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将菠萝(Ananas comosus)愈伤组织经含有植物表达重组质粒(pUHA1-CYP1A1)的根癌农杆菌(LBA4404菌株)侵染后,在MS+3.0mg/LBA+2.0mg/LNAA+100μmol/LAS+8g/Lagar上共培养3d,转入选择培养基(MS+3.0mg/LBA+2.0mg/LNAA+20mg/LKm+400mg/LCarb+8g/Lagar)上培养约10d后开始分化出不定芽;28d后将绿色的抗Km不定芽转入MS+2.0mg/LNAA+30mg/LKm+300mg/LCarb+8g/Lagar上再进行连续2轮选择,随后将绿芽转入MS+1.0mg/LIBA+30mg/LKm+8g/Lagar上生根,共获得95株Km抗性植株,转化率0.12%～2.69%.对其中部分的抗Km植株进行PCR检测,PCR阳性植株率达64.29%.经Southern杂交进一步证实,CYP1A1已整合到菠萝基因中.以琼脂为培养基凝固剂、共培养基中添加AS、增加选择次数和逐渐增加新一轮选择培养基中的Km质量浓度等是根癌农杆菌介导菠萝愈伤组织获得转基因植株的重要条件. 相似文献
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菠萝叶基愈伤组织诱导体细胞胚 总被引：6，自引：1，他引：6
以菠萝[Ananascomosus(L.)Merr.]吸芽上的叶基部组织为材料,研究了2,4-D、NAA、BA、TDZ在菠萝愈伤组织诱导体细胞胚过程中的影响。结果表明,2,4-D在体细胞胚诱导过程中起着极为重要的作用,其适宜浓度为5mg/L,适当浓度(1mg/L)的BA在降低畸形胚比例和增加体细胞胚发生率方面有重要作用,但BA也会促进愈伤组织分化不定芽;低浓度的TDZ与BA效果相似,在不同生长调节物质处理组合中,MS+0.01mg/LTDZ+5mg/L2,4-D培养基的体细胞胚发生率最高(97%)。低浓度NAA(2￣5mg/L)利于非胚性愈伤组织的增殖,而高浓度的NAA虽能促进体细胞胚发生,但这种体细胞胚很难继续增殖,在萌发时只生根不发芽。成熟体细胞胚在MS+0.2%活性炭上30d时的转株率为22.7%。 相似文献
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根癌农杆菌介导反义ACC合成酶基因对枣树的转化 总被引：10，自引：0，他引：10
以枣树鲜食品种鸡蛋枣为材料，通过根癌农杆菌介导ACC合成酶反义基因转化．得到了转基因植株．预培养1d的枣树幼嫩茎段经根癌农杆菌感染后共培养3d．转移至分化选择培养基MS(1／2NO3) 0．15mg／L NAA 1．75mg／L．ZT 10mg／L Km 500mg／L Carb上诱导产生不定芽，将抗Km不定芽先后在15mg／L Km的生长、增殖和生根培养基上继续选择．诱导成完整植株．经PCR检测从抗Km植株中选择到7株阳性植株．进一步经Southern杂交证实有6株外源基因已整合到了枣树基因组中．Real—time PCR定量检测表明，ACC合成酶反义基因在5株转基因植株中得到表达． 相似文献
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