全细胞催化剂pelB⁃Xln⁃DT构建及其在水解三七皂苷R1中的应用

设计带有EcoRV和XhoI酶切位点的上下游引物PCR扩增嗜热菌Dictyoglomus thermophilum DSM 3960的GH39家族的β-木糖苷酶Xln-DT编码基因,利用基因拼接技术将其重组至p ET-20b质粒中pelB信号肽基因的下游,重组质粒转化大肠杆菌表达宿主Escherichia coli BL21,构建分泌融合表达型基因工程菌pelB-Xln-DT。经异苯基-β-D-硫代半乳糖苷诱导,pelB-Xln-DT酶活为2.1 U/m L。粗酶液pelB-Xln-DT的最适温度为85℃,较原酶提高了10℃,最适p H为5.5,比原酶降低了0.5; pelB-Xln-DT在85℃下的热稳定性比原酶有了一定提高,保温1 h后酶活基本不变,保温2 h其剩余酶活为82.0%,而Xln-DT在85℃下保温1 h后其剩余酶活为70.4%;在p H 4.0～7.0的范围内,pelB-Xln-DT具有良好的p H稳定性。引入pelB信号肽后不但能够提高蛋白的可溶性表达,还能提高酶蛋白的热稳定性。以pelB-Xln-DT作为全细胞催化剂转化三七皂苷R1生成人参皂苷Rg1,研究了转化温度、转化时间、三七皂苷R1添加量、重复次数等因素对转化效率的影响。结果表明,全细胞催化剂用量1.0 U/m L,在温度37℃下,3 g/L的三七皂苷R1反应3 h后的摩尔转化率达到91.6%,重复利用10次后,转化率仍能达到46.7%,显示出pelB-Xln-DT良好的重复催化性能。     

文冠果叶总皂苷的提取工艺优化及减肥降脂功效

【目的】优化文冠果叶总皂苷的提取工艺，并对其减肥降脂功效进行分析。【方法】采用单因素试验并结合Box-Behnken响应面法，对文冠果叶总皂苷的提取温度、液(mL)料(g)比、乙醇体积分数进行优化。采用高脂饲料喂养小鼠建立高血脂症模型，建模4周后，以奥利司他为阳性对照，分别采用高（200 mg/kg）、中（100 mg/kg）、低（50 mg/kg）剂量组文冠果叶总皂苷连续灌胃4周，检测小鼠血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL-C）和高密度脂蛋白（HDL-C）的浓度，分析不同剂量文冠果叶总皂苷对小鼠体内胰脂肪酶的抑制作用。【结果】文冠果叶总皂苷的最佳提取工艺条件为：提取温度60 ℃，乙醇体积分数70%，液(mL)料(g)比30∶1，此时文冠果叶总皂苷得率为4.952%。对小鼠的减肥降脂试验表明，文冠果叶总皂苷对胰脂肪酶的抑制活力最高可达68.29%，且在高血脂模型中，高、中、低剂量文冠果叶总皂苷均可显著或极显著降低血清中的TC、TG、LDL-C浓度，提高HDL-C浓度，其中高剂量组的降脂作用与阳性对照药物奥利司他效果相当。【结论】文冠果叶总皂苷减肥降脂功效显著，能够有效抑制胰脂肪酶活力，降低胆固醇和甘油三酯含量，进而促进脂肪代谢。     

苜蓿在仔猪饲料中的研究应用

正苜蓿是迄今已发现的营养非常面的草本植物之一,富含蛋白质、糖类、皂苷、酮类化合物、可食纤维、维生素以及大量的微量元素。目前苜蓿在畜禽生产中的应用已十分广泛,许多研究表明,苜蓿具有调节脂质代谢、降低胆固醇、提高免疫力、抗氧化、抗菌、促进动物体重增加等作用。在饲料中添加一定比例的苜蓿草粉对提高动物生产性能、繁殖性能、免疫机能和产品质量都有促     

文冠果果壳提取物对植物病原菌的抑菌活性

[目的]揭示文冠果果壳提取物的抑菌活性以及产生抑菌活性的成分种类,为已废弃的文冠果果壳制备植物源杀菌剂提供理论依据。[方法]使用乙醇/水(75%)、乙酸乙酯、石油醚对文冠果果壳进行溶剂提取;对提取物中活性成分进行分析,并通过逐步回归分析法研究提取物中可能的抑菌成分。[结果]乙醇/水(75%)提取物中单宁、酚类、皂苷的含量最高,石油醚提取物中最低。乙醇/水(75%)和乙酸乙酯提取物中类黄酮的含量相似,但都远大于石油醚提取物。当提取物浓度为2g·L-1,48h处理后,乙醇/水(75%)、乙酸乙酯和石油醚提取物对苹果轮纹病菌(Botryosphaeria berengeriana)的抑制率分别为95%、71%和39%,对葡萄根腐病菌(Fusarium oxysporum)的抑制率为75%、59%和24%,对山核桃根腐病菌(Fusarium spp.)的抑制率为78%、39%和35%,对番茄枯萎病菌(Fusarium oxysporumf.sp.lycopersici)的抑制率为100%、28%和4%,对番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)的抑制率为93%、58%和9%,对梨黑斑病菌(Alternaria alternata)的抑制率为89%、36%和33%。逐步回归分析结果表明:单宁是苹果轮纹病菌和番茄枯萎病菌的主导影响因子(P<0.01);皂苷为梨黑斑病菌(P <0.05)和山核桃根腐病菌(P<0.01)的主导影响因子;类黄酮为葡萄根腐病菌的主导影响因子(P <0.05)。[结论]文冠果果壳乙醇提取物具有较强的抑菌活性,其中富含的单宁和皂苷为多数植物病原菌的影响因子。     

黄芪不同采收期有效成分含量比较

以黄芪为试材,采用紫外-可见分光光度法,分析了5个不同采收期的3年生蒙古黄芪的多糖、总皂苷、总黄酮含量,探讨蒙古黄芪的适宜采收期。结果表明:10月上旬采收的黄芪多糖含量最高,达7.79%,8月上旬采收的黄芪黄酮含量、皂苷含量最高,分别为3.18%和0.568%。3年生蒙古黄芪的适宜收获期为9月上旬至10月初,此期间采收的黄芪品质较佳。     

不同部位长白楤木皂苷物质含量及其工艺研究

以长白楤木为试材,采用超声提取长白楤木的根、茎、叶、芽中皂苷类物质,利用紫外-可见分光光度计测定皂苷类物质的含量,通过单因素试验和正交实验考察了提取时间、料液比、乙醇浓度对皂苷类物质提取率的影响,确定了最佳提取条件。结果表明:料液比对皂苷类物质的提取有显著性影响;料液比为1∶20g/mL、乙醇浓度65%、提取时间20min,为长白楤木中皂苷类成分超声提取的最佳条件,此条件下测得长白楤木中皂苷类物质含量最高的为根,含量为16 461.3465μg/mL。     

柴胡总皂苷对胃癌(SNU-216)的抑制作用研究

目的探讨柴胡总对胃癌(SNU-216)抑制作用。方法采用体外法培养胃癌(SNU-216),分别用不同浓度柴胡总皂苷(0.025μmol/L、0.050μmol/L、0.075μml/L、0.100μml/L)作用于体外培养的胃癌(SNU-216),分别在24、48、72h用MTT法检测胃癌(SNU-216)生长抑制率。结果柴胡总皂苷对胃癌(SNU-216)具有抑制生长作用,并随剂量增长抑制作用增强。实验组与对照组进行比较,有显著性差异(P0.001)。在药物的作用时间上, 24h以内作用较弱,48h以内是随着作用时间增加,抑制效率增强, 72h以内观察抑制效率亦有所增强,但与48h组比较抑制效率差异明显。结论不同浓度柴胡总皂苷对胃癌(SNU-216)细胞生长有抑制作用。     

人参中人参皂苷Ro和姜状三七皂苷R_1的含量测定

目的测定不同种类人参,人参不同部位中,红参加工过程中人参皂苷Ro(简称Ro)和姜状三七皂苷R1(简称R1)的含量含量。方法:采用HPLC的方法,对样品预处理及色谱条件进行优化。结果:鲜参中Ro和R1含量比红参中含量高;不同部位中Ro和R1的含量差异为:芦头参须主根;红参加工过程中的蒸制使Ro含量升高,R1含量降低。结论本文所建立的人参中人参皂苷Ro和姜状三七皂苷R1的含量测定方法准确、稳定可靠。     

三七地上茎4个转录因子基因转录水平的纵向变化及其与总三萜皂苷含量的关系

为三七绿紫茎三萜皂苷合成转录调控机理提供参考，将彻底长成的绿紫茎均分为18段，用实时荧光定量PCR检测茎段的三七碱性螺旋-环-螺旋蛋白基因（bHLH）、乙烯响应因子基因（ERF）、v-myb骨髓母细胞增多症病毒癌基因同源物基因（MYB）和WRKY1蛋白基因（WRKY1）的转录水平，用香草醛-高氯酸比色法检测茎段的总三萜皂苷含量（TTSC），分析转录水平与TTSC间的Pearson相关性。结果表明：从三七绿紫茎的顶部到基部，三七bHLH、ERF、MYB和WRKY1的转录水平分别呈一条波动式平缓上升、7峰、波动幅度逐渐增大的6峰和具2个主峰的6峰曲线；TTSC呈V型曲线，最低TTSC出现在茎上部的黄金分割点处；4种转录因子基因的转录水平和TTSC在不同茎段间的差异均达到极显著水平，且转录水平与TTSC之间的Pearson相关系数分别为0.371、0.130、－0.169和－0.195。因此，与三七绿紫茎三萜皂苷合成相关的主要转录因子应为三七的碱性螺旋-环-螺旋蛋白，其次为乙烯响应因子。