广东鹅场大肠杆菌耐药状况及blaCTX-M基因的传播特征

为揭示广东地区鹅场动物和环境源大肠杆菌的耐药情况及超广谱β-内酰胺酶CTX-M的流行与传播特征,本研究从广东省江门及阳江市共10处鹅场采集鹅及环境样品199份,采用MALDI-TOF-MS法分离鉴定大肠杆菌。采用琼脂稀释法对菌株进行耐药性分析,采用PCR法检测头孢噻肟耐药菌中bla_CTX-M基因及其基因环境,采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）、接合转移和质粒复制子分型等方法探究bla_CTX-M基因的传播特征。结果显示,共获得196株大肠杆菌,对氨苄西林、多西环素、氟苯尼考和链霉素耐药率均超过50%,第三代头孢菌素耐药率为10%~25%,其中头孢噻肟耐药菌有49株（24.6%）。阳江地区大肠杆菌对受试药物的耐药率高于江门,且动物源高于环境源,尤其是头孢噻肟和头孢噻呋均存在显著差异（P<0.05）。头孢噻肟耐药菌中共检出19株携带bla_CTX-M基因,包括bla_CTX-M-55（n=17）、bla_CTX-M-27（n=1）和bla_CTX-M-65（n=1）,且bla_CTX-M基因阳性菌均可对5~11种药物耐药,呈现多重耐药的表型。bla_CTX-M-55基因环境均为ISEcp1-bla_CTX-M-55-orf477,且在ISEcp1与bla_CTX-M基因之间有3种长度的间隔序列;而bla_CTX-M-27和bla_CTX-M-65的基因环境均为ISEcp1-bla_CTX-M-27/65-IS903。19株bla_CTX-M基因阳性菌呈现10种PFGE谱型,存在一种主要流行的谱型（47.4%）,其包括多种来源菌株,暗示存在克隆传播现象。12株（63.2%）bla_CTX-M基因阳性大肠杆菌中bla_CTX-M基因转移成功,bla_CTX-M基因阳性接合子携带的复制子型为IncFⅡ（n=10）和IncHⅠ2（n=2）,且存在多西环素和氟苯尼考耐药表型与bla_CTX-M基因共转移现象。研究发现,阳江鹅场大肠杆菌耐药情况较为严重,bla_CTX-M基因存在一定的流行性且以bla_CTX-M-55亚型为主,bla_CTX-M基因阳性菌的克隆传播和质粒及插入序列ISEcp1介导的水平传播是导致该基因在鹅场大肠杆菌中扩散的主要原因,应引起高度重视。     

北京地区宠物犬源bla_(CTX-M)基因阳性肺炎克雷伯菌的耐药表型和分子特征研究

为研究宠物犬源bla_(CTX-M)基因阳性肺炎克雷伯菌的携带情况,同时了解宠物犬携带bla_(CTX-M)基因肺炎克雷伯菌的耐药表型和分子特征,本研究从355只宠物犬的鼻拭子和肛拭子中分离头孢噻肟耐药细菌,通过16S rDNA和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定细菌种属。对鉴定为肺炎克雷伯菌的菌株,运用PCR检测bla_(CTX-M)基因,药物敏感性试验测定bla_(CTX-M)基因阳性肺炎克雷伯菌的耐药表型,PFGE分型和全基因组测序技术分析bla_(CTX-M)基因阳性肺炎克雷伯菌的分子特征。PCR结果显示,共分离到7株bla_(CTX-M)基因阳性肺炎克雷伯菌,3株来自宠物肛拭子,4株来自宠物鼻拭子;药敏试验结果显示,7株菌均对头孢噻呋、头孢噻肟和阿莫西林-克拉维酸耐药,但对多黏菌素E、美罗培南和替加环素敏感。PFGE结果显示,其中3株细菌相似度为100%,而另外4株细菌相似度差异较大(30%)。全基因组结果显示,7株菌共有5个ST分型,bla_(CTX-M)基因分离的亚型为CTX-M-14型(n=5)和CTX-M-3型(n=2),同时这些菌株中还携带了其他β-内酰胺类、氨基糖苷类和氟喹诺酮类耐药基因。从本研究结果可以看出,目前宠物犬源bla_(CTX-M)基因阳性肺炎克雷伯菌的检出率较低,但其多重耐药性较严重,本研究分离的耐药基因bla_(CTX-M)、bla_(SHV)亚型与国内外流行有差异。目前宠物在抗生素的使用和监控上仍有不足,需进一步关注宠物细菌耐药性,为后续防控提供依据。     

食品动物源产CTX-M-14大肠杆菌传播分子机制的演变

从保存的2002-2009年分离的食品动物源大肠杆菌中,挑选16株bla_CTX-M-14阳性菌,用PCR方法检测超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)编码基因、PMQR耐药基因及其他重要抗生素耐药基因(rmtB和floR);通过脉冲场凝胶电泳(PFGE)及种族进化关系分析16株细菌的亲缘关系;通过接合转移试验、复制子分型和bla_CTX-M-14上下游插入元件的检测,分析产CTX-M-14大肠杆菌的传播分子机制。PCR检测结果表明,16株食品动物源产CTX-M-14大肠杆菌大多属于系统发育组A组,其次为B1和D组,没有B2组;PFGE分型结果表明,同一时间内不同动物间存在产CTX-M-14共生型大肠杆菌克隆的扩散传播,但养殖场内CTX-M-14主要是随质粒或其他元件进行水平传播;质粒复制子分型结果表明,携带bla_CTX-M-14的质粒属于IncK(3/14)、 IncF(5/14)、 IncHI2(1/14)、IncFIB 和 IncF(1/14)、IncHI1和IncN(2/14)、 IncI1(2/14)等,且随着时间推移,复制子的种类呈增多趋势。2002-2007年的菌株bla_CTX-M基因的上下游均检测到ISEcp1和IS903;但2009年菌株除了部分在上下游都可以检测到ISEcp1和IS903外,还有的只检测到上游的ISEcp1或下游的IS903;2002-2009年的菌均未检测到ISCR1。16株产CTX-M-14大肠杆菌除了携带其他ESBLs编码基因,如bla_CTX-M79和bla_TEM-135外,还携带其他重要抗生素耐药基因,如oqxA、floR、aac(6')-1b-cr及rmtB,而且2002-2009年大肠杆菌携带耐药基因的种类和数量逐年增多;接合转移试验发现,2002-2005年的菌株,bla_CTX-M-14往往发生单独转移,而2009年分离菌bla_CTX-M-14往往和floR或rmtB位于同一质粒上发生共同转移。这说明养殖场使用氨基糖苷类或氟苯尼考等任何一种抗生素,都可以筛选出产CTX-M-14大肠杆菌并促进其扩散,所以动物养殖过程中要慎用这些抗生素。     

鸡源大肠杆菌中耐药基因bla_(CTX-M)的水平转移研究

本研究对四川省规模化鸡场分离出的29株产ESBLs的大肠杆菌进行了bla_(CTX-M)耐药基因检测和接合试验,并对供体菌和得到的接合子进行了耐药表型及基因型比较。结果显示:29株产ESBLs的大肠杆菌中均检出bla_(CTX-M)基因,包括7个亚型;29株大肠杆菌中有11株接合成功,接合效率在在10~(-5)～10~(-3)之间;所有接合子均表现出头孢噻肟耐药性,11株接合子中有3株接合子为多重耐药菌;与供体菌相比,100%接合子的耐药谱变窄;所有接合子的bla_(CTX-M)基因型与其供体菌相同。试验表明:规模化鸡场中产ESBLs大肠杆菌中的耐药基因bla_(CTX-M)可通过接合的方式水平传播。     

山东地区鸡源大肠杆菌中超广谱β-内酰胺酶和磷霉素耐药基因的流行性研究

为了解山东地区鸡源大肠杆菌中超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和磷霉素耐药基因的流行性,测定了336株鸡源大肠杆菌(蛋鸡源153株,肉鸡源183株)对14种抗菌药物的敏感性,并检测了菌株中的ESBLs和磷霉素耐药基因。结果显示,336株菌对四环素类药物耐药率高于78.6%;对头孢菌素类、氟喹诺酮类和磷霉素的耐药率分别达38.4%～44.9%,26.8%～50.0%和28.7%。336株菌中,123株携带CTX-M型ESBLs,携带率最高的为bla_(CTX-M-9G )(24.1%),其次为bla_(CTX-M-1G)(15.5%),其中3.3%菌株同时携带bla_(CTX-M-9G)和bla_(CTX-M-1G);fosA3检出率为21.7%,未检出其他磷霉素耐药基因和ESBLs基因。此外,肉鸡源大肠杆菌中fosA3与ESBLs的检出率均显著高于蛋鸡源大肠杆菌(P0.01),且fosA3与ESBLs密切相关。本研究为山东地区鸡大肠杆菌病治疗的临床用药提供科学依据。     

食品动物源产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌的流行状况调查

本研究旨在了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠杆菌和CTX-M型耐药基因在食品动物的流行状况。对分离自养殖场的1273株大肠杆菌(健康动物源755株,患病动物源518株),采用双纸片协同试验筛选ESBLs阳性菌,并通过PCR法和基因测序鉴定阳性菌CTX-M型的基因型。1273株食品动物源大肠杆菌中筛选出产ESBLs阳性菌181株,阳性率为14.2%,其中患病动物阳性率比健康动物高,分别为19.9%和10.3%。151株(83.4%)产ESBLs大肠杆菌中检测到CTX-M型基因,占所有食品动物源大肠杆菌的11.8%,其中以CTX-M-9G为主,阳性率为79.5%(120/151),远高于CTX-M-1G的携带率25.8%(39/151),其中8株同时携带了CTX-M-1G和CTX-M-9G。产ESBLs的大肠杆菌在食品源动物中流行普遍,CTX-M是产ESBLs阳性菌中的主要流行基因型。     

屠宰肉沙门菌血清型鉴定及CTX-M型ESBLs的流行调查

本研究收集了2015—2017年分离自屠宰肉(鸡肉、猪肉和鸭肉)的110株沙门菌,采用MALDI-TOF/TOF质谱微生物鉴定系统和分子生物学方法进行菌株鉴定。采用二倍琼脂稀释法测定沙门菌对兽医临床常用17种抗生素的敏感性;玻片凝集法进行血清型鉴定;PCR及基因测序方法检测沙门菌CTX-M型ESBLs耐药基因的流行以及所携带的其他耐药基因。结果显示,110株沙门菌对一些常用药物,如四环素、萘啶酸以及氨苄西林耐药率高达75%以上,对第三代头孢菌素的耐药率为20%～30%,对氟喹诺酮类耐药率接近40%,对阿米卡星的耐药率较低为5%。110株沙门菌共鉴定出15种血清型,以鼠伤寒(24%)和印第安纳型(23%)为主,其次为里森(16%)、德尔卑(8%)、肠炎(8%)以及一些不常见血清型。110株沙门菌中共检出19株CTX-M型阳性菌株,共有4种不同亚型,优势CTX-M亚型为bla_(CTX-M-55)共12株、4株bla_(CTX-M-27)、2株bla_(CTX-M-65)、1株bla_(CTX-M-64),12株产CTX-M-55的沙门菌中携带有至少1种以上的PMQR基因,且都发生gyrA:S83F D87G+parC:T57S S80R多靶位突变。产CTX-M-55沙门菌对氟喹诺酮类药物表现出高水平耐药,且都携带有至少2种以上的PMQR基因,这种对头孢菌素和氟喹诺酮类耐药的菌株随着食物链传播和扩散,对公共卫生和人类健康都存在潜在风险。     

青岛地区鸡源bla_(NDM)与mcr-1耐药基因的流行性试验

为了解青岛地区鸡源大肠杆菌中碳青霉烯耐药基因bla_(NDM)与黏菌素耐药基因mcr-1流行情况。2018-2019年从青岛地区共采集195份鸡直肠拭子和盲肠内容物,通过选择性培养基筛选目的菌株和16S rRNA菌属鉴定。采用琼脂稀释法测定菌株对10种常见重要抗菌药物的敏感性,通过PCR检测bla_(NDM)与mcr耐药基因并测序。结果共计分离到186株大肠杆菌,其中鸡泄殖腔源98株,鸡盲肠源88株。药敏试验结果显示,分离菌株对阿莫西林、四环素、头孢氨苄耐药率均高于90%;多黏菌素81.2%、庆大霉素88.7%、氧氟沙星86.6%和头孢噻肟87.1%,呈现较高的耐药率;对替加环素(4.8%)则表现低水平耐药率。进一步分析发现,62.9%的测试菌株对8种以上药物耐药,表现多重耐药。耐药基因检测揭示了31.2%(n=58)大肠杆菌携带mcr-1基因,7.5%(n=14)携带bla_(NDM),包括1株bla_(NDM-1)、1株bla_(NDM-9)、12株bla_(NDM-5)。其中6株大肠杆菌株同时携带了bla_(NDM)和mcr-1,包括5株bla_(NDM-5)+mcr-1和1株bla_(NDM-9)+mcr-1。表明山东青岛地区鸡源大肠杆菌耐药菌检出率较高,多重耐药现象严重;且bla_(NDM)和mcr-1存在共同传播。     

家禽中bla_(NDM)阳性大肠杆菌的筛查和传播特征分析

对从山东某养鸡场分离的29株鸡源大肠杆菌和从广东某兽医站采集的182份死禽器官样品筛查bla_(NDM)阳性大肠杆菌,采用药敏试验检测产NDM(New Delhi metallo-β-lactamase)大肠杆菌对14种抗菌药物的敏感性,PCR方法检测菌株携带的其他耐药基因;通过脉冲场凝胶电泳(pulsed filed gel electrophoresis,PFGE)分析菌株间的亲缘关系,并进一步进行接合转移/转化试验、Southern blot杂交以及复制子分型分析bla_(NDM)质粒特征。结果显示:在29株山东鸡源大肠杆菌和182份广东病死禽样品中分别检测到9株和22株bla_(NDM)阳性大肠杆菌,bla_(NDM)基因亚型包括bla_(NDM-1、)bla_(NDM-5和)bla_(NDM-9);药敏试验结果显示bla_(NDM)阳性大肠杆菌对β-内酰胺类抗生素普遍耐药,对其他多类抗生素耐药率也较高;PFGE分型表明,bla_(NDM)阳性大肠杆菌亲缘关系总体较远,在小范围内存在克隆现象;Southern blot和接合转移试验结果表明,所有菌株bla_(NDM)基因定位于质粒上,且大部分携带bla_(NDM)基因的质粒可进行接合转移,质粒为IncB/O、IncY、IncX3、IncHI2和IncI1-HI2型质粒。结果表明:bla_(NDM)阳性大肠杆菌在广东和山东某些地区流行较为严重,且多重耐药现象严重;bla_(NDM)基因主要通过接合转移方式进行水平传播,也存在小范围的克隆传播。     

广西规模化猪场猪源大肠杆菌耐药表型和耐药基因检测及相关性分析

对广西规模化猪场分离的120株猪源大肠杆菌进行了头孢菌素类、氟喹诺酮类、氨基糖苷类、四环素类、大环内酯类和酰胺醇类药物耐药表型检测,并通过PCR检测菌株的β-内酰胺酶基因(bla_(TEM)、bla_(CTX-M))、氟喹诺酮类耐药基因(qnrA、oqxA、oqxB)、氨基糖苷类耐药基因(aac(6′)-Ib-cr)、大环内酯类耐药基因(ermB)和酰胺醇类耐药基因(floR)携带情况。耐药性检测结果显示,猪源大肠杆菌对头孢西丁、头孢他啶和阿米卡星具有高敏感率(74.0%),而耐药率最高为四环素类84.2%,酰胺醇类为70.8%,氟喹诺酮类为68.9%,氨基糖苷类为49.4%,大环内酯类为43.3%,最低为头孢菌素类31.4%。猪源大肠杆菌最低对1种药物耐药,最高对18种药物耐药,111株为多重耐药菌,以11耐(15株)、8耐(13株)和7耐(12株)为主,共有82种耐药谱型。耐药基因检测结果显示,8个耐药基因的阳性率均≥50.0%,其中阳性率最高为bla_(TEM)基因(91.7%),最低为aac(6′)-Ib-cr基因(50.0%),共存在53种基因组合类型,主要为bla_(TEM)+bla_(CTX-M)+qnrA+oqxA+oqxB+aac(6′)-Ib-cr+ermB+floR(14株,11.7%)和bla_(TEM)+bla_(CTX-M)+qnrA+oqxA+oqxB+ermB+floR(13株,10.8%)。耐药基因和耐药表型相关性分析结果显示,bla_(TEM)和bla_(CTX-M)与大肠杆菌对头孢氨苄耐药情况极显著相关(P0.01),bla_(CTX-M)与大肠杆菌对头孢拉啶和头孢曲松耐药情况极显著相关(P0.01),qnrA、oqxA、oqxB和aac(6′)-Ib-cr基因与大肠杆菌对诺氟沙星、氧氟沙星、恩诺沙星和环丙沙星耐药极显著相关(P0.01),aac(6′)-Ib-cr基因与大肠杆菌对庆大霉素和卡那霉素耐药极显著相关(P0.01),floR基因与大肠杆菌对氟苯尼考耐药情况极显著相关(P0.01)。本研究结果表明广西规模化猪场猪源大肠杆菌仅对极少数抗菌药物具有较高敏感率,多重耐药情况严重,具有丰富的耐药谱型,携带多种耐药基因且具有复杂的基因组合类型,所携带的耐药基因与其耐药表型具有一定的相关性。     

广西大肠杆菌对多种抗菌药物的耐药率及部分耐药基因检测

为研究广西地区大肠杆菌对常用抗菌药物的耐药情况及耐药基因检出情况,采用2倍微量稀释法对实验室分离鉴定后甘油保藏的113株大肠杆菌进行头孢曲松钠、氟苯尼考等13种常见抗菌药物的药敏试验;筛选出42株对3种或3种以上药物最小抑菌浓度(MIC)≥3 200μg/mL的大肠杆菌,扩增bla_(TEM)基因、bla_(CTX-M-9)基因、sul 2基因。结果显示,细菌对头孢噻呋钠、氟苯尼考、磺胺间甲氧嘧啶、阿莫西林、环丙沙星、头孢噻肟钠、头孢曲松钠、左旋氧氟沙星、加替沙星的耐药率较高,分别为99.1%、99.1%、93.5%、92.9%、91.1%、89.9%、73.4%、72.5%、69.4%;对头孢他啶、磷霉素、阿米卡星、美罗培南的耐药率为56.6%、50.5%、32.7%、3.5%。在42株菌中,bla_(TEM)基因、bla_(CTX-M-9)基因、sul 2基因阳性率为19.0%、38.1%、45.2%。表明广西地区大肠杆菌对常见抗菌药物耐药情况趋于严重,耐药率呈升高趋势,以产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠杆菌耐药基因及磺胺类sul 2耐药基因检出率偏高,为临床合理用药及兽医临床大肠杆菌耐药性研究提供理论依据。     

CTX-M-9亚群鸡大肠杆菌的遗传背景及毒力基因特性

探讨鸡大肠杆菌bla_(CTX-M-9)的遗传背景和毒力因子流行特征,为进一步研究bla_(CTX-M-9)与致病特性是否相关奠定基础。取近年来收集的17株产CTX-M-9族鸡大肠杆菌为研究对象,分别采用定位PCR、多重PCR等技术检测受试菌株的种系发育、MLST序列、质粒复制子特性、bla_(CTX-M-9)的上、下游基因环境及其携带的31种毒力基因。结果显示,bla_(CTX-M-9)的上游均含有ISEcpl,部分被IS26截断,下游最常见的是IS903。受试菌ST分型多样化,17株菌分别属于12种不同的ST型。受试菌携带3种以上复制子,最常见的是IncFII复制子,其次为IncFIB、IncK和IncI1型。受试菌分属于种系发育的D群(7株)、B1群(6株)和A群(4株),未检出强致病力的B2群菌株。受试菌均含有fimH、traT和feoB毒力基因,同时毒力基因检测率较高的还有sit A、iut A、iucC、iroN和iss基因。结果表明,ISEcpl和IS903转座子、IncF在bla_(CTX-M-9)快速散播过程中发挥了重要的作用,克隆传播仅发挥了次要的作用;产CTX-M-9族鸡大肠杆菌含有较多的毒力基因,具有一定的致病力。     

猪源CTX-M型超广谱β-内酰胺酶阳性大肠杆菌耐药基因的流行性分析

为了解福建地区猪源CTX-M阳性大肠杆菌耐药性、耐药基因流行情况以及耐药质粒特征,本研究采用琼脂二倍稀释法测定福建地区分离的67株猪源CTX-M型超广谱β-内酰胺酶阳性大肠杆菌对13种抗菌药物的敏感性,通过PCR检测其重要的耐药基因;通过供体菌与受体菌(C600)的接合转移试验,检测携带CTX-M耐药基因耐药质粒的水平转移情况,并测定接合子的药物敏感性变化以及耐药质粒的复制子类型。结果显示,分离菌株对头孢噻呋(100%)、头孢噻肟(100%)和四环素(94.0%,63/67)耐药性较高,对阿米卡星相对敏感,耐药菌株仅占7.5%(5/67)。耐药基因检测结果显示,53.7%(36/67)的分离株携带3个以上耐药基因,黏菌素耐药基因mcr-1(49.3%,33/67)和氟苯尼考耐药基因floR(37.3%,25/67)的检出率较高,氟喹诺酮类耐药基因aac(6')-Ib-cr和oqxAB、四环素类耐药基因tetA、酰胺醇类耐药基因cmlA和磷霉素耐药基因fosA3的检出率在10.4%～19.4%,氨基糖苷类耐药基因rmtB(4.5%,3/67)的检出率最低;其中以CTX-M+mcr-1+floR耐药基因的组成模式流行为主,检出率为25.4%(17/67)。通过接合转移试验共获得21株接合子,与受体菌C600相比,其对受试药物,如头孢噻呋、头孢噻肟和庆大霉素等的最小抑菌浓度(MIC)提高了2～32倍。复制子分型结果显示17株分离菌分型成功,4株分离菌未能分型,其中以IncF型质粒为主。福建地区猪源CTX-M阳性大肠杆菌对抗菌药物呈较为严重的耐药性,耐药基因的携带率普遍较高且以mcr-1和floR基因流行为主,耐药质粒以IncF型为主。本研究为福建地区猪源大肠杆菌耐药性的风险评估与抗菌药的合理应用提供科学依据。     

肉鸡养殖场中耐药相关基因散播情况的调查研究

为研究耐药相关基因在肉鸡养殖场中的分布流行情况,本研究以河北省肉鸡养殖场待出栏肉鸡为研究对象,采用随机抽样方式采集肉鸡泄殖腔拭子样品264份,粪便污染地面样品9份,进行bla_(NDM)、bla_(OXA)、bla_(CTX-M)、armA、fexA、cfr、mcr-1、qnrS 8种耐药基因和int1、ISCR1 2种与耐药基因散布密切相关基因的实时荧光定量PCR检测。结果显示,10种基因在273份样品中均有不同程度检出,检出率在4.03%～97.07%之间,检出率最低的为armA基因,最高的为int1基因;样品中有基因共存情况,并以3种耐药基因共存的情况最多,有4份样品存在1种耐药基因,6份样品未检出任何耐药基因,没有样品共存8种耐药基因;通过数据分析,共得到41种不同的耐药基因谱型,其中常见的耐药基因谱型为bla_(CTX-M)-fexA-mcr-1和bla_(OXA)-bla_(CTX-M)-fexA-cfr-mcr-1-qnrS;分析发现样品携带两种及以上耐药基因时,与耐药基因散布相关的int1和ISCR1元件检出率越高,耐药基因在样品中检出的种类越多;耐药基因bla_(OXA)、bla_(CTX-M)、fexA、cfr、mcr-1、qnrS与int1基因的共存有统计学意义(P0.05);耐药基因bla_(NDM)、bla_(OXA)、bla_(CTX-M)、fexA、cfr、qnrS与ISCR1元件的共存有统计学意义(P0.05)。本研究为畜牧兽医养殖行业耐药性监测工作提供了基于样品的新型实时荧光定量PCR检测方法,为有效预防耐药菌、耐药基因产生、控制耐药性的快速传播提供了可靠的数据支持。     

水禽源大肠杆菌耐药性及β-内酰胺类和喹诺酮类耐药基因检测分析

为了解广东珠三角地区水禽源大肠杆菌(E.coli)耐药性以及β-内酰胺类和喹诺酮类耐药基因的情况,本研究通过琼脂稀释法测定251株水禽源E.coli对β-内酰胺类和喹诺酮类药物的敏感性,采用PCR方法检测β-内酰胺类和喹诺酮类耐药基因的携带情况。药物敏感性试验结果显示,水禽源E.coli对氨苄西林和阿莫西林的耐药率均高于85%,对头孢他啶和头孢噻呋的耐药率为24.7%和31.5%,对环丙沙星、诺氟沙星、恩诺沙星和萘啶酸耐药率为62.9%~89.6%。耐药基因检测结果显示,bla_(CTX-M)、bla_(TEM)和bla_(OXA)的检出率分别为89.2%、78.4%和49.4%;251株水禽源大肠杆菌中均没有检测到qnrA;qnrB和qnrD检出率较低,仅为2.5%和4%,qnrS检出率为41.1%;另外,有43.0%的E.coli同时携带喹诺酮类和β-内酰胺类耐药基因。研究结果表明广东地区水禽源大肠杆菌对青霉素类和喹诺酮类药物耐药情况较严重,而且β-内酰胺类耐药基因(bla_(CTX-M)、bla_(TEM)和bla_(OXA))和喹诺酮类耐药基因(oqxB)的检出率均高于49%,提示临床日益严重的耐药现象与耐药基因普遍存在相关性。     

广西不同养殖模式猪源大肠杆菌耐药性和耐药基因检测分析

本研究目的是了解广西不同养殖模式猪源大肠杆菌的耐药情况和耐药基因流行情况,为临床合理用药治疗猪大肠杆菌病以及减缓细菌耐药性产生提供参考。采用K-B纸片法测定了180株分离自广西3种养殖模式猪源大肠杆菌的耐药情况,并通过PCR检测其携带EABLs(bla_(TEM)、bla_(CTX))、PMQR因子(qnrA、oqxA、oqxB、aac(6′)-Ib-cr)、大环内酯类耐药基因(ermB)、磺胺类耐药基因(suL)和氟苯尼考耐药基因(floR)的情况。结果显示,大规模、中小规模和散养户养猪场的大肠杆菌对头孢西丁、头孢他啶和阿米卡星的敏感率高于70%,而对青霉素G、氨苄西林、阿莫西林、利福平、林可霉素和复方新诺明的耐药率均高于90%。大规模养猪场大肠杆菌对恩诺沙星的耐药率极显著低于散养户(P<0.01),对氧氟沙星、庆大霉素和氟苯尼考的耐药率显著低于散养户(P<0.05);中小规模养猪场大肠杆菌对恩诺沙星、强力霉素和氟苯尼考的耐药性显著低于散养户(P<0.05);散养户大肠杆菌对环丙沙星、卡那霉素和壮观霉素的耐药率极显著高于大规模养猪场和中小规模养猪场(P<0.01),而对头孢噻肟的耐药率极显著低于大规模养猪场和中小规模养猪场(P<0.01)。大规模养殖场、中小规模养殖场和散养户大肠杆菌的多重耐药指数(MARI)分别为0.62、0.63和0.68,分离自散养猪场的83.3%菌株(50株)表现为对13-23种药物的多药耐药,极显著高于大规模养猪场(50%,30株,P<0.01),显著高于中小规模养猪场(61.7%,37株,P<0.05)。在3种模式养猪场的大肠杆菌中均检测到bla_(TEM)、bla_(CTX、)qnrA、oqxA、oqxB、aac(6′)-Ib-cr、ermB、suL和floR 9种耐药基因,其中bla_(TEM)和suL的阳性率高达100%,bla_(CTX)的阳性率最低,各模式猪场均低于57%。3种养殖模式之间的耐药基因阳性率相比差异显著,但与耐药表型不具有显著相关性。结果表明,3种养殖模式的猪场分离的大肠杆菌均具有严重的耐药问题,且菌株可携带多种耐药基因,表现为多重耐药,而不同养殖模式猪场分离的菌株耐药性存在显著性差异。     

犊牛肺源致病性大肠杆菌分离鉴定、耐药性及耐药基因检测

本试验旨在确定新疆石河子地区某牛场因呼吸系统疾病导致犊牛死亡的细菌性病原,并对分离病原进行系统进化分类、耐药表型和耐药基因分析。采用细菌常规分离结合全自动生化分析系统对分离株进行分离鉴定,采用纸片法和PCR方法对分离株进行系统分群、药敏表型及耐药基因的分析。从患病犊牛肺脏、肝脏及淋巴结组织分离鉴定出6株致病性大肠杆菌,6株分离株均呈多重耐药现象,其中对青霉素、阿莫西林、头孢唑啉、头孢拉定、链霉素、庆大霉素、氟苯尼考、替考拉宁、克林霉素、美罗培南、四环素和妥布霉素的耐药率高达100%。氨基糖苷类耐药基因aacC2、β-内酰胺类耐药基因bla_(CTX-M)和bla_(TEM)、四环素类耐药基因tetA、喹诺酮类耐药基因gyrA、磺胺类耐药基因sul2携带率分别为66.67%、83.3%、66.7%、100%、100%和100%。结果表明,新疆石河子某牛场发生呼吸道感染死亡犊牛细菌性病原是大肠杆菌,且表现较强的多重耐药现象,分离株携带更为丰富的耐药基因。     

倒扣草水煮液和抗菌药联用对3株多重耐药大肠杆菌的体外抑菌效果研究

倒扣草是一种抗炎、抗菌、抗肿瘤的常见中药,为了倒扣草水煮液对3株多重耐药大肠杆菌的抑菌效果,采用微量肉汤二倍稀释法测定倒扣草水煮液与头孢曲松钠、阿莫西林、头孢噻呋钠、环丙沙星、克林沙星、磷霉素、氟苯尼考、利福平等抗菌药的最小抑菌浓度(MICs);采用微量棋盘稀释法测定1/2MIC倒扣草水煮液与不同浓度抗菌药联用时的最小抑菌分级指数(FICI);结合3株多重耐药大肠杆菌的MICs与FICI值,选取3种耐药基因超广谱β-内酰胺类耐药基因CTX-M、氟苯尼考耐药基因floR、磷霉素fos A3进行PCR扩增。结果表明,倒扣草对多重耐药大肠杆菌具有一定的抑菌效果,其中对产CTX-M型大肠杆菌E1,倒扣草水提液与头孢噻肟、环丙沙星、利福平呈现相加效应;对产floR型大肠杆菌E2,倒扣草水提液与氟苯尼考、头孢噻肟、克林沙星、利福平呈现协同或相加效应;对产CTX-M型大肠杆菌E3,倒扣草水提液与磷霉素、利福平、黏杆菌素、痢菌净及氟苯尼考呈现协同或相加效应。倒扣草水煮液与部分抗菌药联用可降低抗菌药对多重耐药大肠杆菌的最小抑菌浓度(MICs),对畜牧业减少或降低抗菌药的使用有着实际意义。     

苍蝇中产耐NDM型碳青霉烯类肠杆菌的流行情况与耐药性分析

为明确苍蝇对产NDM型碳青霉烯类耐药肠杆菌(NDM-CRE)传播的作用,对2016年9月-2017年9月采集于青岛地区某肉鸡养殖场周边的苍蝇进行NDM-CRE的流行情况与耐药性分析。通过细菌分离,16S rRNA鉴定与bla_(NDM)耐药基因的确认,从120份苍蝇样品中分离出31株碳青霉烯耐药菌株(分离率为25.8%),其中NDM-CRE 16株(分离率为13.3%),分别为大肠杆菌10株(分离率为8.3%)、弗氏柠檬酸杆菌5株(分离率为4.2%)和肺炎克雷伯菌1株(分离率为8.3%)。对16株NDM-CRE进行NDM亚型鉴定,确认10株为bla_(NDM-5),6株为bla_(NDM-9);对其进行16种抗菌药物敏感性测试,结果显示,所有分离株除对替加环素敏感外,对氨苄西林、阿莫西林-克拉维酸钾(2∶1)、美罗培南、头孢唑啉、头孢西丁、头孢噻呋、四环素、土霉素和复方新诺明均耐药;85%以上的分离株对庆大霉素(87.5%)、氟苯尼考(93.8%)、氯霉素(93.8%)和恩诺沙星(87.5%)耐药;46.7%的分离株对氨曲南耐药;18.8%的分离株对多黏菌素E耐药;所有分离株对至少11种抗菌药物耐药,以耐14种抗菌药物菌株最多(n=6)。此外,对分离菌株进行12种耐药基因检测,结果发现,其至少携带5种耐药基因(bla_(NDM),bla_(TEM-1),sul1,sul2,floR),耐药机制较复杂。研究结果表明,养殖场周边的苍蝇可作为NDM耐药基因的重要载体,可能促进了养殖场、环境及相关人群中NDM-CRE的传播,对养殖产业的健康发展和公共卫生安全具有较大的威胁,有必要对其进行消除。     

48株大肠杆菌超广谱β-内酰胺酶基因型检测

为了解重庆地区部分鸭场大肠杆菌中超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因分布情况及抗生素的应用对鸭场环境菌的影响。本试验采用PCR技术,对48株大肠杆菌(包括20株病料分离株和28株鸭场土壤分离株)的ESBLs基因TEM、SHV、CTX-M进行检测。结果表明,TEM、SHV、CTX-M型基因在病料分离株中的检出率分别为100%、30%、25%,鸭场土壤中的检出率分别为57.1%、21.4%、28.6%。不同来源的菌株均能检测出耐药基因,且部分细菌携带两种以上耐药基因;病料分离株和鸭场土壤分离株中携带的ESBLs基因均以TEM型为主。