核盘菌γ-谷氨酰磷酸还原酶基因SsGPR1的功能分析

【目的】γ-谷氨酰磷酸还原酶是真菌脯氨酸合成途径中的一个关键性酶,本研究旨在对核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)γ-谷氨酰磷酸还原酶编码基因SsGPR1进行沉默,并对沉默转化子菌丝生长、菌核形成和致病力等表型进行研究,为揭示核盘菌的生长发育与致病机理打下基础,并为作物菌核病的绿色防控提供线索。【方法】通过BLAST进行蛋白同源比对分析,并利用MEGA 5.0软件构建蛋白进化树。通过实时荧光RT-PCR检测SsGPR1在核盘菌菌丝生长、菌核发育和萌发的各个阶段以及致病不同时期的表达模式。根据RNA干扰原理构建SsGPR1的沉默载体,通过PEG介导原生质体转化的方法将沉默载体转入到野生型核盘菌菌株1980中。利用实时荧光RT-PCR鉴定基因沉默转化子,对沉默转化子的菌丝形态、生长速度和菌核形成等表型进行观察,并测定沉默转化子在氧化胁迫条件下的菌丝生长。将沉默转化子分别接种至活体油菜叶片和拟南芥植株,观察并测量病斑大小。通过酸性茚三酮法对沉默转化子中的游离脯氨酸进行测定。【结果】核盘菌SsGPR1全长1 454 bp,编码449个氨基酸,在氨基酸H~(10)-N~(426)处含有谷氨酰磷酸还原酶结构域。同源比对发现SsGPR1蛋白与灰葡萄孢(Botrytis cinerea)的BC1G_13183蛋白和白霉病菌(Sclerotinia borealis)的SBOR_2215蛋白相似性最高,氨基酸序列一致性分别达95%和94%,系统进化树结果表明三者聚为一个小的分支。SsGPR1在核盘菌菌丝生长时期的表达量较高,在菌核不同发育阶段表达量相近,但均低于菌丝生长时期。SsGPR1在致病时期表达量不断升高,在接种后9 h表达量最高。将SsGPR1基因沉默载体pSIGPR1导入到核盘菌野生型菌株中,并通过实时荧光RT-PCR检测不同转化子中SsGPR1的表达水平,结果表明SiGPR1-104和SiGPR1-149为SsGPR1基因沉默转化子。沉默转化子在PDA培养基上形成的菌核数量及均重与野生型菌株无显著性差异,且菌核均能萌发形成子囊盘,但菌丝生长稠密,生长速度显著下降。在含有H_2O_2的培养基中,SsGPR1基因沉默转化子菌丝生长受到更强的抑制,表明沉默转化子对氧化胁迫更加敏感。SsGPR1基因沉默转化子在活体油菜叶片和拟南芥植株上能引起发病,但病斑面积减小,表明沉默转化子致病力减弱。SsGPR1基因沉默转化子菌丝中的游离脯氨酸含量与野生型菌株相比无显著差异。【结论】SsGPR1与核盘菌的生长和菌丝形态相关,且参与核盘菌对氧化胁迫的抵御及致病过程。     

对加快肃南县细羊毛标准化产业示范区建设的思考及建议

本文对肃南县细羊毛产业发展现状做了介绍,分析了该县细羊毛产业发展中存在的问题,并提出了肃南县细羊毛标准化示范区建设的优势及建议。     

核盘菌几丁质酶基因家族分析与表达特性研究

核盘菌菌核以子实体形式萌发是作物菌核病病害循环中关键性的一环,研究菌核子实体萌发分子机理将为菌核病的安全控制提供线索.该研究通过生物信息学方法对核盘菌几丁质酶基因家族进行分析,并利用实时荧光RT-PCR对其在菌核子实体萌发阶段的表达进行探讨.生物信息学分析表明核盘菌中共有12个基因编码假定的几丁质酶,它们均具有GH18结构域,部分蛋白还具有几丁质结合结构域和纤维素结构域;除SS1G_11212外其余蛋白均为亲水性蛋白;亚细胞定位预测表明其中10个假定几丁质酶位于胞外,其余2个分别位于细胞核和细胞质中.通过构建系统发育树分析发现假定几丁质酶可以分为2大类,其中3个与酵母几丁质酶CTS1归为一类,其余9个与CTS2归为另一类.除SS1G_00773外,其余11个几丁质酶基因在核盘菌菌核子实体萌发过程中表达量均有变化,推测几丁质酶家族蛋白可能参与核盘菌菌核子实体萌发过程.     

肃南县牦牛导入大通牦牛血液复壮改良技术试验

为充分发挥肃南牦牛资源优势,挖掘本品种遗传潜力,改变肃南牦牛生产性能偏低的现状,培育肃南牦牛优良品系及其复壮良种,提高肃南牦牛的综合生产力和经济效益。本文就肃南牦牛引入大通牦牛复壮改良进行了试验,根据试验测试,用大通牦牛对肃南牦牛复壮改良,其后代具有生长发育快、体质结实、耐高寒、耐粗牧和抗逆性强的良好适应能力和稳定的遗传繁殖能力。     

羔羊断尾引发破伤风的诊治

1发病情况 2008年5月,肃南县康乐乡康丰村牧民贺某饲养的绵羊,对45只羔羊断尾时,采用自制烙铁钳火烧断尾,断尾后未注射破伤风抗毒素,一周后,羔羊出现不同程度的肌肉僵硬、起卧不便、运步困难症状,12d后所产45只羔羊全部发病,临床药物治疗无效,18d后发病羔羊全部陆续死亡,发病率和死亡率均达100％。     

日粮中添加厚朴提取物对湖羊生长性能、瘤胃发酵及血清生化指标的影响

试验旨在研究厚朴提取物对湖羊生长性能、瘤胃发酵及血清生化指标的影响。选取72头健康、体重相近的湖羊随机分为4组，每组3个重复，每个重复6只羊。A组（对照组）、B组、C组、D组分别在基础日粮中添加0、50、100、150 mg/kg厚朴提取物。试验期56 d。结果显示，与对照组相比，C组湖羊末重、平均日采食量显著升高（P<0.05）；各试验组湖羊的平均日增重显著升高（P<0.05），料重比显著降低（P<0.05）。与对照组相比，C组、D组湖羊瘤胃中氨态氮含量显著降低（P<0.05），各试验组湖羊瘤胃中丁酸含量显著升高（P<0.05）。与对照组相比，试验组湖羊血清超氧化物歧化酶（SOD）活性显著升高（P<0.05），丙二醛（MDA）含量显著降低（P<0.05）,C组、D组湖羊血清免疫球蛋白G (IgG)含量显著升高（P<0.05）,D组湖羊血清中免疫球蛋白A(IgA)含量显著升高（P<0.05），肿瘤坏死因子-α (TNF-α)含量显著降低（P<0.05），甘油三酯（TG）含量显著降低（P<0.05）。研究表明，日粮中添加厚...     

甘肃高山细毛羊产业发展现状及建议

细毛羊是肃南裕固族自治县畜牧业发展中科技含量最高、发展潜力最大、生态功能最优的家畜品种。近年来受毛肉价格倒挂、劳动力减少等因素的影响，肃南县细毛羊饲养量下降了24%。为发展细毛羊产业和保护优质种质资源，笔者通过调研，从加强政策扶持、强化生态安全、加快良种繁育、加大产品研发和重视品牌建设5个方面提出推动肃南县细毛羊产业高质量发展的建议。