段 (约 3.6 kb)插入通用转移载体 pd TK- CMB中 ,获得 pd TK- CMB- G重组体 ;再将含 SV4 0启动子的 L ac Z报告基因也亚克隆到该载体中获得表达 BEFV G基因的pd TK- L ac Z- G转移载体 ,为开发 BEFV/IBRV二联基因工程疫苗奠定了基础     

青贮饲料专用酶的研究

用作青贮的青绿秸秆富含纤维素、半纤维素等物质。在青贮草料中添加纤维素酶(FPA)、半纤维素酶、木聚糖酶等植物细胞崩解酶,不仅可有效地将纤维素等非淀粉多糖(NSP)分解为低聚糖、葡萄糖等物质供乳酸菌等细菌利用,而更重要的是随着植物细胞壁的崩解细胞内含物如淀粉、可溶性糖类(WSC)、蛋白质及油脂等一类物质的溢出,极大地提高了青贮料的营养价值。国外对这类酶制剂的研究已有较大的进展,如芬兰的Finnfeed公司成功研制出Glasszyme、Cornzyme等酶制剂用于青贮饲料。 我们根据青贮秸秆的青贮特点,通过对产酶菌种的诱变选育和发酵条件的优化,研制出一种含纤维素酶和木聚糖酶活力较高的酶制剂,经使用其效果达到国外同类产品水平。     

α-半乳糖苷酶对AA肉鸡生长性能和血清生化指标的影响

选用1日龄AA肉仔鸡360只,随机分为5个处理,在基础日粮中分别添加0、0.05、0.10、0.15、0.20 g/kg α-半乳糖苷酶制剂,每个处理6个重复,每个重复12只鸡,试验期6周,测定21、42 d的平均日增体质量、日采食量和料重比及血清葡萄糖、总蛋白、白蛋白、总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇含量和42d肠道微生物菌群数量.结果显示,0.i0、0.15、0.20 g/kg α-半乳糖苷酶组显著提高了21、42日龄日增体质量2.56％～4.54％ (P＜0.05),降低42日龄的料重比1.91％～4.59％ (P＜o.05).α-半乳糖苷酶可以使血清中总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇含量下降,总蛋白、高密度脂蛋白胆固醇、白蛋白含量升高,显著增加AA肉鸡肠道有益菌群的数量(P＜0.05)并且使有害菌群的数量明显降低(P＜0.05).结果表明,α-半乳糖苷酶有利于提高AA肉鸡生长性能,以0.1～0.2 g/kgα-半乳糖苷酶添加水平较好.