核盘菌γ-谷氨酰磷酸还原酶基因SsGPR1的功能分析

【目的】γ-谷氨酰磷酸还原酶是真菌脯氨酸合成途径中的一个关键性酶,本研究旨在对核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)γ-谷氨酰磷酸还原酶编码基因SsGPR1进行沉默,并对沉默转化子菌丝生长、菌核形成和致病力等表型进行研究,为揭示核盘菌的生长发育与致病机理打下基础,并为作物菌核病的绿色防控提供线索。【方法】通过BLAST进行蛋白同源比对分析,并利用MEGA 5.0软件构建蛋白进化树。通过实时荧光RT-PCR检测SsGPR1在核盘菌菌丝生长、菌核发育和萌发的各个阶段以及致病不同时期的表达模式。根据RNA干扰原理构建SsGPR1的沉默载体,通过PEG介导原生质体转化的方法将沉默载体转入到野生型核盘菌菌株1980中。利用实时荧光RT-PCR鉴定基因沉默转化子,对沉默转化子的菌丝形态、生长速度和菌核形成等表型进行观察,并测定沉默转化子在氧化胁迫条件下的菌丝生长。将沉默转化子分别接种至活体油菜叶片和拟南芥植株,观察并测量病斑大小。通过酸性茚三酮法对沉默转化子中的游离脯氨酸进行测定。【结果】核盘菌SsGPR1全长1 454 bp,编码449个氨基酸,在氨基酸H~(10)-N~(426)处含有谷氨酰磷酸还原酶结构域。同源比对发现SsGPR1蛋白与灰葡萄孢(Botrytis cinerea)的BC1G_13183蛋白和白霉病菌(Sclerotinia borealis)的SBOR_2215蛋白相似性最高,氨基酸序列一致性分别达95%和94%,系统进化树结果表明三者聚为一个小的分支。SsGPR1在核盘菌菌丝生长时期的表达量较高,在菌核不同发育阶段表达量相近,但均低于菌丝生长时期。SsGPR1在致病时期表达量不断升高,在接种后9 h表达量最高。将SsGPR1基因沉默载体pSIGPR1导入到核盘菌野生型菌株中,并通过实时荧光RT-PCR检测不同转化子中SsGPR1的表达水平,结果表明SiGPR1-104和SiGPR1-149为SsGPR1基因沉默转化子。沉默转化子在PDA培养基上形成的菌核数量及均重与野生型菌株无显著性差异,且菌核均能萌发形成子囊盘,但菌丝生长稠密,生长速度显著下降。在含有H_2O_2的培养基中,SsGPR1基因沉默转化子菌丝生长受到更强的抑制,表明沉默转化子对氧化胁迫更加敏感。SsGPR1基因沉默转化子在活体油菜叶片和拟南芥植株上能引起发病,但病斑面积减小,表明沉默转化子致病力减弱。SsGPR1基因沉默转化子菌丝中的游离脯氨酸含量与野生型菌株相比无显著差异。【结论】SsGPR1与核盘菌的生长和菌丝形态相关,且参与核盘菌对氧化胁迫的抵御及致病过程。     

重庆地区致病疫霉交配型测定

通过对峙培养在RSA和RTA上对重庆地区主要马铃薯和番茄产区的致病疫霉交配型进行了测定。结果显示,分离自重庆地区8个县(区)的186个致病疫霉菌株均为A1交配型,没有检测到A2交配型。这一结果表明该地区的致病疫霉仍以A1交配型为主。     

马铃薯晚疫病病菌对四种杀菌剂的交互抗性

通过测定甲霜灵敏感菌株和抗性菌株对甲霜灵、恶霜灵、霜脲氰、薯瘟锡的抗药水平和抗药类型以确定致病疫霉对此 4种内吸性杀菌剂的交互抗性关系。结果表明 ,致病疫霉对甲霜灵、恶霜灵、薯瘟锡三者间具有正交互抗性 ,此 3种药剂与霜脲氰间无交互抗性关系     

贵州省六盘水市马铃薯癌肿病综合防治技术

马铃薯是六盘水市的主要粮食作物,近几年来播种面积逐年扩大,播种面积已达5万hm2,其产量位居第三位。马铃薯癌肿病的发生和扩展蔓延,给六盘水市马铃薯生产带来严重威胁,已引起了各级政府的高度重视。从1998年起,对该病害进行了发生和防治研究,并取得一定成效,2004年发生面积已下降到85hm2。1病害分布及危害马铃薯癌肿病主要发生在冷凉潮湿的山区,在国内已知四川省、云南省和贵州省有发生。其中四川省分布在凉山、甘孜、雅安、乐山等市(州)的17个县;云南省分布在昭通市的5个县;贵州省分布在毕节市的赫章县、威宁县和六盘水市的钟山区大湾镇。…     

农业植物病理学实践教学模式改革探析

农业植物病理学是植物保护专业的核心课程,室内实验及生产实习是整个课程实践教学的重要组成部分。为提高该课程的实践教学质量,从理论结合实际出发,结合教学目标和实践目的,对农业植物病理学的实践教学内容、形式及师资队伍建设等进行改革探讨。本文分析了当前课程实践教学部分存在的一些问题,提出了相应的改革措施,以期为今后完善教学提供参考,从而培养符合社会需求的专业人才。     

新型杀菌剂防治水稻旱育秧苗病试验简讯

水稻旱育稀植栽培,是川、渝水稻增产显著的农业技术。但是,以立枯丝核菌（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａｓｏｌａｎｉ）为主的苗床期病害危害严重。为筛选防治水稻旱育秧苗期病害的新型杀菌剂,我们通过室内和田间药剂浸种试验,从发芽势、发芽率、田间出苗率、相对防效和有无药害...     

重庆地区马铃薯晚疫病菌(Phytophthora in festans)对甲霜灵抗性及抗性水平测定

20 0 1年从北碚、云阳、开县、万州、巫溪和忠县等地采集马铃薯晚疫病病叶 ,共分离得 94株致病疫霉。用生长速率法测定其对甲霜灵的抗性和抗性水平 ,结果表明 :2 0 2 %的菌株表现为抗性 ,11 7%的菌株表现为中抗 ,6 8 1%的菌株表现为敏感 ;以菌株PBB 110 2为敏感对照 ,所测定的 2株抗性菌株的抗性水平达 10 6倍以上 ,各地菌株抗性表现与菌株来源地的施药水平密切相关 ,并对抗药性不同的地区提出了不同的用药策略     

水稻稻曲病有效药剂筛选及药效评价

通过对水稻稻曲病进行室内毒力测定与田间药效试验,筛选出防治效果较好的杀菌剂。采用菌丝生长速率法测定9种杀菌剂对水稻稻曲病菌的室内毒力,并进行7种杀菌剂的田间药效试验。氟环唑、吡唑醚菌酯、丙硫菌唑、嘧菌酯、丙环唑、咪鲜胺、戊唑醇的EC₅₀值小于0.20 μg/mL,抑菌效果较好。田间药效试验中,430 g/L戊唑醇SC 96.75 g a.i./hm²、125 g/L氟环唑SC 84.4 g a.i./hm²、250 g/L嘧菌酯SC 225.0 g a.i./hm²的防效最好,防效分别为83.59%、82.77%、81.13%。戊唑醇、氟环唑和嘧菌酯对水稻稻曲病具有良好的防效,可作为该病的有效防治药剂。     

致病疫霉对甲霜灵抗性及抗性水平测定

2000年和2001年从璧山、沙坪坝采集番茄晚疫病病叶和病果,北碚、云阳、开县、万州和忠县采集马铃薯晚疫病病叶,共分离得136株致病疫霉.用生长速率法测定其对甲霜灵抗性和抗性水平,结果表明:49.3%的菌株表现为抗性,9.5%的菌株表现为中抗,41.2%的菌株表现为敏感;以菌株PBB-1102为敏感对照,所测定的4株抗性菌株的抗性水平达106倍以上,各地菌株抗性表现与菌株来源地的施药水平密切相关,并对抗药性不同的地区提出了不同的用药策略.     

假单孢菌20#-5菌株代谢产物对马铃薯晚疫病菌的抑制作用

为了深入研究抗生菌假单胞菌20#-5菌株的有关性状，采用固体平板抑菌法调查了其代谢产物的抗菌谱，用甲醇浸提和色谱分离法对其活性成分进行了分离纯化，并初步优化了其发酵条件。结果表明，该菌的代谢产物在固体培养基上对马铃薯晚疫病菌、苏云金芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、蜡质芽孢杆菌等有较强的抑制作用，抑菌直径大于20mm；对耶尔森氏菌有微弱的抑制作用，抑菌直径小于10mm；对小麦赤霉病菌、柑橘溃疡病菌、亚利桑那沙门氏菌、克雷伯氏菌等没有抑制作用。浓缩液经AcA202凝胶过滤和C-18反相色谱分离，结果显示该菌代谢产物中有多种抗菌活性成分。该菌株的最佳发酵条件是100ml的三角瓶中装10ml初始pH8．0的LB培养液，28℃摇床发酵4天。