核盘菌γ-谷氨酰磷酸还原酶基因SsGPR1的功能分析

【目的】γ-谷氨酰磷酸还原酶是真菌脯氨酸合成途径中的一个关键性酶,本研究旨在对核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)γ-谷氨酰磷酸还原酶编码基因SsGPR1进行沉默,并对沉默转化子菌丝生长、菌核形成和致病力等表型进行研究,为揭示核盘菌的生长发育与致病机理打下基础,并为作物菌核病的绿色防控提供线索。【方法】通过BLAST进行蛋白同源比对分析,并利用MEGA 5.0软件构建蛋白进化树。通过实时荧光RT-PCR检测SsGPR1在核盘菌菌丝生长、菌核发育和萌发的各个阶段以及致病不同时期的表达模式。根据RNA干扰原理构建SsGPR1的沉默载体,通过PEG介导原生质体转化的方法将沉默载体转入到野生型核盘菌菌株1980中。利用实时荧光RT-PCR鉴定基因沉默转化子,对沉默转化子的菌丝形态、生长速度和菌核形成等表型进行观察,并测定沉默转化子在氧化胁迫条件下的菌丝生长。将沉默转化子分别接种至活体油菜叶片和拟南芥植株,观察并测量病斑大小。通过酸性茚三酮法对沉默转化子中的游离脯氨酸进行测定。【结果】核盘菌SsGPR1全长1 454 bp,编码449个氨基酸,在氨基酸H~(10)-N~(426)处含有谷氨酰磷酸还原酶结构域。同源比对发现SsGPR1蛋白与灰葡萄孢(Botrytis cinerea)的BC1G_13183蛋白和白霉病菌(Sclerotinia borealis)的SBOR_2215蛋白相似性最高,氨基酸序列一致性分别达95%和94%,系统进化树结果表明三者聚为一个小的分支。SsGPR1在核盘菌菌丝生长时期的表达量较高,在菌核不同发育阶段表达量相近,但均低于菌丝生长时期。SsGPR1在致病时期表达量不断升高,在接种后9 h表达量最高。将SsGPR1基因沉默载体pSIGPR1导入到核盘菌野生型菌株中,并通过实时荧光RT-PCR检测不同转化子中SsGPR1的表达水平,结果表明SiGPR1-104和SiGPR1-149为SsGPR1基因沉默转化子。沉默转化子在PDA培养基上形成的菌核数量及均重与野生型菌株无显著性差异,且菌核均能萌发形成子囊盘,但菌丝生长稠密,生长速度显著下降。在含有H_2O_2的培养基中,SsGPR1基因沉默转化子菌丝生长受到更强的抑制,表明沉默转化子对氧化胁迫更加敏感。SsGPR1基因沉默转化子在活体油菜叶片和拟南芥植株上能引起发病,但病斑面积减小,表明沉默转化子致病力减弱。SsGPR1基因沉默转化子菌丝中的游离脯氨酸含量与野生型菌株相比无显著差异。【结论】SsGPR1与核盘菌的生长和菌丝形态相关,且参与核盘菌对氧化胁迫的抵御及致病过程。     

添加香叶天竺葵分段烘烤对烤烟致香成分的影响

在烟叶进行三段式烘烤的4个时间段加入香叶天竺葵,进行混合烘烤,对比常规烘烤方式,烟叶的清甜润感增加,刺激和余味有改善。对烘烤后的烟叶进行化学成分的检测,结果显示:变色期加入香料植物,烟叶能同时吸附香茅醇、香叶醇、甲酸香草酯和玫瑰醚4种特有成分,醇化6个月后,这些成分依旧存在。根据结果确定变色期加入香叶天竺葵,是对烟叶进行烘烤调香的最佳烘烤方式。     

从景观异质性分析近自然森林经营

从景观生态学的核心理论——景观异质性理论着手分析了近自然森林经营模式：其本质是对森林景观异质性的维持和促进，是森林经营学发展的一种历史必然，具有充分利用异质时空，提高森林系统生产力、生物多样性、景观多样性，增强系统抗干扰性和稳定性等诸多优点，从而有利于森林的可持续发展。     

井冈山植物资源特点与保护对策

江西井冈山因水热条件优越，森林覆盖率达80．1％，具有植物资源以常绿植物为主、群落类型丰富多样、起源古老、珍稀濒危特有特种多、地带性强等特点。提出了强化管理适度开发、谨慎选项全程监控、引导生态旅游、区域联合共谋发展等保护对策。     

广西喀斯特地区农地生态预警研究

指出了石漠化是喀斯特地区的农地生态灾害,其生态预警的逻辑过程是明确警义、寻找警源、分析警兆、预报警度和排除警患。预警指标体系的确立是整个生态预警工作的核心,是预警系统开展识别、诊断、预测等活动的前提,而建立预警指标体系需遵循科学的构建原则和筛选方法。以广西都安县为例,构建了基于人工神经网的农地石漠化预警,对该区农地的优化调控具有重要意义。     

响应面法优化金花葵微波萃取工艺研究及香气分析

为了研究金花葵(Hibiseusmanihot L.)在烟草、香料等方面的开发和应用,以响应面法对微波萃取金花葵干花的工艺条件进行优化,并对其挥发性成分进行了分析鉴定。在单因素试验基础上,选择预处理加水量、萃取时间、萃取压力为影响因素,以金花葵提取率为响应值,采用Box-Behnken试验设计建立数学模型进行响应面分析,采用同时蒸馏提取装置收集挥发性成分并用气相色谱-质谱仪进行分析和鉴定。结果表明,最佳提取条件为预处理加水量为1∶2.5(g∶mL),萃取时间为85 min,萃取功率为520 W,金花葵提取率为0.290%。共鉴定出45种化合物,主要成分为(E)-9-二十碳烯、β-谷甾醇、亚麻酸、棕榈酸、乙酸、n-十八碳七氟丁酸酯、邻苯二甲酸单乙基己基酯、(3β)-麦角甾-5,24-二烯-3-醇、豆甾醇、9-十九碳烯等。微波萃取法可作为萃取金花葵烟用香料的有效方法,工艺稳定、可行。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒JL07SW株Nsp9基因的序列分析及原核表达

根据猪繁殖与呼吸综合征病毒BJ-4株及变异毒株(HB-1、SY0608、HN-HW、HuN4等)的核苷酸序列,利用Primer软件设计合成针对PRRSV Nsp9基因保守区域的特异性引物.用RT-PCR方法扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒JL/07/SW株Nsp9基因片段,克隆到pMD18-T载体并测序,基因克隆至表达载体...     

厦门市同安区农民专业合作社发展现状与对策

分析研究厦门市同安区农民专业合作社的发展现状、特点,总结存在问题和困难,并提出对策建议。     

立筒仓储粮施用保护剂防虫试验

立筒仓由于储量大,占地面积小,装卸系统配套、机械化程度高,所以在我国发展迅速。但是立筒仓储粮防虫在我国还没有成熟的经验,由于仓体混凝土施工普遍存在气密性差的问题,补漏非常困难。加上粮层深、磷化氢的渗透能力有限,给立筒仓的熏蒸造成很大困难。上海市粮食储运公司科研室等单位在立筒仓熏蒸方面作了大量试验工作,积累了一定的经验。国内还未见施用保护剂于立筒仓的报道。我们考虑,保护剂应用于立筒仓有独特的优点:1.立筒仓上粮输送系统配套,用机械喷雾法随上粮时施药非常方便,2.保护剂主要以胃毒和触杀(有的也兼具一定熏蒸性能)方式杀灭害虫,对装具的气密性不作要求。3.保护剂防虫有效期长,一次施药后,可以安全储藏一年左右、保管方便,安全。1985年6月,我们在四川省崇庆县道明粮库利用小麦收购入仓期间,施用防虫磷处理小麦200余万斤。截至1986年3月份开始逐步调出,整个期间中保证了安全储藏。道明粮库立筒仓为1978年冬季施工修建。它是由10个内径6米、高13米的筒仓作园形分布、中间再围成一个大筒仓,大仓中心到小仓中心为10.4米,仓壁厚0.37米。大仓容量约250万斤,小仓总容量约450万斤。仓底部为锥形,设有地槽安装出粮输送系统,仓内壁作了沥清防潮处理,仓气密性很差。1981年大雨后地槽淹没、出粮系统折除,采取了一定维修措施,但地槽仍很潮湿。修建后至今周围的十个小园仓没有使用过。为了利用仓容,1985年决定进行施用保护剂储粮防虫试验。     

向日葵病虫害防治技术规程

向日葵病虫害防治技术防治对象应以向日葵螟和向日葵菌核病、黄萎病为重点,兼顾区域性发生的锈病、田间常规除草.丈章对综合防治技术措施总结几点,以供参考.