肺炎克雷伯氏菌强毒株的分离鉴定及16-23SrRNAITS序列分析

为确诊疑似仔猪肺炎克雷伯氏菌(K.pneumonia)感染,并研究其病原的致病性、耐药性、16-23SrRNA ITS系统进化特征,本研究从云南因肺炎、腹泻而大量死亡的仔猪中分离到1株革兰氏阴性短粗杆菌,命名为KP14013,对其进行生化鉴定、16SrRNA鉴定,研究其对小白鼠和仔猪的致病性,并对其16-23SrRNA ITS基因进行测序和遗传进化分析。结果显示,KP14013分离株生化特征与肺炎克雷伯氏菌相符,其16SrRNA与GenBank中23株肺炎克雷伯氏菌代表株之间的同源性均为99%,将KP14013鉴定为肺炎克雷伯氏菌。KP14013对小白鼠半数致死量(LD50)为3×101.8 CFU,腹腔注射3×108 CFU可使仔猪100%致死。16-23SrRNA ITS系统进化关系结果表明,KP14013与GenBank中收录的15株肺炎克雷伯氏菌形成进化树的一个分支,属于同一个亚群,它们之间的核苷酸同源性为98.4%~99.2%。本研究证实了肺炎克雷伯氏菌是该起仔猪腹泻大量死亡的病原;KP14013分离株为毒力极强菌株,具有多重耐药性,其16-23SrRNA ITS与GenBank中收录的肺炎克雷伯氏菌代表株之间核苷酸存在差异,可用于肺炎克雷伯氏菌菌株间的鉴别。     

广南县一起非典型性猪伪狂犬病的诊治

正猪伪狂犬病病毒(PRV)属于疱疹病毒科猪疱疹病毒属,是引起家畜和某些野生动物发病的传染病病毒[1],对猪的危害最大,每年给养猪业造成巨大的经济损失。随着人们对猪伪狂犬病的重视程度越来越高,猪伪狂犬病疫苗的推广应用,几乎所有养猪场都进行猪伪狂犬病疫苗免疫,因此,典型的猪伪狂犬病越来越少。然而由于疫苗质量高低不一,免疫程序不合理,生物安全体系不完善等原因,猪伪狂犬病野毒在云南养猪场时有存在。     

用黄曲霉毒素B1单抗介导免疫组化法检测雏鸭感染黄曲霉毒素的分布规律研究

【目的】（1）建立单抗介导的、能够对黄曲霉毒素AFB1进行亚细胞定位的免疫组化方法;（2）探明AFB1侵染和分布于雏鸭靶器官（细胞）规律,为阐明AFB1对雏鸭的致病机理提供基础实验数据,为AFB1感染人类提供研究模型。【方法】（1）利用AFB1单抗、免疫组化理论和方法,结合石蜡切片技术,建立检测感染雏鸭组织器官和细胞中AFB1方法;（2）7日龄樱桃谷鸭饲喂黄曲霉毒素（AFB1）含量为150 µg•kg-1的全价饲料,分别于6、12、24、48、72、96、120、144、168和192 h各剖杀2只,取心、肝、脾、肺、肾、脑、十二指肠、法氏囊、胸腺和胰腺等组织器官多聚甲醛固定、石蜡包埋,应用建立的单抗介导免疫组化对AFB1在感染雏鸭体内侵染的组织器官和细胞进行定位检测。【结果】（1）建立的单抗介导的免疫组化能够特异性检测到感染雏鸭组织中的AFB1,而对鸭病毒性肝炎病毒、鸭疫里默氏杆菌、鸭多杀性巴氏杆菌、鸭沙门氏菌和鸭大肠杆菌感染鸭组织呈现阴性反应;（2）雏鸭采食含AFB1饲料后,24 h可在肝脏和肾脏中检测到AFB1,随后在脾脏（48 h）、胰腺（96 h）、十二指肠（120 h）、心肌（144 h）及法氏囊（168 h）检测到AFB1,其中肝脏和肾脏的阳性结果最强;AFB1分布于肝脏肝窦及汇管区周围炎性反应带的肝细胞,肾脏肾小管、集合管上皮细胞以及肾小球毛细血管,脾脏白髓及炎性细胞,胰腺腺上皮细胞,十二指肠脱落的黏膜上皮细胞,心脏血管周围和心脏发生空泡变性的心肌纤维中;AFB1主要集中分布于细胞核内,而细胞膜和细胞浆内也有少量的分布。【结论】（1）单抗介导免疫组化能够特异检测AFB1感染雏鸭组织石蜡切片中的AFB1和亚细胞定位, 还可用于AFB1感染雏鸭的实验室诊断和甲醛固定组织的回顾性诊断;（2）AFB1可广泛侵害感染雏鸭各个组织器官,以肝脏和肾脏最为严重。AFB1主要蓄积于被感染的细胞核。     

云南奶（水）牛口蹄疫和布氏杆菌病血清学监测及防控措施

本文报告了云南奶（水）牛口蹄疫和布氏杆菌病血清学监测的结果,并在此基础上提出了相应的防控措施。2011年度,云南省现代农业（奶牛）产业技术体系奶牛疫病控制功能实验室在体系所属的2个综合试验站和4个区域推广站各示范场、养殖小区和养殖户采集奶牛、奶水牛血清样品共计311份。应用口蹄疫A型、亚洲Ⅰ型和O型免疫抗体液相阻断ELISA检测方法,检出口蹄疫O型抗体阳性数253份,阳性率81.35%;亚洲Ⅰ型抗体阳性数278份,阳性率89.39%;A型抗体阳性数110份,阳性率35.37%。应用口蹄疫3ABC抗体检测方法检出抗体阳性样品7份,阳性率2.25%。应用IDEXX牛布氏杆菌抗体检测方法检出布氏杆菌抗体阳性样品2份,阳性率0.64%。针对本次获得的口蹄疫和布氏杆菌病血清学监测结果,提出了相应的防控措施,强化奶牛和奶水牛犊牛免疫、跟踪监测和完善生物安全措施。     

一例人感染羊接触传染性脓疱皮炎的确诊

2013年6月6日,云南省江川县动物疫病预防与控制中心的一名兽医在保定可疑羊接触传染性脓疱皮炎发病羊时不慎被羊咬伤手指,10 d后在伤口愈合处形成丘疹,随后发展为水疱,最后形成结痂。随着痂皮的逐渐脱落,直至丘疹出现后1个多月感染病灶才完全愈合。经过对发病羊口唇痂垢及人手指丘疹、水疱液样品进行PCR、Real-time PCR及序列比对分析,2份样品均扩增出1225 bp的预期大小片段,Real-time PCR也扩增出标准S形曲线和Rn指数增长峰,2份病料测定出的序列（1133 bp）完全一致,与NCBI GenBank中的羊口疮病毒参考毒株NC-005336.1（1133/1133）对应序列的相似性达到100%,与AY386264.1（1115/1133）、AY386263.1（1114/1133）、HM133903.1（1113/1133）、KF837136.1（1110/1133）及普洱毒株PUER/YN/CHIA/2011（1113/1133）对应序列相似性达到98%,与DQ184476.1（1104/1133）对应序列相似性达到97%,与NCBI GenBank中同为副痘病毒属成员的伪牛痘参考毒株GQ329669.1（1052/1140）、GQ329670.1（1051/1140）对应序列的相似性达到92%,与牛丘疹性口炎病毒参考毒株AY386265.1（905/1130）的对应序列的相似性仅达到80%。由此,确诊此次病例为人感染羊传染性脓疱病毒。     

生物缓冲剂HEPES对促进口蹄疫抗原稳定性的研究

口蹄疫抗原在储存和疫苗制备过程中容易降解,影响疫苗效果。口蹄疫抗原的降解速度与维持液的pH值的稳定性有关,制备出pH稳定性强的维持液可提高口蹄疫疫苗质量。对生物缓冲剂HEPES进行研究,分别用含有和不含有HEPES的MEM维持液在BHK细胞上培养病毒,将病毒放在37℃温箱内,分别在0、24、48、72h取样,通过微量细胞中和试验检测病毒效价,并进行比较。结果表明,在37℃条件下,不含生物缓冲剂的病毒液TCID50下降幅度比含生物缓冲剂的病毒液大,72h时,前者毒价为零,后者TCID50为10-2.5。由此可知,HEPES可以有效地改善病毒培养液缓冲能力,促进病毒颗粒的稳定性。     

云南多重耐药猪源大肠杆菌的分离鉴定及其耐药机制初步研究

从云南省3个规模化猪场仔猪黄白痢病猪病例分离到7株革兰氏阴性小杆菌,用生理生化鉴定、药敏试验和致病性试验对分离菌株进行鉴定,并提取细菌的质粒,分析质粒与细菌耐药性之间的相关性。结果表明:7株分离株经生理生化试验鉴定为仔猪黄白痢大肠杆菌,对小白鼠有强致病性,分离株对15种抗生素表现为多重耐药,其中14耐1株、13耐2株、11耐2株、8和8耐以下2株,头孢类抗生素是治疗仔猪黄白痢的首选药物,表明云南猪大肠杆菌已经呈现出十分严重的耐药性。质粒图谱分析表明,4株分离株均携带分子量约为5000bp的一个质粒,而另外3株不携带任何质粒。质粒转化实验表明,分离株所携带的质粒为非耐药性质粒,与细菌耐药性无直接相关性。     

猪源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及其荚膜血清型鉴定

从病死母猪肺脏中分离到一株革兰氏阴性小杆菌,用生理生化鉴定、药敏试验、致病性试验和PCR鉴定方法对分离菌株进行鉴定,并用多杀性巴氏杆菌荚膜分型引物对分离株的荚膜血清型进行鉴定。结果表明:本菌为猪多杀性巴氏杆菌,对多种抗生素高度敏感,对小白鼠有强致病性;PCR扩增16SrDNA基因获得1415bp片段,分离株的16SrDNA核苷酸序列与多杀性巴氏杆菌(AY078999)的同源性为99%,因此该分离菌株被鉴定为致病性巴氏杆菌,命名为YN20110122株;本菌分离株为荚膜A型血清型多杀性巴氏杆菌。     

云南省生猪产业发展现状及可持续发展建议

通过收集云南省2012—2016年生猪存栏、出栏、猪肉产量、规模养殖情况、活猪价格、猪粮比及不同规模养殖盈利情况,分析了云南省作为西部地区的养猪大省生猪产业发展中存在的主要问题,提出了生猪产业可持续发展建议,以期为云南省生猪产业发展提供借鉴和参考。