狂犬病病毒SRV9克隆株核蛋白基因的克隆、表达与特性分析

根据已发表的狂犬病病毒核蛋白基因序列，设计并合成了一对引物，从SAD株驯化的SRV9。蚀斑株中提取病毒RNA，通过RT-PCR扩增出核蛋白的全长cDNA序列，测序结果显示，其序列与国外报道的SAD母源株序列一致。将核蛋白的cDNA克隆至原核表达载体pET-28b( )中，转化大肠杆菌BL21（DE3）plyss，于30℃1mmol/LIPTG条件下诱导表达，大肠杆菌菌体裂解产物经SDS-PAGE分析，在分子量约为56kDa处出现一新的蛋白带。和预期的目的蛋白分子量相符，Western-blotting检测表明，表达产物能与狂犬病病毒阳性血清发生特异性反应，出现单一反应带，扫描分析显示，表达产物占菌体总蛋白的23%，包涵体分离，纯化后，纯度达89%，上述结果为核蛋白在狂犬病基因免疫和免疫检测中的进一步应用奠定了基础。     

旋毛虫肌幼虫ES抗原基因TSPGⅡ在真核细胞中的表达

用限制性内切酶ＥｃｏＲⅠ和ＨｉｎｄⅢ从克隆载体ｐＵＴＳⅡ中工出一个０．９８８ｋｂＴＳＰＧⅡ基因,经ＥｃｏＲⅠ和ＢｓｔＸⅠ酶切鉴定;表达载体用相同的酶切,经琼脂糖凝胶电泳,分别回收ＴＳＰＧⅡ基因和ＰＳＶ．ＳＰＯＲＴⅠ表达载体,用Ｔ４ＤＮＡ连接酶定向接连,转化大肠杆菌感受态细胞,挑取重组,经ＥｃｏＲⅠ,ＢｓｔＸⅠ和ＨｉｎｄⅢ酶切鉴定,构建了重组表达质粒ＰＳＶ．ＴＳⅡ。利用脂质体作载体,将重且表达质粒转     

IBV 3株分离株的血清中和试验及S1基因同源性分析

通过血清中和试验、RT-PCR、核酸序列分析和S1基因的同源性分析，表明鸡传染性支气管炎病毒（IBV）BJ9601、HN9604与M41株的血清中和效价最高，其次为H120，TJ9602与试验毒株的血清中和效价较低。BJ9601、HN9604的S1基因与H120和H52的同源性很高，与H120和H52同在一个分支，其来源与H120或H52有密切关系。TJ9602的S1基因只与LDT3的同源性达到93％，共同形成一个分支，与其他毒株的同源性均在88％以下。血清中和试验和S1基因同源性之间存在较高的相关性，但并不能达到完全的吻合，即血清中和效价最高的毒株之间S1基因的同源性并不是最高的。在GenBank中登记的IBV中国大陆分离株的S1基因可分为3个基因群，其中Ⅰ群和Ⅱ群是主要的流行毒株，共有38个分离毒株，占90．48％。     

狂犬病病毒新型疫苗研究进展

狂犬病(Rabies)是一种由狂犬病病毒(RabiesVirus熏RV)引起的重要人畜共患传染病,一旦发病100%死亡,目前尚无有效的治疗方法,注射疫苗能有效预防狂犬病的发生。目前人用狂犬病疫苗主要是细胞培养疫苗,兽用疫苗主要是减毒活疫苗。人用狂犬病疫苗在细胞培养中增殖速度慢、滴度不高,要获得高效价的疫苗通常要经过纯化、浓缩。由于价格和产量的限制,主要用于暴露后免疫,兽用疫苗为减毒活疫苗,在注射后存在着发生狂犬病的潜在危险,因此,急需研制一种不含完整病毒颗粒、免疫原性好的疫苗。基因工程疫苗、合成肽、抗独特型抗体疫苗及基因疫苗正在…     

旋毛虫ES抗原结构基因TSPGⅡ重组表达质粒构建

用限制性内切酶ＥｃｏＲⅠ和ＨｉｎｄⅢ,从克隆载体ｐＵＴＳⅡ中切出一个０．９８８ｋｂＴＳＰＧⅡ基因,经ＥｃｏＲＩ和ＢｓｔＸＩ酶切鉴定,同时表达载体也用相同的酶进行酶切,经琼脂糖凝胶电泳,分别回收ＴＳＰＧⅡ基因和ｐＳＶ·ＳＰＯＲＴⅠ表达载体,用Ｔ４ＤＮＡ连接酶定向连接,转化大肠杆菌感受态细胞,挑取重组子,经ＥｃｏＲⅠ,ＢｓｔＸⅠ和ＨｉｎｄⅢ酶切鉴定,构建了重组表达质粒ｐＳＶ·ＴＳⅡ．     

狂犬病病毒糖、核蛋白基因疫苗的构建及在小鼠的免疫试验

分别以 p IRES1neo和 p VAX1为载体 ,构建了以狂犬病病毒糖蛋白和核蛋白为目的基因的基因疫苗单或双基因表达载体。以司苯 -甘油作为包裹剂 ,按 1μg DNA用 0 .5μL司苯 -甘油比例混合 ,将各表达载体制成 DNA疫苗 ,进行小鼠免疫试验。免疫共分 p IRES1neo、p IG- neo、p IN- neo、p IGN、p IG- neo p IN- neo、p VAX1、p VG、p VN和 p VGN9个试验组 ,每只小鼠于后肢胫前肌每侧接种基因疫苗 5 0μL (0 .5 g/ L ) ,共免疫 3次 ,间隔 14 d。通过间接 EL ISA和细胞中和指数测定分别检测免疫应答水平。结果显示 ,1免疫 3次后 ,所有试验组抗体阳转率 10 0 % ;2第 3次免疫后 14 d检测 ,抗体水平显著上升 ;3以 p IRES1neo为载体构建的基因疫苗免疫效果普遍优于以 p VAX1为载体构建的基因疫苗 ,其中含有糖蛋白 /核蛋白双基因共表达载体 p IGN免疫组的抗体水平均高于其他试验组 ;4以 7.5个 L D50 的 CVS强毒肌肉攻毒 ,保护率达 89%。通过以上试验证明 ,p IGN是用于本动物免疫试验的最佳 DNA疫苗。     

微量元素硒、维生素E在乳牛健康中的作用

微量元素硒（Se）和维生素E是机体组织和细胞抗氧化物的重要组分，同β一生育酚，VC、锌、铜一样，都具有保持生物机体中低浓度活性氧化物的功能。世界上许多重要牧区的土壤中都缺乏Se，在这些土壤中种植的饲草不能提供动物日粮所需要的Se，在饲喂过程中，若不补加VE则可造成多种维生素的缺乏症，尤其VE的缺乏症更为常见，泌乳母畜多发生于围产期。在泌乳期缺乏VE和Se其中之一，都会使乳房炎发病率升高，病情加重，严重影响动物机体免疫功能及其健康状况。1Se、VE的生理生化功能Se在动物机体组织中分布较广，生理学上的重要性在于它…