重庆地区致病疫霉交配型测定

通过对峙培养在RSA和RTA上对重庆地区主要马铃薯和番茄产区的致病疫霉交配型进行了测定。结果显示,分离自重庆地区8个县(区)的186个致病疫霉菌株均为A1交配型,没有检测到A2交配型。这一结果表明该地区的致病疫霉仍以A1交配型为主。     

PCR法快速检测柑桔溃疡病菌的简易制样技术

采用依据柑桔溃疡病菌独有蛋白基因的保守区段设计的特异性引物及其扩增体系进行测试.4种浸泡液中,浸泡液B的浸提效果最好,最佳浸泡时间为10～15 min.浸提液进行加热灭活与不加热灭活处理,PCR扩增结果无明显差异.对于无症柑桔样品,浸泡液中加入终浓度为0.3%的Na2SO3可以降低植物色素、多元酚和铜制剂残留的Cu2+等抑制PCR反应物质的干扰作用.样品浸提液经过离心处理,不仅可以有效浓缩靶细菌,提高检测灵敏度,而且可以除去PCR反应抑制物质,大大降低了检测的假阴性.     

PCR、DIA与致病性测定法检测柑桔溃疡病菌的比较

 依据柑桔溃疡病菌全基因组序列的独有保守区域设计筛选出的特异性引物对JYF5/JYR5，用于柑桔溃疡病菌的PCR检测，具有很好的检测特异性、灵敏度和稳定性。同时比较了PCR与DIA（斑点免疫结合技术）及传统的致病性测定法在检测灵敏度、稳定性及田间样品检出率等方面的差异。结果表明，PCR的检测灵敏度可达103～104 cfu·ml-1（每个反应体积约10个细菌），明显高于DIA（104～105 cfu·ml-1，每个样点约300个细菌）；PCR、DIA和致病性测定法检测田间显症样品的检出率均可达到100%，而检测柑桔无症样品的检出率依次降低。此外，通过排除PCR抑制物质和在PCR反应体系中加入终浓度为15%的甘油，有效地降低了检测中存在的假阴性。     

应用斑点免疫技术快速检测柑桔溃疡病菌

应用改进的斑点免疫技术在国产微孔滤膜上检测柑桔溃疡病菌（Ｘａｎ－ｔｈｏｍｏｎａｓａｘｏｎｏｐｏｄｉｓｐｖ．ｃｉｔｒｉ）。结果表明，靶细菌检测下限为１×１０４细胞／ｍｌ，柑桔无症材料浸出液稀释（１２８倍）仍可检出。经柑桔叶面腐生黄单胞及近缘细菌交叉吸收，提高了多克隆抗血清特异性，能有效地避免假阳性。３种ＨＲＰ－标结结合物的效果为ＨＲＰ－ＳｐＡ＞ＨＲＰ－ＩｇＧ（鼠抗兔）＞ＨＲＰ－ＩｇＧ（羊抗兔）。封闭液采用ＴＢＳ＋０．１％曲拉通或０．５％吐温２０，吐温８０均可获得白色滤膜背景。对全国８省３８县５１８个柑桔无症样品ＤＩＡ检验结果，平均带菌率３１．８２％，符合实际病情。     

柑桔黄龙病的常规PCR及荧光定量PCR检测

【目的】为柑桔黄龙病的早期诊断和寄主体内病原菌的动态监测提供一种稳定、可靠的检验检疫技术。【方法】利用亚洲韧皮杆菌核糖体蛋白基因rplJ/rplL设计了2对PCR引物CQULA03F/CQULA03R、CQULA04F/CQULA04R和1条TaqMan探针CQULAP1，以此为基础建立了常规PCR和TaqMan探针法、SYBR Green I荧光染料法两种荧光定量PCR（共3种）反应体系；确定了3种体系各自的检测灵敏度、特异性和准确性，据此对3种体系进行了比较；从2004年7月到2005年5月还利用常规PCR和TaqMan探针荧光定量PCR体系完成了对柑桔黄龙病病原菌在寄主体内的周年变化的动态监测。【结果】两种荧光定量PCR方法的灵敏度比常规PCR高出至少2～3个数量级，而TaqMan探针法由于使用了杂交探针，其特异性尤其可靠，另外两种定量PCR较小的产物片段使得它们具有更好的稳定性，加上荧光定量PCR方法本身受污染可能性小、操作简便等固有优势，使得前者更适合于柑桔黄龙病的检测。【结论】本研究建立的2种荧光定量PCR方法可以为柑桔黄龙病的病害早期诊断以及柑桔黄龙病病原菌近缘种的甄别提供准确、灵敏、快速的检验检疫技术。     

马铃薯晚疫病病菌对四种杀菌剂的交互抗性

通过测定甲霜灵敏感菌株和抗性菌株对甲霜灵、恶霜灵、霜脲氰、薯瘟锡的抗药水平和抗药类型以确定致病疫霉对此 4种内吸性杀菌剂的交互抗性关系。结果表明 ,致病疫霉对甲霜灵、恶霜灵、薯瘟锡三者间具有正交互抗性 ,此 3种药剂与霜脲氰间无交互抗性关系     

AFLP双酶切和连接方法探讨

通过AFLP双酶切和连接技术在植物病原菌分子检测和小麦抗病基因AFLP标记的研究,探讨了酶切时间,酶的用量,缓冲液选择,反应温度等操作条件对此方法重复性和稳定性的影响。     

世界柑桔溃疡病及其病原菌的研究现状和进展

自1984年美国农业部以 E.L.Civerolo 为首的小组在佛罗里达发现“柑桔溃疡病”以来,在病原鉴定上一直有争议。经过多年来大量的研究工作,据最新资料证实在佛罗里达为害作砧木用的 Swingle citrumelo 的所谓 E 菌系,不是溃疡病,而应是 Xanthomonascampebtris pv.citrumelo,真正的柑桔溃疡病菌,即 A 菌系,应为 X.citri,而在阿根延、乌拉圭等主要侵染柠檬和墨西哥来檬的假溃疡,即所谓 B 菌系和在巴西只侵染墨西哥柑桔和轻微为害其它来檬等的 C 菌系以及在墨西哥为害墨西哥来檬叶和嫩梢的 D 菌系,均应称为 X.campestris pv.aurantifolii,从而最后澄清了问题。本译文发表于1986年,反映的研究进展尚不多,但评述的较系统全面,有一定参考价值,因此也给于发表。     

柑桔溃疡病菌噬菌体XCP#-1检验技术研究

 本文首次报道了根据噬菌体XCP#-1的特性以及寄主溃疡病细菌吸附和噬菌体增殖的原理，采用双层琼脂法测定游离噬菌体的数量变化来检测柑桔溃疡病无症材料。经过四川省12个县、市80个送检柑桔标样的噬菌体吸附或增殖检验，证实它是一种特异性强、灵敏度高、快速准确的先进检测技术。     

芽胞杆菌CQBS03抑菌蛋白TasA基因的克隆及原核表达

为了探讨柑桔溃疡病生防菌芽胞杆菌Bacillus CQBS03菌株TasA基因的功能,采用PCR方法从CQBS03基因组DNA中扩增出编码TasA基因的全长DNA序列,并构建pEASY-E1/TasA原核表达载体,经大肠杆菌Escherichia coli表达获得TasA基因的融合表达蛋白,纸碟法检验融合蛋白对柑桔溃疡病菌Xanthomonas citri citri的抑制作用。结果显示,CQBS03菌株的TasA基因包含1个786 bp的完整开放阅读框（GenBank登录号为JQ309841）,编码261个氨基酸残基;该序列与来源于解淀粉芽胞杆菌B.amyloliquefaciens的1个已知同源TasA基因序列FJ713580的相似性达99.75%。原核表达产物经SDS-PAGE分析,检测到约31 kD的融合蛋白;纯化后的融合蛋白对柑桔溃疡病菌有明显的抑制作用,72 h后抑菌圈直径达11.5 mm。研究表明TasA基因是生防菌芽胞杆菌CQBS03抑制柑桔溃疡病菌的功能基因之一,并且该基因对原核表达宿主没有抑制作用,具有较好的开发利用前景。