小苍兰的离体培养

本文选用小苍兰茎尖、球茎和不同品种的花蕾为外植体,分别培养在不同的培养基上,取得了下列结果:1.将茎尖培养在 B_5+0.5mg/LBA 的培养基上,不仅会诱导出愈伤组织,而且也能分化出幼苗,幼苗分化率高达85.3%。2.培养在 MS+4mg/LBA 培养基上的球茎,有80%的外植体能诱导出愈伤组织。愈伤组织中有40%能分化出苗。3.16个品种的花蕾,在 MS+2mg/LBA+0.2mg/LNAA 的培养基上能诱导出愈伤组织,出愈范围为36.1～86.7%。当愈伤组织转入 MS+0.2mg/LBA+0.2mg/LBA+0.2～1.0mg/LNAA 的培养基上时,能分化不定芽和不定根,不定芽的分化率为2.3～86.4%。     

国槐植株再生技术研究

[目的]筛选国槐组织培养的最佳培养基,建立国槐植株再生体系。[方法]将灭过菌的国槐种子分别接种到4种无菌苗诱导培养基上,待苗长出2～4片真叶时,将叶、下胚轴、子叶分别接种于4种愈伤组织诱导培养基上,然后将子叶产生的愈伤组织分别接种在2种芽分化培养基中,再将继代培养获得的有效苗转入生根培养基,对国槐种子进行无菌苗萌发和植株再生的研究。[结果]培养基的激素配比对种子萌发的影响不大;6-BA能促进愈伤组织的产生;最适宜的胚状体诱导培养基为MS+2.0mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+0.5mg/LKT;芽诱导培养基MS+6-1.0mg/LBA+0.1mg/LNAA;生根培养基为1/2MS+0.3mg/LNAA,活性炭不利于国槐的生根培养。[结论]种子的萌发率与国槐的种子质量有关,与培养基的种类关系不大。子叶最适合诱导愈伤组织。     

菊花离体叶片快繁体系的建立

以菊花叶片为外植体,诱导植株再生,建立高效植株再生体系。结果在MS 2mg/LBA 0.2mg/LNAA的培养基上诱导出愈伤组织,在MS 3mg/LBA 0.1mg/LNAA的培养基上诱导出芽,并在1/2MS 0.6mg/LNAA的培养基上诱导出根,从而获得再生完整植株,生根的小苗在温室生长良好。     

农杆菌介导的BT基因导入甘蔗的研究

以甘蔗品种台糖22的胚性愈伤组织为试材,以MS 2.4-D1.5mg/ml培养基为基本培养基,进行愈伤组织的诱导。运用真空渗入与农杆菌相结合法,通过菌株LBA4404-Q5将来源于苏云金芽孢杆菌的抗虫基因(Bt基因)转入胚性愈伤组织细胞,经过卡那霉素(Km)的2次筛选培养,获得了抗性愈伤组织及再生植株。通过特异性引物的PCR扩增检测,在1.1kb处获得阳性条带,初步表明基因整合到甘蔗染色体基因组中。     

常绿萱草组培快繁技术研究

以常绿萱草茎尖为外植体,研究了不同消毒方式、培养基配方对于外植体生长的影响,并探索了最适于愈伤组织形成、不定芽增殖和生根的培养基配方。结果表明:在无菌条件下,用75%酒精消毒30S,再转入0.1%升汞溶液浸泡8分钟消毒效果最好;有利于外植体产生愈伤组织的培养基配方是MS+2.0mg/LBA+0.2mg/LNAA;适合愈伤组织诱导生芽培养基配方是MS+1.0mg/L2.4-D+1.0mg/LKT;适合幼苗生根的培养基配方是MS+NAA0.5mg/L+活性炭0.2mg/L。     

叶用芥菜细胞悬浮培养的初步研究

以叶用芥菜的子叶为外植体,对愈伤组织诱导和细胞悬浮培养的技术体系进行了研究。结果表明愈伤组织诱导的最适培养基为MS+0.3mg/LNAA+1.0mg/L6-BA+0.1mg/L2,4-D,愈伤组织最佳增殖培养基为MS+3.0mg/L6-BA+1.0mg/L2,4-D。悬浮培养过程中细胞生长曲线呈S型,培养2-10d达对数生长期。将小细胞团接种于MS+1.0mg/LNAA+3.0mg/L6-BA分化培养基上,继代两次后,分化出芽,分化芽在培养基MS+0.1mg/LNAA上诱导生根,形成小植株。     

甜魔芋愈伤组织诱导与植株再生研究

以甜魔芋球茎为外植体,进行愈伤组织诱导、芽分化及植株再生研究。结果表明：球茎在MS附加1.5mg／LBA和1．5mg／LNAA的培养基中,愈伤组织诱导率达100％;在MS附加1．0∽1．5mg/LBA和0．2mg/LAA分化培养基中,其分化率达90％以上;不定芽在生根培养基MS附加0．5mg／LBA和0．2mg/LNAA上,能100％生根形成完整的植株。     

甜魔芋愈伤组织诱导与植株再生研究

以甜魔芋球茎为外植体,进行愈伤组织诱导、芽分化及植株再生研究.结果表明:球茎在MS附加1.5 mg/LBA和1.5 mg/LNAA的培养基中,愈伤组织诱导率达100%;在MS附加1.0～1.5 mg/LBA和0.2mg/LNAA分化培养基中,其分化率达90%以上;不定芽在生根培养基MS附加0.5 mg/L BA和0.2 mg/LN从上,能100%生根形成完整的植株.     

超甜玉米转基因稳定高效再生体系的建立及转化植株PCR分析

为了通过对影响超甜玉米再生因素的研究,建立超甜玉米转基因再生技术体系,获得抗虫资源。以超甜玉米幼胚为愈伤组织诱导外植体,利用基因枪法将苏云金杆菌杀虫蛋白基因转化胚性愈伤组织,通过优化再生和生根培养条件建立了稳定、高效的超甜玉米转基因再生成株体系。结果表明,随着愈伤组织继代时间的延长,再生成苗率降低,再生成苗越难;除草剂Basta对愈伤组织筛选的最适质量浓度为8 mg/L,愈伤组织预分化的最适培养基为MS+40 g/L蔗糖+20 g/L甘露醇+5.0 mg/L ABA,最适的再生培养基为MS+20 g/L蔗糖+2.0 mg/L6-BA+0.1 mg/L NAA,生根培养基为1/2 MS+0.1 mg/L NAA,对生根不好的小苗附加0.1 mg/L NAA+2.0mg/L IBA或0.2 mg/L NAA+3.0 mg/L IBA可以促进生根,生根率达93%以上。对部分再生转化植株进行PCR分析,部分植株能够扩增出426 bp片段,与阳性对照大小相同。试验结果初步证明Bt基因已经导入到玉米植株中。     

根癌农杆菌介导反义ACC合成酶基因对枣树的转化

以枣树鲜食品种鸡蛋枣为材料，通过根癌农杆菌介导ACC合成酶反义基因转化．得到了转基因植株．预培养1d的枣树幼嫩茎段经根癌农杆菌感染后共培养3d．转移至分化选择培养基MS(1／2NO3) 0．15mg／L NAA 1．75mg／L．ZT 10mg／L Km 500mg／L Carb上诱导产生不定芽，将抗Km不定芽先后在15mg／L Km的生长、增殖和生根培养基上继续选择．诱导成完整植株．经PCR检测从抗Km植株中选择到7株阳性植株．进一步经Southern杂交证实有6株外源基因已整合到了枣树基因组中．Real—time PCR定量检测表明，ACC合成酶反义基因在5株转基因植株中得到表达．     

不同激素对补血草器官分化的影响

以补血草的带节花梗为材料,在离体条件下研究不同激素对花梗愈伤组织的诱导、不定芽分化、继代培养以及生根的影响,建立和优化离体再生体系,为补血草快速繁殖、种质资源保存以及遗传转化提供有效的途径和技术。结果表明,MS+6-BA 1.0 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L为补血草花梗愈伤组织诱导的最佳培养基,愈伤组织诱导率最高(89.2%),出愈速度最快(12 d),产生的愈伤组织颜色翠绿,质地紧密;不定芽诱导以MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L的效果最佳,诱导率为74.3%,平均每块愈伤组织诱导的不定芽数为3.6个;在NAA 0.1～0.2 mg/L+6-BA 1.5～2.0 mg/L时的继代增殖效果最好,分化率大于85%,使幼苗数增加3倍以上;生根培养以1/2 MS+IBA 1.0 mg/L+蔗糖20 g/L时的生根率最大,为100%。     

茅膏菜组织培养研究初报

[目的]探讨培养基组合对茅膏菜愈伤组织形成、分化和生长的影响。[方法]以好望角茅膏菜为试验材料,在10种培养基上进行繁殖,研究不同的培养基组合对茅膏菜愈伤组织形成、分化和生长的影响。[结果]茅膏菜幼叶在MS培养基上能形成愈伤组织,但在花宝一号＋BA 0.1~1.0 mg/L＋NAA 0.1~0.5 mg/L＋琼脂6.5 g/L＋蔗糖10~30 g/L培养基上有利于愈伤组织形成,特别是花宝一号＋BA 1.0 mg/L＋NAA 0.1 mg/L＋琼脂6.5 g/L＋蔗糖20 g/L时更有利于愈伤组织形成 在MS＋活性炭＋BA 0.1~1.0 mg/L＋NAA0.1~0.5 mg/L＋琼脂6.5 g/L＋蔗糖10~30 g/L培养基有利于茅膏菜愈伤组织的分化,特别是MS＋活性炭＋BA 1.0 mg/L＋NAA 0.2mg/L＋琼脂6.5 g/L＋蔗糖30 g/L培养基既有利于愈伤组织分化出芽,又有利于幼苗分化出根。[结论]该研究为茅膏菜的快速繁殖奠定了基础。     

花生茎尖组培和植株再生研究

以 0 .5mm以下的花生茎尖为外植体 ,在MS附加不同激素和有机物的培养基上进行诱芽和诱根培养 ,结果表明 :①在MS + 1.0mg/LBA + 1.0mg/LNAA培养基上愈伤组织和丛生芽发生率分别达到 90 .0 %和 80 .6% ;在 1/2MS(I) +MS(Ⅱ、Ⅲ、Ⅵ )+ 2 .0mg/LNAA + 0 .1mg/LBA培养基上生根率和单个外植体产根数分别达到 86.7%和 5 .1个。② 2 ,4 D可促进愈伤组织增生 ,但无诱根效果 ;烟酸和VB6 可促进丛生芽发生 ;NAA对促进生根和生芽均有效果。③不同基因型间诱导愈伤组织和丛生芽存在一定差异。茎尖经诱芽、诱根培养出完整植株 ,炼苗后移至室外能正常开花、结荚。     

菊花幼嫩花瓣愈伤组织的诱导和植株再生

以菊花幼嫩花瓣作为供体材料,ＭＳ作为基本培养基,在激素组合为６ＢＡ１～３ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ１ｍｇ／Ｌ或２,４ Ｄ１～３ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ１ｍｇ／Ｌ的范围内均能诱导出愈伤组织,但以ＭＳ附加６ＢＡ２ｍｇ／Ｌ和ＮＡＡ１ｍｇ／Ｌ的诱导率最高,可达１００％。将愈伤组织转移到ＭＳ＋６ＢＡ２ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０２ｍｇ／Ｌ的培养基上,分化芽的频率为７７８％。将３ｃｍ左右的茎段转移到不含激素的ＭＳ培养基或ＭＳ＋ＮＡＡ０１ｍｇ／Ｌ的培养基上,生根率可达９５％以上。     

薰衣草离体培养技术研究

以薰衣草(Lavandula angustifolia)带芽茎段或顶芽为外植体,探讨不同激素种类与水平等对其愈伤诱导、不定芽增殖与不定根形成的影响,并筛选了薰衣草试管苗过渡移栽的适宜基质。结果表明薰衣草离体培养适宜的培养基分别为,不定芽启动培养基,MS+BA 1.0～2.0 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6.5 g/L;继代增殖培养基,MS+BA 1.0～2.0 mg/L+IBA 0.25 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6.5 g/L;生根培养基,White+IBA0.4 mg/L+蔗糖20 g/L+琼脂6.5 g/L或White+NAA 0.8 mg/L+蔗糖20 g/L+琼脂6.5 g/L。以等体积的泥炭与珍珠岩混合后作为基质驯苗,幼苗成活率可达96.9%。     

白三叶遗传转化体系的探讨

将白三叶Trifolium repens L.无菌种子吸胀15 h后,制备子叶分别放在含不同浓度配比激素的培养基上培养,同时测定白三叶子叶对卡那霉素(Kam)、头孢霉素(Cef)和羧苄青霉素(Carb)的敏感性,探索出适合子叶生长成苗的一套比较完整的体系。结果表明,用于白三叶子叶遗传转化的培养基为MS+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂+0.1 mg/L NAA+0.5 mg/L6-BA+20 mg/L Kam+250 mg/L Carb。抗性植株最佳生根培养基为MS+15 g/L蔗糖+8 g/L琼脂+0.2 mg/L NAA。通过本实验成功确立了白三叶遗传转化体系,为下一步转基因实验奠定了基础。     

四川竹根姜胚性愈伤组织诱导和植株再生

选用四川竹根姜的茎尖组织,诱导产生了胚性愈伤组织,建立了高频再生体系。筛选出了适于胚性愈伤诱导及扩增最佳培养基MSN+1.0 mg/L 2,4-D+0.2 mg/L KT+3.0%蔗糖+0.7%琼脂;胚性愈伤组织分化培养基MS+0.2 mg/L 2,4-D+5.0 mg/L BA+3.0%蔗糖+0.7%琼脂;根状茎形成培养基MS+3.0 mg/LBA+0.1 mg/L NAA+6.0%蔗糖+0.7%琼脂。在3.0%~6.0%的范围内蔗糖浓度越高越促进根状茎形成。     

不同培养基对秦党叶片及茎段培养的效应研究

试验研究了不同培养基对秦党叶片及茎段培养的效应。结果表明,在光照强度1600 lx,温度25℃的条件下,利用组织培养技术快速繁殖秦党时,适宜的外植体为幼苗的茎段。茎段培养时,诱导愈伤组织并促进分化的适宜培养基组分为:MS+2,4-D 0.2 mg/L+蔗糖20 g/L+琼脂8 g/L。仅促进芽生长适宜的培养基组分为:MS+BA2.0 mg/L+IAA1.0 mg/L+蔗糖20 g/L+琼脂8 g/L。仅诱导愈伤组织适宜的培养基组分为:MS+BA1.0 mg/L+IAA1.0 mg/L+蔗糖20 g/L+琼脂8 g/L。     

马铃薯茎段愈伤组织培养体系的优化

以克新12号、克新13号、东农303和早大白4种马铃薯试管苗茎段为材料,研究各品种的组织培养体系。结果发现,克新13号和克新12号的最适愈伤组织诱导培养基为MS+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂+2 mg/L 6-BA+1 mg/L 2,4-D;东农303为MS+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂+2 mg/L 6-BA+0.5 mg/L 2,4-D;早大白为MS+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂+2 mg/L 6-BA+0.5 mg/L 2,4-D。用上述最适诱导培养基培养,各品种的愈伤诱导率分别为100%,100%,100%和90%。克新13号愈伤组织分化的最佳培养基为MS+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂+4.0mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+1.0 mg/L GA3;克新12号和早大白为MS+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+1.0 mg/L GA3;东农303为MS+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂+2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/LNAA+1.5 mg/L GA3。用上述最适诱导培养基培养,各品种的分化率分别为80%,90%,100%,76.7%。     

灯盏花遗传转化中组织培养受体系统的研究

对灯盏花遗传转化中组织培养受体系统进行了研究,结果表明:使用MS+BA 0.2(mg/L,单位下同)+NAA 2.0的培养基,播种10 d的幼苗,0.5 cm×1.5 cm大小的真叶作为外植体,能在2周内形成愈伤组织;使用MS+BA0.5+NAA0.5培养基,附加30 g/L蔗糖,以真叶为外植体,能在2周内诱导不定芽形成;使用75μg/ml的氯霉素(Chl.)作为土壤农杆菌转化培养的选择压力,使用50μg/ml的庆大霉素(Gent.)作为转基因植株的选择压力,使用300μg/ml的头孢霉素(Cef.)作为土壤农杆菌转基因的抑菌抗生素,对灯盏花遗传转化效果最佳。