文心兰高效再生体系的建立

[目的]建立文心兰高效再生体系,为利用转基因技术进行品种改良提供科学依据.[方法]以文心兰柠檬绿的无菌苗叶片为材料,探讨不同植物生长调节剂配比对其原球茎诱导的影响,开展增殖、生根及移栽研究,建立其高效稳定的再生体系.[结果]影响文心兰原球茎诱导的3种植物生长调节剂主次排序为萘乙酸(NAA)>噻苯隆(TDZ)>6-苄氨基嘌呤(6-BA),在1/2MS培养基中添加0.5 mg/L NAA、0.5 mg/L 6-BA和0.3 mg/L TDZ的诱导率最高,达48.0%.培养基中活性炭含量及碳水化合物种类对文心兰原球茎增殖的影响存在明显差异,不同活性炭含量处理间的原球茎增殖系数存在显著差异(P<0.05,下同),添加1.0 g/L活性炭较添加0.5 g/L活性炭的增殖系数显著升高,不同碳水化合物种类间的原球茎增殖系数排序为海藻糖>麦芽糖>蔗糖,最佳增殖和分化培养基为1/2MS+4.0 mg/L 6-BA+0.4 mg/L NAA+1.0 g/L活性炭+20 g/L海藻糖.添加10%椰子水的文心兰幼苗生根数显著高于添加10%香蕉汁和10%苹果汁,每株平均生根量接近4.00条,即生根效果最佳的培养基为1/2MS+0.8 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+10%椰子水.移栽过程中根部用水苔包裹后再移至椰糠中,保证光照、水分适宜,适当添加缓释肥,移栽成活率可达100%.[结论]利用海藻糖或麦芽糖作为碳源的文心兰原球茎增殖效果较优,生根数和生根质量优势明显;不同植物生长调节剂配比、碳源和有机物的添加对文心兰组织培养具有明显的促进效果.     

文心兰HSP70基因的克隆及表达分析

为研究文心兰热激蛋白70基因（命名为OnHSP70）的分子特性及表达特点,以文心兰‘柠檬绿’（Oncidium hybridum ‘Honey Angel’）为材料,采用RT-PCR技术克隆OnHSP70,利用生物信息学方法分析其分子特性,通过qRT-PCR技术分析其在不同组织及不同非生物胁迫处理下的表达特点。生物信息学分析表明：该基因开放阅读框为1944 bp,编码647个氨基酸,翻译的蛋白为稳定蛋白,属于HSP70超家族,其蛋白二级结构由41.11%的α-螺旋、17.77%的延伸链、7.73%的β-转角和33.38%的无规卷曲组成,具有2个高度保守的功能域。聚类分析表明：该蛋白与铁皮石斛和深圳拟兰的HSP70亲缘关系较近。qRT-PCR分析表明：文心兰HSP70在4种不同组织器官中具有表达差异性,在花中的表达量最高;高温处理后基因的表达量明显上升;40 ℃高温胁迫4 h时表达量达峰值;茉莉酸甲酯及水杨酸处理时表达量呈现下调响应。本研究为后期该基因功能研究及提高文心兰对高温的适应性提供理论基础。     

文心兰新品种‘海文吉祥1号’

文心兰新品种‘海文吉祥1号’是由文心兰‘柠檬绿’（Honey Angle）组培苗芽变株选育而来。花梗直立坚挺，花瓣和萼瓣淡黄色，唇瓣柱头处呈黄色，向四周边缘逐渐变浅成乳白色。为切花型品种，观赏价值高，应用前景广。     

文心兰的茎尖及花梗组织培养和快速繁殖探讨

将文心兰的茎尖以及花梗使用N6+6-BA 2.0mg/L的培养基;花梗分化芽,同时茎尖同时分化芽和原球茎。使用6-BA低浓度培养液对分化芽进行促进生长;使用高浓度6-BA促进原球茎的分化。结果表明:1/2N6+6-BA0.2mg/L+NAA 0.2mg/L培养基对于文心兰继代增值以及后期苗木成长促进效果良好。在培育、繁殖文心兰的后期肥料及激素的使用以及病虫害的防治,也是影响文心兰幼苗快速繁殖的重要因素。     

茉莉酸拮抗乙烯延缓文心兰花朵衰老的研究

文心兰(Oncidiumhybridum)花朵的花药帽易脱落，导致切花加速衰老。以‘柠檬绿’文心兰为试验材料，研究脱药帽后花朵乙烯释放速率和茉莉酸(jasmonic acid,JA)含量变化，外源茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)及其抑制剂乙酰水杨酸(acetylsalicylic acid,ASA)对脱药帽文心兰花朵衰老、乙烯释放及乙烯合成关键基因OhACO1和OhACO2表达的影响，探究乙烯和JA在文心兰花朵衰老过程中的作用。研究结果表明：脱药帽处理会加速文心兰花朵衰老，脱药帽处理1 d时乙烯释放速率已达168.23 nL·g^-1·h^-1，而同期未脱药帽对照没有乙烯释放，JA含量显著增加，但脱药帽处理比对照低57.86%。此外，外源MeJA处理显著抑制文心兰花朵衰老，而其抑制剂ASA处理则明显促进衰老，外源MeJA处理抑制了乙烯生物合成关键基因OhACO1和OhACO2的表达，而ASA不同程度地增加了其表达，说明JA可能通过抑制乙烯合成来延缓文心兰花朵衰老，在文心兰花朵脱药帽处理诱发的衰老过程中JA具有拮抗乙烯、延缓...     

遮光处理对文心兰生长发育和生理指标的影响

以文心兰切花品种‘金辉’为试材,研究了在遮光率分别为60%、70%、80%、90%条件下其生长发育和生理指标的变化情况,分析了切花文心兰生长发育和生理指标与光照条件的关系,以期为筛选适宜光照条件提供参考。结果表明:持续60%遮光率显著降低花序梗长,且在夏季强光照时叶绿素含量显著降低,相对电导率显著上升;持续90%遮光率显著降低茎叶中可溶性糖、还原糖含量,同时假鳞茎长、假鳞茎茎围、开花率、花序长、分叉数及花朵数也显著降低;持续70%遮光率不仅开花率、花序长、分叉数及花朵数最高,且在夏季强光照时可溶性糖、还原糖的累积量最高,利于文心兰切花栽培。     

4种文心兰的光合作用特征研究

以自主选育品种玉香、金香和引进品种白力士、光华为材料,对其叶片叶绿素含量进行测定,并通过CI-340便携式光合作用测定仪测定光响应曲线,研究其光合作用。结果表明:玉香的叶绿度显著高于其他3个品种,表明其对光能的利用率较高;4个品种的文心兰基本表现出2个类型,相对于白力士和光华而言,玉香和金香具有较高的光补偿点、较低的饱和点和最大光合速率,表明其对光强环境的适应能力相对较低,也就是对栽培环境的光条件要求较高。     

不同基本培养基及培养方式对文心兰原球茎增殖的影响

以薄叶系文心兰Alha′Iwanaga′茎尖诱导形成的原球茎 (PLB)为材料 ,比较不同基本培养基类型 (MS、1/ 2MS、VW )及不同培养方式 (固体培养、液体培养 )对原球茎增殖的影响 ,结果表明 :文心兰PLB增殖以 1/ 2MS为基本培养基配合振荡及回旋培养方式较好 ,固体培养方式因其幼苗形成率高 ,不适合进行文心兰PLB增殖培养     

文心兰组织培养基激素选择及组培苗的移植管理技术

以文心兰杂交新品种星战、达卡、爪哇的茎尖及花蕾为组培材料，对适合外植体的原球茎增殖、分化的培养基、培养方式进行试验研究。对培养基激素进行筛选试验结果表明：利于原球茎诱导增殖的培养基为1／2MS 6-BA5．0mg／L NAA0．5mg／L；利于不定芽增殖的培养基为1／2MS 6-BA2．0mg/L NAA0．1mg／L；利于生根的培养基为1／2MS NAA0．5mg／L。其试管苗移植的栽培基质以小石子 小树皮(1：1)为佳。并从控制温、湿度，采取合理的水肥管理措施，进行病害防治等方面，介绍了文心兰组培苗的移植管理技术。     

文心兰茎尖离体培养研究

文心兰茎尖培养的研究，试验结果表明：文心兰茎尖在MS BA2mg／L NAA0．5mg／L培养基上，离体培养1个月后产生原球茎．改良KC基本培养较适原球茎的增殖；用BAI．5mg／L NAA0．2mg／L的激素配比，原球茎月增殖宰可达332．5％；CW可以减少原球茎褐死现象和促进原球茎的增殖：壮苗阶段，以附加NAA0．5% 10％香蕉汁的效果较好．水苔是良好的移栽基质，成活率在85．3％．