公猪精子顶体酶活力测定法

公猪精子顶体酶活力测定法章勇威（昆山市多管局家畜改良站，２７５３００）赵伟，黄夺先（江苏省农科院）顶体酶是存在于精子顶体内的一种胰蛋白酶，它是受精过程中的一种重要的蛋白水解酶，此酶能水解卵细胞的透明带，使精子能够与卵细胞相融合，顶体酶还能够促进生殖系...     

猪精子获能、顶体反应及冷休克对顶体酶抑制剂的影响

为了探究猪精子在获能、顶体反应及冷休克处理后对精子顶体酶抑制剂表达量的影响,以及顶体酶抑制剂在精子中何时被降解,低温是否会损伤顶体酶抑制剂,利用SDS-PAGE、Western blot分析射精精子、获能精子、顶体反应精子和冷休克精子组的总蛋白种类及猪精子顶体酶抑制剂表达量的变化。结果显示:射精精子处理组与获能精子、顶体反应精子处理组的顶体酶抑制剂表达量差异显著(P<0.05),且获能和顶体反应处理组间的差异不明显(P>0.05);射精精子与冷休克精子处理组的顶体酶抑制剂表达量差异极显著(P<0.01),且冷休克处理组的顶体酶抑制剂出现异常表达。推测:精子在获能或顶体反应期间,顶体酶抑制剂可能通过泛素-蛋白酶体途径被降解,释放出有活性的顶体酶;低温可能导致顶体酶抑制剂蛋白结构的改变或损坏,导致其表达量异常。     

完整顶体精子注入卵细胞后对胚胎发育的影响

分别注射1、3、5个顶体完整的人精子于金黄地鼠卵中,对照组同时注射数量相等的无顶体精子,观察卵活化、受精及后期发育情况.结果发现随着注入精子数量的增加,卵发育的异常率显著增加,而注射无顶体精子组,无论注射精子数量为多少,均无异常发生.此外,注射多个精子于金黄地鼠卵中时,多原核(PN)形成率顶体完整组明显低于无顶体组(P...     

超低温冷冻对俄罗斯鲟精子顶体酶活性及DNA损伤的影响

选取6 ind健康的雄性俄罗斯鲟(Acipenser gueldenstaedti),经人工催产后获得成熟的精子,研究超低温冷冻(-196℃)对俄罗斯鲟精子顶体酶活性及DNA损伤影响。结果显示:俄罗斯鲟鲜精中顶体酶的平均活性为(36.18±2.54)μIU·10-6,经过超低温冷冻后,精子顶体酶活性显著降低,添加抗冻保护液精子中顶体酶活性降至(21.55±0.79)μIU·10-6,未添加抗冻保护液精子中顶体酶活性降至(9.58±1.08)μIU·10-6,且三者间有显著性差异(P0.05)。单细胞凝胶电泳结果表明,俄罗斯鲟鲜精彗星率为(37.33±7.77)%,添加抗冻剂后冻精的彗星率为(63.67±5.13)%,未添加抗冻剂直接冷冻彗星率高达(86.00±3.61)%,三者间有显著差异(P0.05)。用CASP分析软件分析测量彗星拖尾长度(L tail)、彗星尾部DNA的相对含量(Tail DNA)、尾动量(TM)、Olive尾动量(OTM)等各项表征DNA损伤的指标,发现冻精组的各项指标均显著高于鲜精组,未添加抗冻剂直接冷冻组又高于添加抗冻剂组,3组间有显著性差异(P0.05)。本研究结果表明:超低温冷冻能导致精子顶体酶活性下降和DNA损伤,抗冻剂对精子具有保护作用。     

超低温冷冻对德国牧羊犬精子超微结构及顶体酶类活性的影响

为探讨超低温冷冻对德国牧羊犬精子超微结构及顶体酶类活性的影响,对冷冻前后德国牧羊犬精子采用扫描电镜和透射电镜观察超微结构变化;采用改良明胶底膜法、改良BNPNA法、磷酸苯二钠法对精子透明质酸酶、顶体酶和酸性磷酸酶活性进行研究。结果表明:鲜精和冻前精子形态变化不显著,而超低温冷冻后精子头部、颈部和尾部发生形态变化的精子数极显著高于鲜精和冻前精子;超低温冷冻后德国牧羊犬精子3种顶体酶活性极显著降低;超低温冷冻后德国牧羊犬精子3种顶体酶活性与精子活率和顶体完整率呈正相关(P0.01),与畸形率呈负相关(P0.05)。     

精子顶体酶抑制剂及其泛素化的研究进展

精子顶体酶抑制剂抑制精子顶体酶活性以便阻止精子遭受损伤,而成功受精的必要条件是有活性的顶体酶释放,此过程需泛素-蛋白酶体途径降解顶体酶抑制剂,从而顶体酶抑制作用被解除。本文主要针对精子顶体酶抑制剂、蛋白泛素化以及顶体酶抑制剂泛素化的研究进展作一综述。     

[05]早熟和正常中华绒螯蟹精子形态、顶体酶活力和抗氧化能力的比较研究

与正常雄性中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)进行了比较,结果表明,早熟雄性蟹生精小管的细胞构成明显不同.早熟雄性蟹精巢生精小管主要管型为精母细胞型,而正常雄蟹管型以精原细胞加精母细胞型为主;早熟雄蟹性腺发育速度明显快于正常雄蟹;正常雄蟹的牛精小管和精荚横截面积分别为(0.041±0.007)mm2和(0.080±0.010)mm2,而早熟雄蟹则分别下降为(0.026±0.005)mm2和(0.044±0.005)mm2,两组间存在极显著差异(P<0.01);其次,早熟雄蟹与正常雄蟹各期精细胞大小差异较大,表现为正常蟹精原细胞、精母细胞和精子均大于早熟蟹;早熟蟹的精子成活率仅为(73.6±3.5)%,而正常蟹则为(84.7±2.1)%;两组蟹精子顶体酶活力差异显著(P<0.05),早熟蟹精于顶体酶活力仅为(62.8±5.50)μIU/106,约是正常蟹的70%,正常蟹高达(79.6±9.80)μIU/106;早熟蟹精巢内超氧化物歧化酶、总抗氧化能力数值均显著低于正常蟹(P<0.05),而两组蟹精巢内丙二醛(MDA)含量无显著差异(P>0.05).虽然早熟蟹性腺发育速度快于正常蟹,但其各期精子形态、精子密度与成活率、顶体酶活力和抗氧化能力等指标均远不及正常蟹.     

家蚕精子顶体酶活性分析及冷冻精液的人工授精

采用改良Kennedy s法测定了家蚕精子顶体酶活性,得到了适合家蚕精子顶体酶活性测定的最佳条件,即:孵育温度为25℃,孵育时间为4 h;精液体外4℃存放随时间延长其顶体酶活性呈下降趋势,酶活性的测定应在15 h内进行。虽然冷冻精液随着冷冻时间的延长其酶活性下降,但是不同冷冻方式之间酶活性变化趋势不同,-80℃保存时酶活性直线下降,120 d后酶活性下降了61%。液氮中保存的精液虽然在30 d后的酶活性为冷冻前的58%,但在其后的几个月中酶活性下降不明显。此外,顶体酶活性的高低与精液人工授精产卵数及受精卵率相关,酶活性越低其产卵数越少,受精卵率也越低,提示顶体酶活性的高低可以在一定程度上反映精液的品质。     

冷冻保存对野牦牛精子酶活性的影响

研究冷冻保存（-196℃）对野牦牛精子顶体酶等酶活性的影响。应用Giemsa染色法、BAPNA底物法、改良明胶底膜法和磷酸苯二钠法分别测定不同保存年份的精子顶体完整率、顶体酶、透明质酸酶和酸性磷酸酶活性；采用酶动力学分光光度法，分别以丙酮酸钠和α-已酮酸钠为底物测定乳酸脱氢酶及其同工酶CA活性，并计算C4的相对活性。结果表明，在冷冻保存条件下，野牦牛精子有关酶活性下降；并随保存时间的延长，下降幅度增加；对保存5年以上的精液需抽样测定功能和品质后再用于生产。     

维生素E提高绵羊颗粒冻精品质的机理研究

以无角多赛特公羊为试验对象,采用2步稀释法,在冷冻精液稀释液中添加维生素E,对维生素E提高绵羊颗粒冻精品质的机理进行初探.试验1证明,试验组的活率(0.435)极显著高于对照组(0.365)(P＜0.01),其精子顶体总异常率(33.72%)极显著低于对照组(44.35%)(P＜0.01),且顶体完整率与冻精活率相关极显著(r＝0.662,P＝0.037).添加维生素E可降低冷冻对精子顶体的损害程度,冷冻精液品质得到显著改善.试验2结果表明添加维生素E后AST、ALP、GGT、CK、LDH与ALT的活性均与对照组无显著差异.但对照组与试验组比较,GOT及CK释放量与解冻精子的活率负相关下降(分别为r＝-0.536,r＝-0.209及r＝-0.419,r＝-0.051),LDH的释放量与解冻精子的活率之间正相关(r＝0.123与r＝0.507).试验3结果证明在绵羊冷冻精液稀释液中添加维生素E可以显著提高精子顶体酶的活力,分别为82.91 mu/ml和99.82 mu/ml(P＜0.05).绵羊冷冻精液精子顶体酶活力与精子活率呈正相关(r=0.490),与精子畸形率呈负相关(r=-0.122),冷冻精子活率随着精子顶体酶活力的提高而提高.