防御素基因在乌金猪与约大乌猪组织中的表达及东亚飞蝗抗菌活性物质对防御素基因表达的调节作用

本试验旨在检测β防御素-1(p BD-1)、β防御素-2(p BD-2)和β防御素-3(p BD-3)基因在乌金猪和具有乌金猪血缘的约大乌猪不同组织中的表达,并探讨东亚飞蝗抗菌活性物质(LAAS)对猪胎儿皮肤成纤维细胞(PFSF)免疫应激参数和防御素(p BDs)基因表达的调节作用。采用实时荧光定量PCR方法检测2月龄乌金猪与约大乌猪心脏、肝脏、肺脏、肾脏、空肠、回肠、十二指肠、皮肤、肌肉、胰腺、睾丸或卵巢这12种组织中p BD-1、p BD-2和p BD-3基因的表达差异;采用培养至第4~5代的PFSF,通过脂多糖(LPS)诱导建立免疫应激模型,在DMEM/F12培养液中添加不同浓度(0、75、150、300、600和1 200μg/m L)的LAAS,考察LAAS对PFSF免疫应激参数和p BD-1、p BD-2、p BD-3基因表达的影响。结果表明:1)乌金猪血清溶菌酶(LSZ)活性、免疫球蛋白G(Ig G)含量显著高于约大乌猪(P0.05),血清一氧化氮(NO)含量极显著低于约大乌猪(P0.01)。2)约大乌猪大多数组织中p BD-1、p BD-2和p BD-3基因的表达量高于乌金猪;2个品种猪的p BD-1和p BD-3基因均在皮肤和卵巢中表达量较高,p BD-2基因在肝脏和肾脏中表达量较高。3)300μg/m L LAAS极显著降低了培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性(P0.01);LAAS极显著增加了培养液中NO含量(除75μg/m L组正常细胞外)(P0.01),正常细胞和应激细胞均在LAAS浓度为600μg/m L时达到最高;LAAS浓度为0、75和150μg/m L时应激细胞一氧化氮合酶(NOS)活性显著或极显著高于正常细胞(P0.05或P0.01);添加1 200μg/m L LAAS可极显著降低培养液中的LSZ活性(P0.01),LAAS浓度为150、300、600和1 200μg/m L时应激细胞与正常细胞中LSZ活性差异显著或极显著(P0.05或P0.01)。4)应激细胞p BD-1、p BD-2和p BD-3基因的表达量均高于正常细胞;当LAAS浓度为150μg/m L时,p BD-1、p BD-2和p BD-3基因的表达量最高。结果提示,乌金猪和约大乌猪防御素基因的表达存在明显的品种差异性和组织特异性,适宜浓度的LAAS能够降低PFSF中LDH活性,提高NO含量及NOS、LSZ活性,上调应激细胞与正常细胞防御素的表达量。     

热应激对猪PBMC中NOD样受体及炎性因子mRNA转录水平的影响

NOD样受体是重要的天然免疫识别受体,其与革兰氏阳性菌的肽多糖等配体结合后,能够诱导多种炎性因子的表达,参与多种疫病的调控。为探究NOD样受体是否参与了热应激致病过程,本研究选取2月龄(15±1 kg)土杂猪12头,随机分为对照组和热应激组,并在热应激的第0、7 d、14 d和21 d的4个时间点采集其外周血,分离外周血单核细胞(PBMC)。荧光定量PCR检测了PBMCs中NOD1、NOD2及炎性因子TNF-α、IFN-γ、IL-6、IL-10和IL-1βmRNA的转录水平。结果显示,与对照组相比,NOD1和NOD2 mRNA转录水平在热应激的第7 d和14 d显著上调(p0.01),但在第21 d时显著下调(p0.05)。炎性因子TNF-α、IFN-γmRNA转录水平在热应激的第7 d、14 d、21 d显著上调(p0.05),IL-10 m RNA转录水平在热应激的第14 d、 21 d显著上调(p0.05),IL-1βm RNA转录水平在热应激的第7 d和14 d极显著上调(p0.01),在21 d时显著下调(p0.01)。IL-6mRNA转录水平在热应激的第7 d显著上调(p0.05),14 d差异不显著,21 d时极显著下调(p0.01)。研究表明热应激后短期内显著上调猪PBMC中NOD1、NOD2及炎性因子的转录水平,这为进一步阐述热应激的致病过程提供了依据。     

Klotho蛋白对氧化应激的影响及可能机制北大核心CSCD

Klotho是一种最近发现的抗衰老基因,它的缺失或突变会导致小鼠在出生3~4周后表现出衰老现象,相反,其过表达可增强小鼠的抗氧化能力,并延长小鼠寿命。目前研究表明,Klotho蛋白发挥抗氧化应激功能可能是通过激活叉头状转录因子O(Fox O)的转录活性、激活环磷酸腺苷(c AMP)信号通路、激活Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)-核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路来实现的。本文就Klotho的发现、结构特征、表达及其蛋白与氧化应激之间的关系进行综述,以期为畜牧生产中缓解动物氧化应激提供思路。     

Klotho蛋白对氧化应激的影响及可能机制

Klotho是一种最近发现的抗衰老基因,它的缺失或突变会导致小鼠在出生3~4周后表现出衰老现象,相反,其过表达可增强小鼠的抗氧化能力,并延长小鼠寿命。目前研究表明,Klotho蛋白发挥抗氧化应激功能可能是通过激活叉头状转录因子O(Fox O)的转录活性、激活环磷酸腺苷(c AMP)信号通路、激活Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)-核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路来实现的。本文就Klotho的发现、结构特征、表达及其蛋白与氧化应激之间的关系进行综述,以期为畜牧生产中缓解动物氧化应激提供思路。     

白藜芦醇通过激活去乙酰化酶1/腺苷一磷酸激活的蛋白激酶信号通路影响牛脂肪细胞凋亡

本试验旨在研究植物提取物白藜芦醇(RES)对牛皮下脂肪细胞凋亡率以及去乙酰化酶1(SIRT1)/腺苷一磷酸激活的蛋白激酶(AMPK)信号通路关键因子的mRNA和蛋白质表达量的影响。选取18月龄鲁西黄牛的皮下前体脂肪细胞,在细胞分化的第0天,更换为RES浓度分别为0(对照)、100、200和400μmol/L的培养液处理48 h,每组设3个重复。应用Hoechst33342染色检测细胞凋亡的形态学变化,流式细胞分析仪检测细胞凋亡率,荧光定量PCR(q PCR)和免疫印迹试验(Western-blot)分别检测SIRT1/AMPK信号通路上的关键因子SIRT1、A MPKα、叉头转录因子1(Fox O1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、促凋亡蛋白Bcl-2相关X蛋白(Bax)的mRNA和蛋白质表达量,并利用油红O染色鉴定脂肪细胞。结果表明,与对照组相比:不同浓度RES处理后的牛皮下脂肪细胞凋亡率均极显著增高(P0.01);不同浓度RES处理后的SIRT1、AMPKα、caspase-3、Bax的mRNA表达量均显著或极显著提高(P0.05或P0.01),Bcl-2的mRNA表达量极显著降低(P0.01);不同浓度RES处理后的SIRT1、AMPKα、caspase-3的蛋白质表达量均显著或极显著提高(P0.05或P0.01);200和400μmol/L RES处理后,Fox O1的mRNA和蛋白质表达量显著或极显著提高(P0.05或P0.01),Bax的蛋白质表达量极显著提高(P0.01),Bcl-2的蛋白质表达量极显著降低(P0.01)。100μmol/L RES处理后时,Fox O1的mRNA和蛋白质表达量以及Bcl-2、Bax的蛋白质表达量均与对照组差异不显著(P0.05)。由此可见,RES通过激活SIRT1/AM PK信号通路,同时激活通路下游的Fox O1,促进了牛皮下脂肪细胞的凋亡,为通过营养调控技术降低牛皮下脂肪沉积提供了一定的理论基础。     

L-精氨酸对猪胎儿皮肤成纤维细胞免疫应激参数和β防御素基因mRNA表达的影响

本试验旨在研究L-精氨酸(L-Arg)对猪胎儿皮肤成纤维细胞(PFSF)免疫应激参数和β防御素基因mRNA表达的影响。采用培养至4～5代的PFSF,通过脂多糖诱导建立免疫应激模型,在DMEM/F12培养液中添加不同浓度(0、35、70、140、280和560μg/mL)的L-Arg,培养24 h后,检测培养液一氧化氮(NO)含量及乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮合酶(NOS)和溶菌酶(LSZ)活性;采用实时定量PCR法检测PFSFβ防御素1(pBD-1)、β防御素2(pBD-2)和β防御素3(pBD-3)基因mRNA表达量。结果表明:1)L-Arg能够降低培养液LDH活性,正常细胞和应激细胞分别在L-Arg浓度为70和140μg/mL时达到最低;2)L-Arg能够极显著提高培养液NO含量(P<0.01),正常细胞和应激细胞均在L-Arg浓度为140μg/mL达到最高;3)L-Arg能够显著或极显著增加正常细胞培养液NOS活性(P<0.05或P<0.01),而对应激细胞无显著影响(P>0.05),L-Arg浓度为35和70μg/mL时,应激细胞显著或极显著高于正常细胞(P<0.05或P<0.01);4)560μg/mL L-Arg可显著提高培养液LSZ活性(P<0.05);5)70μg/mLL-Arg可极显著提高正常细胞和应激细胞pBD-1和pBD-2基因mRNA表达量(P<0.01),140μg/mL L-Arg可极显著提高正常细胞和应激细胞pBD-3基因mRNA表达量(P<0.01)。结果提示,适宜浓度的L-Arg能够降低培养液LDH活性,提高NO含量以及NOS和LSZ活性,上调应激细胞和正常细胞β防御素基因mRNA表达;本试验条件下,L-Arg的适宜添加浓度为70～140μg/mL。     

rfaE基因通过MAPKs/NF-κB信号通路对副猪嗜血杆菌LOS诱导猪肺泡巨噬细胞炎症反应中作用的研究

作者拟研究rfaE基因在副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)脂寡糖(LOS)刺激猪肺泡巨噬细胞(PAMs)信号通路分子的转录表达和MAPKs/NF-κB信号通路中的作用。提取HPS SC096株及其rfaE基因缺失株(ΔrfaE)和互补株(cΔrfaE)的LOS,分别用5和10μg HPS-LOS、ΔrfaE-LOS和cΔrfaE-LOS刺激PAMs,分别在不同时间点收集细胞,提取RNA和蛋白质。将提取的RNA反转录成cDNA,运用RT-PCR检测TLR4、MD2、NF-κB、MAP2 K2、ERK、P38和JNK的mRNA转录水平。测定提取蛋白质的浓度,利用Western blot方法检测NF-κB p65/phospho-NF-κB p65、IκBα、ERK1/2、JNK和p38/phospho-p38蛋白的表达量。结果表明用5和10μg HPS-LOS刺激细胞6、12和24h后,TLR4、MD2、MAP2K2、ERK、P38和JNK的mRNA转录水平均显著高于ΔrfaE-LOS刺激细胞后的以上转录因子的mRNA水平(P0.05),但NF-κB的mRNA转录水平无显著差异。另外,用5和10μg HPS-LOS刺激细胞6和12h后,IκBα蛋白的表达量显著低于ΔrfaE-LOS刺激细胞后的IκBα蛋白的表达量(P0.05),NF-κB p65和p38的磷酸化水平及ERK1/2和JNK蛋白的表达量显著高于ΔrfaE-LOS刺激细胞后NF-κB p65和p38的磷酸化水平及ERK1/2和JNK蛋白的表达量(P0.05)。同时cΔrfaE-LOS刺激PAMs后TLR4、MD2、MAP2 K2、ERK、P38和JNK的mRNA转录水平以及NF-κB p65和p38的磷酸化水平和IκBα、ERK1/2和JNK蛋白水平能够恢复到HPS-LOS水平。以上试验结果证实在HPS-LOS诱导的炎症反应中,缺失rfaE基因后通过阻断MAPKs/NF-κB信号通路以减轻炎症反应。     

冷、热应激对猪孤雌胚胎体外发育的影响

为研究持续不同时间的冷、热应激对猪孤雌胚胎体外发育的影响,本研究以猪孤雌胚胎为材料,采用免疫荧光染色、实时荧光定量PCR技术检测不同时间的冷(31℃)、热应激(41℃)处理对猪孤雌胚胎发育后囊胚发育率、细胞数、细胞凋亡率、自噬相关基因及细胞凋亡相关基因mRNA转录水平的影响。结果显示,热应激12h后囊胚发育率显著低于对照组(P0.05),冷应激18h后囊胚发育率显著低于对照组(P0.05),而冷应激组囊胚发育率高于热应激组。热应激12h和冷应激18h后均导致囊胚内细胞数显著低于对照组(P0.05),细胞凋亡率显著高于对照组(P0.05),且冷应激组的细胞凋亡率低于热应激组。冷、热应激组自噬相关蛋白LC3的表达均高于对照组;冷、热应激中自噬相关基因Atg6和Atg8的表达均极显著高于对照组(P0.01),Lamp2基因的表达均显著高于对照组(P0.05),热应激组中的Atg6和Atg8基因的表达高于冷应激组。通过检测细胞凋亡相关基因mRNA的转录水平发现,冷、热应激组中细胞凋亡相关基因Bak、Casp-3、Fas的表达均极显著高于对照组(P0.01),Bcl-xl基因的表达均显著低于对照组(P0.05)。综上,猪孤雌胚胎对冷应激(31℃)的耐受性比对热应激(41℃)强,且热应激可诱导体外培养的猪孤雌胚胎自噬及凋亡相关基因的表达,从而降低孤雌胚胎发育的能力。     

牡蛎粗多糖对脂多糖刺激仔猪NF-κB信号通路相关基因转录的影响

旨在初步探讨牡蛎粗多糖对免疫应激仔猪NF-κB信号通路相关基因的影响。选取30头28日龄左右的杜长大三元阉公仔猪,分为5个处理组,即空白对照组(Ⅰ)、免疫应激对照组(Ⅱ)以及牡蛎粗多糖低(Ⅲ)、中(Ⅳ)、高(Ⅴ)剂量组,每组6头猪。Ⅰ、Ⅱ组饲喂基础日粮,Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组分别饲喂含0.5%、0.8%、1.2%牡蛎粗多糖的基础日粮。试验饲养30d后,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组腹腔注射100μg·kg-1 LPS,Ⅰ组注射等量的生理盐水。各组于注射后3h剖检取肝、脾、肾上腺、淋巴结和胸腺等组织,检测TLR-4、p300和p50的相对转录水平。结果:(1)与Ⅰ组相比,Ⅱ组p300相对转录水平在淋巴结中极显著性降低,其他指标在各器官中极显著升高(P0.01)。Ⅲ组TLR-4在淋巴结中,p50在肾上腺中和p300在肝、肾上腺及淋巴结中的相对转录水平均极显著降低(P0.01);p50在肝、胸腺和脾中,p300在胸腺和脾中相对转录水平极显著升高(P0.01)。Ⅳ组TLR-4在淋巴结和脾中,p300在肝、肾上腺和淋巴结中相对转录水平显著降低(P0.05或P0.01);TLR-4在肝、肾上腺和胸腺中,p50在肝和胸腺中相对转录水平均显著升高(P0.05或P0.01)。Ⅴ组TLR-4在脾,p300在肝、淋巴结、胸腺和肾上腺中相对转录水平显著降低(P0.05或P0.01);TLR4在肝、肾上腺和淋巴结中,p50在肝、胸腺和肾上腺相对转录水平显著升高(P0.05或P0.01)。(2)与Ⅱ组相比,除Ⅴ组TLR-4在淋巴结中的差异不显著外,Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组TLR-4的相对转录水平在各器官中均显著降低(P0.05或P0.01);p50的相对转录水平在肾上腺、淋巴结和脾中极显著降低(P0.01),Ⅲ组p50的相对转录水平在肝中显著降低(P0.01),在胸腺中极显著升高(P0.01),Ⅴ组p50的相对转录水平在胸腺中差异极显著降低(P0.01);p300的相对转录水平在肝、肾上腺、胸腺和脾中极显著降低(P0.01);在淋巴结中,Ⅳ组p300的相对转录水平极显著升高(P0.01)。牡蛎粗多糖可以缓解免疫应激仔猪器官中NF-κB信号通路相关基因的转录水平。     

猪防御素基因pBD-2在大肠杆菌中的重组和融合表达

哺乳动物防御素是动物机体在抵御病原微生物的防御反应中产生的一类重要的抗菌肽物质,具有十分广泛的抗菌谱,在先天免疫上起重要作用。本研究根据已报道的pBD-2基因cDNA序列,合成了3条基因片段(1、2、3)。片段1、2和片段2、3各有15个碱基互补配对,PCR扩增延伸得到pBD-2基因,将pBD-2基因克隆至原核表达载体pGEX-KG,成功地在大肠杆菌BL21(DE3)中表达出pBD-2融合蛋白。pBD-2基因的成功表达为进一步研究其抗菌活性打下了基础。     

猪源β-防御素2和3的研究进展

防御素是一类阳离子抗菌肽,广泛存在于动物和植物体内。猪源β-防御素2和β-防御素3能抵抗猪体内病原微生物,并能调节机体免疫功能,对生殖发育也有一定的生理作用。猪源β-防御素2能促进仔猪生长,对猪红细胞毒性低,能在毕赤酵母中高效表达,其转基因猪也具有较好的抗病性能。因此,猪防御素具有潜在的应用价值。本文就猪源β-防御素2和β-防御素3在体内的表达分布和调控因素、参与调节的信号通路、在生殖发育和畜牧养殖方面的新功能及应用潜力进行综述。     

Oral administration of synthetic porcine beta‐defensin‐2 improves growth performance and cecal microbial flora and down‐regulates the expression of intestinal toll‐like receptor‐4 and inflammatory cytokines in weaned piglets challenged with enterotoxigenic Escherichia coli

Synthetic porcine beta‐defensin‐2 (pBD‐2) was tested as an alternative to antimicrobial growth‐promoters in pig production. Thirty 21‐day weaned piglets were challenged with enterotoxigenic Escherichia coli, and orally dosed with either sterile water (CON), pBD‐2 (BD) or neomycin sulphate (NS) twice daily for 21 days. pBD‐2 and NS led to higher growth performance, jejunum villus height and increased expression of insulin‐like growth factor‐I compared with the CON group (P < 0.05). Hemolytic E. coli scores from rectal swabs, and copy numbers of E. coli, Bacteroides fragilis and Streptococcus in the cecal digesta of the BD‐ or NS‐treated piglets were lower than those in the CON group (P < 0.05). Messenger RNA levels of toll‐like receptor 4, tumor necrosis factor‐α, interleukin (IL)‐1β, and IL‐8 in the jejunum mucosa of the BD and NS groups were lower than those in the CON group (P < 0.05). Copy numbers of Lactobacilli and Bifidobacteria in the cecal digesta of the BD group were higher than those of the CON and NS groups (P < 0.05). Therefore, pBD‐2 has antimicrobial activity in piglets, and it can improve growth performance, reduce inflammatory cytokine expression and affect intestinal morphological indices in the same way as probiotics. © 2015 Japanese Society of Animal Science     

谷氨酸对脂多糖刺激断奶仔猪肠道能量代谢的影响

本试验旨在研究谷氨酸(Glu)对脂多糖(LPS)刺激断奶仔猪肠道能量代谢的影响。选择24头断奶仔猪分为4个组,分别为对照组、LPS组、LPS+1.0%Glu组和LPS+2.0%Glu组,每组6个重复,每个重复1头猪。于试验第28天,试验组猪注射100μg/kg BW LPS,对照组注射等量的生理盐水,4 h后屠宰,取肠道样品待测。结果表明:1)与对照组相比,LPS刺激导致断奶仔猪空肠三磷酸腺苷(ATP)、腺苷酸池(TAN)含量和能荷(EC)显著降低(P0.05),一磷酸腺苷(AMP)/ATP值显著升高(P0.05);与LPS组相比,LPS+2.0%Glu组显著提高了空肠ATP、二磷酸腺苷(ADP)和TAN含量(P0.05)。2)与对照组相比,LPS刺激导致断奶仔猪回肠柠檬酸合成酶和α-酮戊二酸脱氢酶系活性极显著降低(P0.01),空肠α-酮戊二酸脱氢酶系活性有降低趋势(P=0.092);与LPS组相比,除LPS+1.0%Glu组回肠柠檬酸合成酶活性显著降低(P0.05)外,Glu对空肠和回肠三羧酸循环关键酶活性无显著影响(P0.05)。3)与对照组相比,LPS刺激导致空肠过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC1α)及回肠沉默信号调控因子1(Sirt1)和PGC1α的mRNA表达量极显著降低(P0.01);与LPS组相比,LPS+2.0%Glu组有提高空肠PGC1α(P=0.067)和回肠Sirt1(P=0.053)mRNA表达量的趋势,LPS+1.0%Glu组有提高回肠Sirt1 mRNA表达量的趋势(P=0.070)。由此可见,Glu可以改善LPS刺激导致的肠道能量损耗状态。     

SIRT1/FoxO1通路对奶山羊乳腺上皮细胞脂质合成的影响

为研究SIRT1/FoxO1通路在奶山羊乳腺脂质合成中的作用,本实验采用0(对照)、50、100、150μmol/L的SIRT1激动剂(RES)处理奶山羊乳腺上皮细胞,qRT-PCR检测脂质代谢相关基因的表达,检测细胞中甘油三酯含量,油红O染色法观察脂滴的积累情况。结果表明:100μmol/L RES处理组的SIRT1和FoxO1基因的相对mRNA表达量高于对照组(P<0.05),乳脂关键调控因子SREBP1和PPARγ表达量下降(P<0.05);SIRT1/FoxO1通路激活后,脂肪酸合酶FASN(P<0.01)、脂肪酸去饱和酶SCD1(P<0.01)和脂肪酸转运酶CD36(P<0.05)表达量均下降;而脂解相关基因HSL和ATGL的表达上调(P<0.05)。SIRT1/FoxO1激活后,细胞中甘油三酯含量显著降低(P<0.05),脂滴积累减少。综上可知,SIRT1/FoxO1通路负调控奶山羊乳腺上皮细胞脂质合成,为改善羊奶营养价值和风味提供基础资料。     

Porcine sirtuin 1 gene clone, expression pattern, and regulation by resveratrol

Sirtuin1 (Sirt1) is a NAD-dependent deacetylase that plays important roles in a variety of biological processes. In the current study, we examined tissue-specific and different expression pattern of porcine Sirt1 and the effect of resveratrol (RES) on expression of Sirt1 in porcine adipocytes. The full-length complementary DNA sequence of porcine Sirt1 was 4,024 bp (GenBank accession no: EU030283), with a 2,226-bp open reading frame encoding a 742-AA protein (a predicted molecular mass of 80.9 kDa; GenBank accession no. ABS29571). Comparison of the deduced AA sequence with the corresponding sequences of human, dog, cattle, and mouse Sirt1 showed 82 to 92% similarity. Furthermore, the porcine Sirt1 was highly expressed in porcine brain, to a lesser degree in spleen and white adipose tissue, and had low but detectable expression in liver. In subcutaneous adipose tissue and omental adipose tissue, expression of the porcine Sirt1 mRNA was greater in adult pigs than in young pigs (P < 0.01). In vitro, exposure of cultured adipocytes to 40 and 80 micro M RES for 24 h increased mRNA levels of porcine Sirt1 by 47.86% (P < 0.01) and 91.04% (P < 0.01), respectively. Accordingly, lipid accumulation and NEFA release were decreased (P < 0.05), respectively. After cultures were treated with RES for 48 h, the mRNA level of porcine Sirt1 was increased by 103.84% (P < 0.01) and 148.79% (P < 0.01), respectively. Lipid accumulation was decreased and NEFA release was increased (P < 0.05), respectively. These results provide information needed for manipulating Sirt1 expression in regulating fat deposition in pigs.     

壳寡糖对脂多糖诱导猪空肠上皮细胞氧化损伤的作用

本试验旨在通过脂多糖(LPS)诱导猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)来建立氧化应激模型,探讨壳寡糖(COS)的抗氧化作用效果。采用噻唑蓝(MTT)法检测LPS和COS对IPEC-J2作用12、24、48 h后细胞增殖活性的变化;选择适宜浓度LPS(1.0μg/m L)和COS(200μg/m L)作用于IPEC-J2,分为对照组、LPS组、COS组、LPS+COS组。采用Western Blot法检测核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶-1(HO-1)蛋白的表达;试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)的含量。结果表明:1.0μg/m L的LPS对IPEC-J2作用24 h,细胞增殖的抑制率为41.6%,为造模的最适浓度和作用时间;COS在一定浓度范围内对IPEC-J2有增殖作用,其浓度为200μg/m L时效果最佳,作用时间为24 h时,细胞增殖率达到126.3%。LPS+COS组较对照组的SOD、CAT活性和M DA含量差异不显著(P0.05),Nrf2和HO-1蛋白相对表达量显著升高(P0.05);LPS+COS组较LPS组的Nrf2蛋白相对表达量显著升高(P0.05),HO-1有升高趋势,但差异不显著(P0.05),SOD、CAT活性显著升高(P0.05),M DA含量显著降低(P0.05)。由此可见,LPS诱导IPEC-J2氧化应激,而COS可进一步促进Nrf2和HO-1蛋白的高表达,并提高抗氧化酶的活性,降低氧化产物含量,从而增强细胞对氧化应激的抵抗力,起到保护作用。     

冷、热应激对猪孤雌胚胎体外发育的影响

为研究持续不同时间的冷、热应激对猪孤雌胚胎体外发育的影响,本研究以猪孤雌胚胎为材料,采用免疫荧光染色、实时荧光定量PCR技术检测不同时间的冷（31℃）、热应激（41℃）处理对猪孤雌胚胎发育后囊胚发育率、细胞数、细胞凋亡率、自噬相关基因及细胞凋亡相关基因mRNA转录水平的影响。结果显示,热应激12 h后囊胚发育率显著低于对照组（P<0.05）,冷应激18 h后囊胚发育率显著低于对照组（P<0.05）,而冷应激组囊胚发育率高于热应激组。热应激12 h和冷应激18 h后均导致囊胚内细胞数显著低于对照组（P<0.05）,细胞凋亡率显著高于对照组（P<0.05）,且冷应激组的细胞凋亡率低于热应激组。冷、热应激组自噬相关蛋白LC3的表达均高于对照组;冷、热应激中自噬相关基因Atg6和Atg8的表达均极显著高于对照组（P<0.01）,Lamp2基因的表达均显著高于对照组（P<0.05）,热应激组中的Atg6和Atg8基因的表达高于冷应激组。通过检测细胞凋亡相关基因mRNA的转录水平发现,冷、热应激组中细胞凋亡相关基因Bak、Casp-3、Fas的表达均极显著高于对照组（P<0.01）,Bcl-xl基因的表达均显著低于对照组（P<0.05）。综上,猪孤雌胚胎对冷应激（31℃）的耐受性比对热应激（41℃）强,且热应激可诱导体外培养的猪孤雌胚胎自噬及凋亡相关基因的表达,从而降低孤雌胚胎发育的能力。     

β-葡聚糖对肉仔鸡生长性能、免疫功能和肠道微环境的影响

本试验旨在研究饲粮中添加β-葡聚糖对肉仔鸡生长性能、免疫功能和肠道微环境的影响。选取1日龄爱拔益加(AA)肉仔鸡672只,随机分为4个组,每组14个重复,每个重复12只鸡。对照组饲喂基础饲粮,试验组分别饲喂在基础饲粮上添加100、150和200 g/tβ-葡聚糖的试验饲粮。试验期为42 d。结果表明:1)150 g/t剂量组1~21日龄肉仔鸡体增重显著高于对照组(P0.05)。2)150 g/t剂量组肉仔鸡血清免疫球蛋白含量高于对照组(P0.05)。3)21日龄时,150 g/t剂量组肉仔鸡盲肠内乳酸菌数量显著高于对照组(P0.05),空肠和回肠内沙门氏菌数量显著低于对照组(P0.05);42日龄时,150和200 g/t剂量组肉仔鸡盲肠内沙门氏菌数量显著低于对照组和100 g/t剂量组(P0.05)。4)饲粮添加β-葡聚糖对42日龄肉仔鸡空肠绒毛高度与隐窝深度比值影响显著(P0.05)。由此可见,饲粮中添加适量的β-葡聚糖可提高肉仔鸡出栏重,改善肉仔鸡生长性能,增加盲肠内乳酸菌数量,减少空肠、回肠和盲肠内沙门氏菌数量。