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[目的]制备H9N2亚型禽流感病毒单克隆抗体和鉴定表位。[方法]选取H9N2亚型禽流感病毒(AIV)WD-1株的纯化抗原免疫BALB/c小鼠,对获得2株抗H9N2亚型禽流感病毒的特异性单抗4C10和6E3表位进行鉴定。[结果]单抗4C10和6E3分别属于IgG1和IgG2b亚型,ELISA检测效价分别为1∶10~3和1∶10~5;HI效价分别为2~(15)和2~(14);2株单抗均具有鸡胚中和活性。利用噬菌体展示表位技术对2株单抗的抗原表位进行鉴定,结果显示均为针对HA蛋白的1个线性表位。[结论]该研究为禽流感病毒快速诊断方法的建立提供了依据。 相似文献
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建立了一种检测鸡传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus, IBV)抗体终点滴度(end-point titer, ET)的间接ELISA方法，以应用于监测鸡免疫疫苗或者感染野毒后的抗体。以大肠杆菌表达的IBV核衣壳(N)蛋白作为包被抗原，以SPF鸡血清和感染IBV的SPF鸡血清分别作为阴性血清和阳性血清对照，优化确定出ELISA的各项技术参数。对66份SPF鸡血清进行测试，确定了阴、阳性S/P临界值为0.385。特异性试验表明包被抗原与其他常见病原的阳性血清均不发生交叉反应，批内和批间重复性试验的变异系数均小于10.00%。选取了50份临床血清样品，通过阳性-阴性阈值(positive negative threshold, PNT)基线确定ET值，建立了固定血清稀释倍数(1∶500)处S/P值与ET的线性回归方程，相关系数(R2)为0.959 3(P<0.000 1)。通过检测2个商品鸡群在1～49日龄不同时间点采集的461份血清样本，比较了建立的IBVN-ELISA方法与IDEXX公司提供的商品化试剂盒。本研究建立的I... 相似文献
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本研究旨在建立一种检测鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)抗体的间接ELISA方法，结合HI试验，为MG感染的监测和净化提供一套有效的组合技术方案。以原核表达的VlhA 3.03重组蛋白(rVlhA)作为包被抗原，使用单一稀释法构建了关于血清抗体滴度与1∶500血清稀释度处S/P值的回归方程lg(抗体滴度)=1.257×lg(1∶500处S/P值)+3.709,R2=0.917 6,S/P临界值为0.32,临界滴度是1 200。经验证，rVlhA-ELISA方法具有良好的特异性、重复性，最低能检出1∶2 000稀释的阳性血清。选择国内MG分离株SH/2020-1作为血凝抑制抗原建立HI试验方法。使用rVlhA-ELISA方法联合HI试验进行血清样品检测，IDEXX-MG方法作为对照，借助RT-qPCR方法监测MG感染情况。结果表明rVlhA-ELISA方法和IDEXX-MG监测的血清抗体趋势与HI复核结果均一致；rVlhA-ELISA与HI联合判定结果与IDEXX-MG符合率可达91.53%。上述结果显示，本研究建立的rVlhA-E... 相似文献
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