动物防疫检疫信息一体化管理系统的建设

现代信息技术的不断发展带来了生产和生活方式的大变革,将数字技术运用到动物防疫检疫管理工作中是必然趋势,对于动物防疫检疫工作具有积极的推动作用。通过加强软件建设和信息流通等多个渠道构建起动物防疫检疫的信息一体化管理系统,从动物养殖及相关产品的生产和流通等多个环节推动信息化管理,一方面能够有效提高动物防疫检疫的工作效率,同时有利于保障居民的健康生活,营造有序的市场经营环境。     

毛皮动物新冠病毒监测简报

2019新型冠状病毒病（COVID-19）给公共卫生安全带来巨大危害,但目前引起该病的新型冠状病毒（SARS-CoV-2）来源还未有定论。现有证据显示,SARS-CoV-2与分离自蝙蝠和穿山甲的 SARS-CoV-2病毒株同源性相近,表明蝙蝠和穿山甲可能作为SARS-CoV-2的中间宿主存在。目前,丹麦、荷兰和美国等国家已有人工饲养水貂及饲养场工作人员感染SARS-CoV-2的报道。试验研究显示,SARS-CoV-2可在雪貂上呼吸道复制,且雪貂对SARS-CoV-2高度易感,表明雪貂可作为一种SARS-CoV-2感染和传播的动物模型。2020年2—7月,本课题组对山东、吉林、辽宁、黑龙江等毛皮动物主要养殖省份的水貂样品进行SARS-CoV-2病原及抗体监测。利用WHO推荐的real-time RT-PCR检测方法,对328份水貂内脏组织及咽拭子样品进行检测,结果所有样品均为SARS-CoV-2阴性;采用北京万泰生物药业有限公司提供的SARS-CoV-2抗体检测ELISA试剂盒,对35份水貂血清样品进行抗体检测,结果样品中抗SARS-CoV-2抗体均为阴性。由于国内养殖多为密集型庭院养殖,养殖人员与水貂密切接触,且国外已有养殖场水貂大规模感染SARS-CoV-2的先例,为保障毛皮动物行业健康发展,此次监测重点对我国北方地区毛皮动物养殖场进行采样,结果并未发现毛皮动物携带SARS-CoV-2和针对SARS-CoV-2的抗体。这可能与目前我国人群的低SARS-CoV-2感染率和未有养殖场工人感染有关。本实验室已建立了检测毛皮动物及宠物的SARS-CoV-2抗原及抗体检测方法,在目前全球COVID-19疫情的严峻形势下,未来仍需对毛皮动物及宠物进行长期的SARS-CoV-2流行病学监测。     

水貂细小病毒NS1与VP2蛋白的原核表达及免疫原性分析

为了比较VP2和NS1两种蛋白的免疫原性,选择免疫原性较好的蛋白进行亚单位疫苗制备。本试验分别扩增了水貂细小病毒(mink enteritis virus,MEV)NS1与VP2基因,连接pET-32a表达载体并进行表达,对表达产物进行SDS-PAGE及Western blotting分析。以His-Bind亲和层析柱纯化目的蛋白,将纯化后的蛋白免疫小鼠,分析目的蛋白的免疫原性。经SDS-PAGE与Western blotting鉴定,表明NS1与VP2蛋白大小分别为83 和67 ku,且均具有生物学活性;免疫小鼠后,目的蛋白NS1和VP2均可诱导小鼠产生抗MEV特异性抗体,且VP2蛋白诱导小鼠产生的抗体滴度要高于NS1蛋白。与NS1蛋白比较,VP2蛋白更适合亚单位疫苗的制备。     

犬细小病毒CPV-BJ03/17株分离鉴定及VP2基因遗传进化分析

为了研究当前犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)国内流行株的遗传变异情况,试验从北京某宠物基地采集疑似CPV感染死亡犬的肠道组织,无菌处理病料后,用F81细胞进行病毒培养,通过电镜形态学观察、血清学、分子生物学和攻毒试验进行鉴定。结果表明,病毒在F81细胞上出现明显的细胞病变(CPE),电镜观察可见直径20nm左右的病毒粒子,血凝效价1∶256,PCR鉴定在570bp处有特异性条带,证明分离出1株CPV,命名为CPV-BJ03/17。全基因组测序分析表明,病毒基因组全长4 620bp,提交GenBank,登录号为:MF134808;该毒株与广东(SC02/2011)、深圳(CPV-s5)和甘肃(CPV-LZ1)等地的分离株亲缘关系较近,核苷酸同源性均为99.7%。VP2氨基酸序列分析表明,CPV-BJ03/17分离株确定为New CPV-2a亚型,主要氨基酸位点与近期分离株BJ15-1等相比无明显变化。动物回归试验表明,CPV-BJ03/17为CPV强毒株。本研究分离出1株CPV强毒株,通过比较CPV的流行情况和遗传变异规律,为CPV的疾病治疗及疫苗研究提供参考。     

犬细小病毒CPV-2c型亚洲株分离鉴定及VP2基因序列分析

为探明北京某犬场犬的死亡原因,从患有肠道出血的犬肛拭子中分离出1株犬细小病毒,试验通过PCR、血凝和间接免疫荧光试验方法对毒株进行鉴定,并对VP2基因进行克隆测序和序列分析,确定其遗传分支。结果表明,该分离株属于犬细小病毒CPV-2c型,命名为CPV-BJ21株。应用犬细小病毒单克隆抗体进行间接免疫荧光检测,结果为阳性;基因序列分析表明,分离株与犬细小病毒为同一进化分支,VP2基因核苷酸序列与中国四川的CPV-2c(MH476581.1)同源性达99%,与亚洲分离的犬细小病毒之间亲缘关系较近。VP2氨基酸序列在第A5G、S297A、D426E位出现了氨基酸突变;在F81细胞上传3代后,病毒液的血凝效价稳定于210。本研究可为犬细小病毒的流行情况及新疫苗的研究提供参考依据。     

犬细小病毒CPV-BJ03/17株分离鉴定及VP2基因遗传进化分析

为了研究当前犬细小病毒（canine parvovirus,CPV）国内流行株的遗传变异情况,试验从北京某宠物基地采集疑似CPV感染死亡犬的肠道组织,无菌处理病料后,用F81细胞进行病毒培养,通过电镜形态学观察、血清学、分子生物学和攻毒试验进行鉴定。结果表明,病毒在F81细胞上出现明显的细胞病变（CPE）,电镜观察可见直径20 nm左右的病毒粒子,血凝效价1：256,PCR鉴定在570 bp处有特异性条带,证明分离出1株CPV,命名为CPV-BJ03/17。全基因组测序分析表明,病毒基因组全长4 620 bp,提交GenBank,登录号为：MF134808;该毒株与广东（SC02/2011）、深圳（CPV-s5）和甘肃（CPV-LZ1）等地的分离株亲缘关系较近,核苷酸同源性均为99.7%。VP2氨基酸序列分析表明,CPV-BJ03/17分离株确定为New CPV-2a亚型,主要氨基酸位点与近期分离株BJ15-1等相比无明显变化。动物回归试验表明,CPV-BJ03/17为CPV强毒株。本研究分离出1株CPV强毒株,通过比较CPV的流行情况和遗传变异规律,为CPV的疾病治疗及疫苗研究提供参考。     

蓝狐细小病毒分离鉴定及VP2基因遗传进化分析

为了鉴定从蓝狐粪便中分离的病毒是否为细小病毒,试验采用病毒培养、电镜观察、中和试验、间接免疫荧光试验和分子生物学试验对其进行鉴定。结果表明:分离毒株在F81细胞中培养96 h后出现细胞病变(CPE);电镜观察可见直径为20 nm左右的病毒粒子;该病毒能被水貂肠炎细小病毒(MEV)阳性血清中和;PCR检测可扩增得到大小为570 bp的特异性条带,并证明分离毒株为细小病毒,将其命名为BFPV-HeB05/16;VP2全基因遗传进化与氨基酸序列分析显示,分离毒株BFPV-HeB05/16与MEV和BFPV处在同一分支上,具有较高的同源性,其关键氨基酸位点(80,300,426,564,568位)与BFPV和MEV保持一致。