H5N1亚型禽流感病毒血凝素在昆虫杆状病毒系统中表达与活性鉴定

摘要：本实验从质粒pGEM-HA中扩增H5N1亚型禽流感病毒HA基因，构建转移载体pFastBacHT-HA并与E.coliDH10Bac中的Bacmid质粒重组，构建重组转座质粒rBacmid-HA。在脂质体介导下将rBacmid-HA转染sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒。在sf9昆虫细胞中表达HA蛋白，通过SDS-PAGE、Western blot和血细胞吸附实验鉴定重组蛋白。结果显示重组HA蛋白分子量约为66kDa，该蛋白与AIV H5亚型鸡血清发生特异性反应，与H7、H9亚型鸡血清不反应，转染重组杆状病毒后的细胞能吸附鸡的红血球，证明HA基因在sf9昆虫细胞中获得了正确表达，不仅具有型特异性，而且有良好的生物反应性。     

供给侧改革背景下农业信息服务供给评价 ——基于新疆棉农的实证

新常态下农业信息服务对促进植棉业发展、提高棉农收入、实现农业现代化意义深远。利用多元有序Logistic模型,结合新疆47个乡(镇)122个村庄的调研数据,探索供给侧改革背景下影响棉农评价农业信息服务的因素。结果表明,新疆棉区农业信息服务内容及渠道结构性失衡突显;棉农对农业信息服务持满意态度,对棉花供求及行情预测信息表示不满意;棉农生计资本异质性与其评价有较大关联,植棉规模、棉农对金融机构的满意度、县域范围有无社会关系等变量是影响棉农评价的主要因素。最后,为提升棉农的评价及完善棉区农业信息服务体系提出政策建议。     

基于人口特征的农业社会化服务满意度研究

农业社会化服务水平的提高对现代农业发展影响深远。对新疆的5个地州的1 726户农户进行农业社会化服务问卷调查,并从人口统计变量角度研究了农户对农业社会化服务满意度及影响因素。结果表明:男性对各项服务的满意度整体比例较高且满意度较好,不同年龄农户对其的满意度趋势相同呈"倒V型"分布;性别、受教育程度、户主是否务农、个人经历是影响农户满意度的主要因素;人口统计变量对各项服务的影响排序不同。基于此从人口统计量角度提出提高农业社会化服务水平及农户自身素质的建议,以期为政府制定相应政策提供依据。     

北美H7亚型禽流感病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立

H7N9亚型禽流感病毒(AIV)对家禽养殖业和公共卫生的持续威胁提示我们应加强对H7亚型流感病毒的监测。根据血凝素(HA)基因的分子遗传进化特点,H7亚型AIV分为欧亚和北美两个进化分支,我国自然分离到的H7亚型AIV均属于欧亚分支,但是目前我国尚未检测到北美H7亚型AIV。本研究通过分析NCBI数据库中H7亚型AIV HA基因序列,设计特异性引物,建立了针对北美H7亚型AIV HA基因的实时荧光定量PCR检测方法。该方法仅针对北美分支H7亚型AIV HA基因出现特异性扩增曲线,不能检出欧亚分支H7亚型AIV、其他亚型(H3、H5和H9)流感病毒以及新城疫病毒和鸡传染性支气管炎病毒;检测方法的灵敏度可达53 Copies/μL。该检测方法的建立为监测北美H7亚型AIV提供了良好的技术支撑,可用于外来AIV的监测。     

孔雀IgG与鸡IgG的初步比较研究

通过比较孔雀 Ig G与鸡 Ig G的相似性 ,证实鸡疾病诊断试剂用于孔雀疾病诊断的可行性。用饱和硫酸铵盐析法提纯鸡 Ig G、孔雀 Ig G,比较 Ig G粗提物的 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱。用直接 EL ISA方法分析孔雀 Ig G、鸡 Ig G与抗鸡 Ig G结合程度的差异 ,并用蛋白免疫转印法进一步验证二者与抗鸡 Ig G的结合情况。最后 ,应用数种鸡疾病诊断试剂盒及血凝抑制实验进行孔雀疾病的血清学调查及诊断应用初步研究。结果表明 :孔雀 Ig G与鸡 Ig G具有较大相似性 ,并能够与兔抗鸡酶标二抗结合 ,但结合力弱于鸡 Ig G;可应用鸡疾病诊断试剂盒诊断孔雀疾病     

鸡IBV、NDV和AIV多重RT-PCR检测方法的初步建立

根据鸡传染性支气管炎病毒M基因、禽流感病毒NP基因和新城疫病毒F基因各设计1对引物,初步建立了针对鸡传染性支气管炎(IB)、新城疫(ND)和禽流感(AI)的多重RT-PCR鉴别诊断方法,并对其特异性和敏感性进行了检测。结果表明,所设计的3对引物可对同一样品中的IBV、NDV和AIV进行特异性扩增,所扩增的目的片断的长度分别为333bp(IBV)、438bp(NDV)和196bp(AIV);建立的多重RT-PCR检测方法能够检测出1ng/μLAIV、1ng/μLNDV和10ng/μLIBV的cDNA,说明该检测方法特异性强,敏感性较高。本研究所建立的多重RT-PCR方法可用于上述3种鸡病毒性呼吸道疾病的快速鉴别诊断,在临床诊断和流行病学调查方面具有较好的应用前景。     

我国H5和H7N9亚型高致病性禽流感的监测及疫情暴发分析

禽流感病毒（avian influenza virus,AIV）是一种重要的人兽共患病病原,严重制约养禽业的健康发展,并对公共卫生安全构成极大威胁。其中,H5（H5N1、H5N2、H5N6、H5N8等）和H7N9亚型高致病性禽流感病毒（highly pathogenic avian influenza virus,HPAIV）引起的高致病性禽流感（highly pathogenic avian influenza,HPAI）对我国养禽业危害巨大。通过实施强制免疫,疫情得到了控制,但在禽群中仍散状暴发,并出现多种新型病毒,防控形势依然严峻。本文总结了截至2021年9月我国禽类暴发H5和H7N9亚型HPAI的所有官方公布的疫情暴发事件以及监测数据,分析了其流行特点,以期为禽流感的预警和防控提供参考。     

兔抗鸡IgG-HRP酶标抗体的制备与检测

将经多种方法提纯的鸡IgG与从美国Sigma公司购买的纯鸡IgG产品进行对比研究证实 ,用辛酸沉淀 50 %SAS 离子交换层析方法可获得纯度很好的鸡IgG产物。运用该产物成功制备了兔抗鸡IgG抗血清以及抗鸡IgG重链抗血清。用辛酸沉淀 50 %SAS 35 %SAS盐析提纯的兔抗鸡IgG与用NaIO4 作用 1 6～ 2 0min的已氧化辣根过氧化物酶 (HRP)结合 6h,获得了优质可靠的兔抗鸡IgG HRP酶标抗体     

新城疫分子生物学诊断技术的研究进展

我国每年因各种禽病造成的经济损失高达数十亿元,其中新城疫(ND)占了近10%。尽管常规疫苗的使用已经降低了该病的毁灭性爆发,但并没有真正有效地控制住其流行,随着非典型新城疫的逐年增多,免疫鸡群的频繁发病以及由此引起的家禽生产性能降低等问题已引起人们的高度重视,对新城疫病毒     

RT-PCR技术在家禽传染病检测中的应用

传染性疾病已成为危害家禽业安全生产的主要因素,病毒性传染病变异性强、容易传播、难以控制;因此,建立快速、准确的检测方法对于病毒性传染病的防控非常重要。利用聚合酶链式反应(PCR)技术对病毒基因组进行诊断鉴定,与传统病毒检测方法相比具有快速、简便、特异性强的优势。目前,在常规PCR基础上已发展出套式PCR、实时荧光定量PCR、一步法多重PCR等,笔者对PCR技术在家禽病毒性传染病检测中的应用进行了分析与归纳,希望能对实验室研究和临床诊断提供帮助。