无公害生猪生产的关键控制技术

<正>1无公害生猪的含义所谓无公害生猪是指产地环境、生产过程和产品质量符合国家标准和有关规范的要求,经认证合格,获得认证证书并允许使用无公害农产品标志的未经加工或者初加工的畜禽产品。其具有三个特点:一是强调产品出自无污染的农业生态环境;二是对产品实行全程质量控制;三是对产地和产品实行认可和认证管理。2无公害生猪产地条件控制技术产地环境是无公害生产的先决条件。包括选址与设施、生猪饮用水和大气环     

山金柑四倍体资源的发掘与鉴定

在山金柑自然群体中通过流式细胞术发掘到1株四倍体植株,对其叶片、花朵、花粉、果实、种子等性状进行鉴定,并利用该材料自交创制新的四倍体材料。鉴定结果表明:四倍体相对于二倍体,叶片更宽、更厚、叶形指数变小,叶片气孔密度变小、气孔器更大;四倍体的花直径、整花长度、花瓣长度、花丝长度、雌蕊长度、花粉粒均极显著大于二倍体,花粉外壁纹饰密度极显著小于二倍体;四倍体的果形指数变大,果皮厚度增大,色泽指数无显著差异;四倍体种子横径与二倍体无显著差异,纵径极显著大于二倍体;其种子胚类型为多胚。四倍体山金柑自交后代均为四倍体,可作为柑橘育种和基础研究的资源。     

东试早柚与沙田柚和水晶柚遗传背景比较

‘东试早柚’是实生选育出的柚品种，在云南省热带地区种植，具有早熟、丰产、无籽等优点，然而其来源至今尚未厘清，在品种权意识淡薄的栽培地区产生了许多经济纠纷。因此，解析‘东试早柚’的遗传来源对保护和利用该品种均具有重要意义。以西双版纳‘东试早柚’及其相近品种‘沙田柚’‘水晶柚’为材料，利用分子标记和生物信息等手段探究了3个品种的遗传背景差异。结果显示，‘东试早柚’与‘水晶柚’间杂交不亲和，而与‘沙田柚’杂交亲和；‘东试早柚’和‘水晶柚’的自交不亲和S位点基因型均为S₅S₆，而‘沙田柚’为S₁S₂；‘东试早柚’和‘水晶柚’全基因组SNP密度分布高度相似，SNP聚类分析将‘东试早柚’和‘水晶柚’聚为一类，而与‘沙田柚’显著区分。此外，2对InDel多态性标记也可明显区分‘东试早柚’与‘沙田柚’。因此，本研究结果认为‘东试早柚’与‘水晶柚’遗传背景更为相近，而与‘沙田柚’遗传距离较远、相差很大。     

以东试早柚为母本创制柑橘三倍体种质资源

【目的】三倍体植物由于减数分离紊乱，难以形成可育的雌雄配子，属于天然的不育类型，配置以2x×4x多个杂交组合，旨在创制柑橘三倍体种质，丰富柑橘无核材料。【方法】以单胚性二倍体品种东试早柚为母本与四倍体柑橘材料ZP（纸皮，四倍体甜橙）、PT（四倍体葡萄柚）、NH（四倍体，诺瓦橘柚+HB柚体细胞杂种）为父本进行倍性杂交，授粉后85 d和100 d采摘幼果并对未成熟种子实施幼胚离体挽救培养，获得再生植株后用流式细胞仪和InDel标记对其倍性及遗传来源进行鉴定。【结果】从3个倍性杂交组合的168株再生植株中，通过倍性检测获得三倍体幼苗128株且均为双亲杂交后代，其中东试早柚×ZP共计60株、东试早柚×PT共计60株、东试早柚×NH共计8株。【结论】通过倍性杂交高效创制三倍体柑橘新种质，为柑橘早熟无核育种及相关基础研究提供了珍贵的育种材料。     

63份柚类资源S基因型鉴定

以‘晚白柚’等63份柚类资源为材料基础,通过RNA-seq和序列特征分析发掘新的S-RNase,并结合前期已有的9个S-RNase基因信息,设计21对特异性引物,扩增鉴定63份柚类资源的S基因型。结果发掘到12个新的S-RNase,按顺序分别命名为S₁₀-RNase～S₂₁-RNase。特异扩增结果显示：鉴定的63份材料中,有59份材料得到完整的S基因型,4份仅鉴定到1个S-RNase基因,其中S₂-RNase扩增频率最高,达34.92%(22/63),S₄-RNase和S₆-RNase在63份材料中均未扩增出。结果还显示许多品种具有相同的S基因型。     

无核酸橙资源‘抛橘’的遗传鉴定

以福建无核酸橙资源‘抛橘’为研究对象，运用 cpSSR（叶绿体 SSR）标记鉴定其母系亲本，nSSR（核 SSR）标记鉴定其父系亲本，并构建 UPGMA 聚类树。7 对 cpSSR 引物扩增出 22 个条带，平均每个位点 3.14 个条带，平均期望杂合度（He）和 Shannon 信息指数（I）分别为 0.47 和 0.81。13 对nSSR 引物扩增出 65 个条带，平均每个位点 5 个条带，He 和 I 分别为 0.66 和 1.27。根据 UPGMA 聚类分析结果推测‘抛橘’是以柚类（Citrus maxima）× 酸橙类（Citrus aurantium）杂交而来，并与代代酸橙有密切联系。以甜橙为参考基因组对‘抛橘’进行基因组重测序的分析结果显示：‘抛橘’与酸橙的基因组序列相似度在 85%以上，进一步证明‘抛橘’可能是酸橙的一种类型。     

利用InDel标记筛选多胚山金柑珠心苗后代

【目的】柑橘的遗传转化通常以实生苗上胚轴为外植体。作为基因组高度杂合的无融合生殖物种，柑橘多胚种子中常含有一定比例的、因遗传重组较亲本表现出遗传背景差异的有性后代，从实生群体中筛选无性后代进行遗传转化实验可有效保证外植体材料遗传背景的一致性及后续相关研究的科学性和可靠性。基于此，开发分子标记用于快速准确筛选柑橘短童期种质——多胚山金柑（Fortunella hindsii）子代中的珠心胚实生苗，以期为优化完善山金柑遗传转化体系提供基础。【方法】利用母本山金柑材料DB02重测序数据进行InDel标记的挖掘，筛选出可以区分有性后代和无性后代的InDel标记，通过琼脂糖凝胶电泳对DB02系山金柑的子代幼苗进行鉴定。【结果】开发出7对可以区分DB02系山金柑种子中有性和无性后代的InDel杂合位点标记（InDel1～InDel7），基于这些标记进一步研究，发现土播幼苗和试管幼苗中的珠心苗比例分别为87.5%和74.2%。【结论】利用InDel标记可以成功筛选出与DB02系山金柑遗传背景一致的无性克隆后代，进一步完善了山金柑实生苗上胚轴遗传转化体系。     

与呼吸跃变型果实共贮藏改善柑橘果实色泽和品质

选择9种常见园艺果实分别与纽荷尔脐橙果实进行采后共贮藏,结果表明：与呼吸跃变型果实（香梨、猕猴桃、番茄、香蕉）共贮藏（storage with climacteric fruits,SWCF）处理可以显著促进纽荷尔脐橙果皮转红,其中香梨的效果最佳。高效液相色谱分析显示,SWCF处理促进纽荷尔脐橙果皮总类胡萝卜素、β–柠乌素、β–隐黄质和紫黄质含量增加3倍左右。其中,β–柠乌素的积累是SWCF处理促进柑橘果皮转红的主要原因。实时荧光定量PCR结果显示,SWCF处理显著激活了类胡萝卜素代谢基因的表达,特别是类胡萝卜素裂解双加氧酶4b基因（Carotenoid cleavage dioxygenase 4b,Cs CCD4b）最大被激活了约20倍,这是SWCF处理促进β–柠乌素积累的直接原因。进一步研究发现,SWCF处理改善果皮色泽对各品种柑橘具有普遍性。此外,与乙烯处理相比,SWCF处理显著降低了柑橘果蒂衰老率、失重率以及果皮蜡质的降解,增加了果实挥发性物质的含量。SWCF处理为绿色高效改善柑橘果实外观品质提供了新思路。     

沃柑树冠不同结果部位光照条件对果实品质的影响

以沃柑树冠内膛遮阴果实和树冠外围光照充足果实为试材,对比分析了不同光照条件对果实外观色泽及内在品质的综合影响。结果显示:与光照充足的沃柑果实相比,遮阴的沃柑果实呈现更深的橙红色,其果皮中总类胡萝卜素含量提高了2.87倍,其中主要呈色色素β-柠乌素(红色)和9-顺式紫黄质(橙黄色)的含量分别增加了16.93倍和6.47倍;相关基因表达分析发现类胡萝卜素代谢途径主要结构基因均在遮阴果实中显著上调表达,其中β-柠乌素合成关键基因类胡萝卜素裂解双加氧酶(CCD4b)的表达量增加了11.78倍。结果表明,遮阴可以通过诱导沃柑果皮中类胡萝卜素合成相关基因的表达来促进果皮中类胡萝卜素的积累,最终使沃柑果皮呈现深橙红色;与光照充足的沃柑果实相比,遮阴果实的可溶性固形物、可滴定酸、可溶性糖以及有机酸含量、抗坏血酸含量均显著降低,表明光照条件影响了果实的内在品质。     

基于胚抢救技术的枳雀×枳杂交群体创建及鉴定

【目的】新资源获得是开展育种的前提和基础,通过两种砧木杂交,创造出聚合两种砧木优良性状的新型砧木资源材料。【方法】以枳雀为母本、枳为父本进行杂交实验,结合胚抢救技术获得子一代植株,利用形态学观察及SSR分子标记技术对子一代进行鉴定。【结果】三年胚抢救实验共接种3 146粒种子,获得胚抢救幼苗1250株,成苗率为39.73%。其中通过形态学鉴定出41株杂种苗,共筛选出8对SSR引物来对父本母本进行区分,其中的CS014RCS014F、CS065R-CS065F引物组合可以准确地鉴定出杂种后代,通过SSR分子标记鉴定出20株有性杂种植株。所获得的61株杂种资源为将来深入开展柑橘砧木育种研究工作奠定了材料基础。【结论】以多胚性柑橘为母本的杂交组合获得的成熟种子,难以通过直接播种的方式获得杂种苗。将胚拯救与分子鉴定相结合,通过SSR分析,找到可靠的SSR引物对鉴定杂交后代,为柑橘砧木育种的进一步研究奠定了物质基础。