一步法RT—PCR检测大缸奶在BVDV清除计划中的应用

本文利用一步法RT—PCR对28个牛场共计50份大缸奶样进行了BVDV核酸检测。在与全群抗原检测结果对比后发现．9个已知存有PI牛的泌乳牛群,其大缸奶核酸检测均为阳性,其余41个已知无PI牛的泌乳牛群．除1个因为存在急性感染牛造成阳性结果外,其余40个均为阴性。由此可见,本方法对与泌乳牛群内是否存在PI牛可以做出准确判断,其检测灵敏度和特异性均为100％,阳性预测结果可信度为0．9（9／10）,阴性预测结果可信度为0．98（40／41）。此外．针对50个大缸奶样进行的抗体检测表明,对于已感染牛场,泌乳牛群是否存在PI牛,抗体水平没有明显差异（OD1．12±0．12vsOD1．34±0．23,P〉0．05）。实验室条件下,本试验使用的RT—PCR方法对于阳性乳的最低检出限为50uL/头,因此理论上,最多可从1000份样品中检出阳性乳成分（总体积为50mL）。综上可知,本试验确立的RT—PCR方法灵敏度高、特异性强,可对泌乳牛群是否存在PI牛进行准确预测,相比大缸奶抗体检测更具实际指导意义,联合ELISA—Ag使用时还可大幅度降低泌乳牛群BVDV清除计划的检测成本,因而值得推广使用。     

BVDV对后备牛生长发育状况及繁殖性能的影响

牛病毒性腹泻/黏膜病(BVD/MD)是一种严重危害奶牛健康的病毒性传染病,其病原为牛病毒性腹泻病毒(BVDV)。BVDV感染牛后主要表现两种状态,即一过性感染(TI)和持续性感染(PI)。BVD在牛场的流行,可严重影响奶牛的生产性能、繁殖性能及牛群健康状况,对奶牛的影响可表现为流产、胎儿畸形、腹泻和免疫抑制等。怀孕母牛在特定妊娠阶段感染BVDV后,可娩出PI犊牛,部分PI犊牛能像正常犊牛一样生长发育至成年,但其生长发育状况和繁殖性能较同龄健康牛差异十分明显。为评价BVDV对后备牛生长发育及繁殖状况的影响,笔者采用ELISA方法检出北京地区28个规模化奶牛场141头BVDV-PI牛,并与同龄健康牛生长发育及繁殖数据相比较,结果表明,BVDV-PI后备牛各月龄段的体高、体重均低于健康后备牛,其首次输精日龄、配准日龄、耗精量明显高于健康后备牛,而一次情期受胎率显著低于健康后备牛。数据显示,BVDV严重影响后备牛的生长发育及繁殖状况。     

挤前药浴与挤后药浴对乳头的灭菌效果观察

针对国际上普遍采用的＂两次药浴,纸巾干擦＂的挤奶操作规程,设计试验以标准平板计数法对药浴前后的菌落总数进行统计,并通过灭菌效率对其效果进行评价。结果显示,本牧场现用的乳头药浴液可以迅速杀灭乳头表面的细菌,挤前药浴与挤后药浴的灭菌效率分别为78.8%、80.5%、80.1%和83.3%、80.3%、80.8%,显示了其较强的灭菌效果。本试验客观评价了牧场现用乳头药浴液的灭菌效果,表明其为科学合理的。本试验对实际生产起到了指导作用。     

一步法RT-PCR检测血清混合样品在BVDV清除计划中的应用

利用一步法RT-PCR对58份BVDV抗原阳性血清进行检测。试验证明,对OD450=0.3的标准血清,该方法的最低检出限为5μL/头,血清混合检测时至少可将60份OD450〉0.3的阳性血清等量混合。此外,RT-PCR与ELISA-Ag联合使用时,数学推导证明当混合样品为10～30个/份时,BVDV清除计划检测成本最低,相比单独使用ELISA-Ag,成本至少下降70%。综上,本试验确立的一步法RT-PCR灵敏度高,特异性好,联合ELISA-Ag使用,可大幅降低BVDV清除计划的检测成本,故值得推广使用。