苜蓿生物活性物质在动物上的应用

苜蓿中含有许多生物活性物质,能够显著影响动物的生长性能、繁殖机能和免疫功能,有些活性物质还可以作为人的保健品使用。本文主要介绍苜蓿皂苷、苜蓿多糖、苜蓿黄酮的生物学功能以及国内外学者对苜蓿中活性成分研究的最新成果。苜蓿中活性物质可以作为动物的饲料添加剂使用,一定剂量的苜蓿活性物质可以提高动物体内的淋巴细胞水平,增加免疫力;提高谷胱甘肽过氧化物酶的活性,抑制丙二醛的水平,具有抗氧化功能;增加动物的生产性能和繁殖性能。     

乌鬃鹅RIG-Ⅰ基因的克隆及初步分析

维甲酸诱导基因蛋白Ⅰ (RIG-Ⅰ)是一类胞质内模式识别受体,在机体抗病毒天然免疫过程中发挥重要作用.本研究通过poly(I∶C)和5'ppp-dsRNA刺激原代鹅胚成纤维细胞,采用RT-PCR扩增获得了乌鬃鹅RIG-Ⅰ CDS,其全长2 805 bp,编码934个氨基酸.氨基酸序列分析表明,该蛋白无跨膜区,无信号肽,位于细胞质和细胞核,故推测gRIG-Ⅰ蛋白为胞质内可溶性蛋白.实时荧光定量PCR结果显示,poly(I∶C)和5'ppp-dsRNA能显著上调gRIG-ⅠmRNA水平.研究结果为RIG-Ⅰ在鹅抗病毒天然免疫研究奠定了一定的理论基础.     

维生素A在养猪生产上的应用

维生素A是一个具有脂环的不饱和一元醇,不仅在仔猪的生长发育阶段发挥重要的生理作用,还能够给妊娠母猪提供所必须的营养成分。有研究发现维生素A具有改善动物视觉,增强免疫功能,提高抗氧化功能和繁殖性能等作用。对维生素A在养猪生产上的应用作一综述。     

豁眼鹅、皖西白鹅和浙东白鹅肌纤维特性的比较

研究旨在通过测定豁眼鹅、皖西白鹅、浙东白鹅肌肉纤维直径、横切面积和肌纤维的密度,探讨不同鹅品种的肌纤维特性差异.结果表明,豁眼鹅胸肌肌纤维直径、横切面积显著大于浙东白鹅、皖西白鹅(P< 0.05),而肌纤维密度表现为相反的趋势.豁眼鹅的腿肌肌纤维直径和横切面积显著大于皖西白鹅(P< 0.05),而豁眼鹅的腿肌肌纤维密度显著小于皖西白鹅(P< 0.05).品种内不同性别之间部分指标也存在显著差异,主要表现在皖西白鹅和浙东白鹅的肌纤维横切面积和直径上.相关性分析表明,肌纤维的直径与肌纤维横切面积呈极显著正相关(P< 0.01),肌纤维直径和横切面积与肌纤维密度呈极显著负相关(P< 0.01).由此可知,不同品种间肌纤维特性存在差异,同品种间不同性别间的肌纤维特性也存在差异.     

日粮硝酸盐水平对湖羊瘤胃硝态氮动态消失率、发酵参数及血液高铁血红蛋白含量的影响

本试验研究日粮硝酸盐的添加量对湖羊瘤胃还原硝态氮程度和对发酵参数及血液高铁血红蛋白的影响。试验选取6头湖羊,采用随机区组试验设计,每期分别饲喂含0%,1%,2%,3%,4%,5%硝酸钾的日粮。测定喂后0,0.5,1.0,1.5,2.0,4.0,6.0,8.0 h瘤胃液硝酸盐和亚硝酸盐含量及瘤胃发酵参数。晨饲后2.0 h通过颈静脉采血,测定高铁血红蛋白含量。结果表明,湖羊在采食1.0 h后硝酸盐含量达到最高(0.952.14 g/L),之后快速消失,亚硝酸盐含量在喂后1.5 h达到最高(0.936.22 μmol/L),之后降低。高铁血红蛋白的含量随硝酸盐添加量的增加而显著升高(P<0.01),最高达0.32%。添加硝酸盐显著提高瘤胃液pH值(P<0.01)和2.0 h的氨态氮含量(P<0.01)以及乙酸/丙酸,添加量高于3%会降低微生物蛋白和总挥发性脂肪酸的浓度,2%的硝酸盐添加量微生物蛋白和总挥发性脂肪酸的合成量最高,最有利于微生物发酵。     

猪瘟耐热活疫苗节能冻干曲线的优化研究

猪瘟疫苗真空冷冻干燥工艺,可减少冻干对制品活性的影响,降低制品冻干过程的耗能,缩短冻干周期,故研制安全、耐热、节能的猪瘟减毒冻干疫苗极为重要。选用甘露醇、甘氨酸等成分设计猪瘟耐热保护剂配方,通过间接免疫荧光法比较制品在37℃、10 d的冻干和耐热损失,并用兔体热反应法复核。检测优化配方的共晶点和塌陷温度设计冻干程序,比较不同预冻方式对猪瘟耐热疫苗冻干的影响,调整冻干周期。猪瘟耐热保护剂配方A-4的冻干和耐热损失最小,分别为0.30 lg和0.45 lg。根据制品的共晶点-27.51℃,对预冻方式筛选,发现快冻冻干和耐热损失最小,分别为0.17 lg和0.38 lg,根据塌陷温度-24.3℃,成功将冻干曲线缩短至24 h。调整后的配方可使猪瘟活苗在37℃保存15 d、45℃保存7 d;内毒素和动物试验表明该疫苗安全、无副反应。上述结果表明,试验成功筛选出猪瘟耐热保护剂配方A-4,在保证疫苗质量的前提下优化冻干曲线,调整后的保护剂配方保证疫苗耐热性能,安全无副反应。     

奶牛小肠上皮细胞的原代培养和鉴定

为研究小肽转运蛋白对小肽转运和吸收机制提供细胞模型,在体外建立原代奶牛小肠上皮细胞分离的方法,采用Ⅰ型胶原酶和中性蛋白酶混合消化液对奶牛小肠组织进行消化,通过2%山梨醇进行密度梯度离心以去除单核细胞、淋巴细胞和肌细胞;用刮除法、相差消化法和96孔板单克隆方法来纯化奶牛小肠上皮细胞,从细胞形态学、细胞角蛋白18免疫荧光染色和小肠上皮细胞特异性标志蛋白来鉴定奶牛肠上皮细胞。结果表明:1)采用Ⅰ型胶原酶和中性蛋白酶联合消化奶牛小肠组织,通过2%山梨醇密度梯度离心可以获得大量的细胞团且48h发生贴壁,但是细胞贴壁不牢。2)48h之后细胞团进一步向外辐射生长出细胞,细胞形态呈现典型的上皮细胞和铺路石形态。5~7d细胞处于对数生长期,细胞大量增值,一部分成纤维细胞与小肠上皮细胞夹杂生长。3)通过96孔板能够单克隆奶牛小肠上皮细胞,细胞呈现均一的铺路石形态。4)奶牛小肠上皮细胞角蛋白18鉴定为阳性,荧光显微镜下能够发出绿色荧光。5)通过RT-PCR能够检测到奶牛小肠上皮细胞特异性标志蛋白E-钙黏蛋白、碱性磷酸酶和肠肽酶的表达,成功建立了奶牛小肠上皮细胞的分离和培养方法。     

新型猪瘟耐热活疫苗冻干工艺设计及放大研究

为了筛选耐热、安全的猪瘟活疫苗冻干工艺,探索工艺放大规律,为耐热冻干工艺从实验室到生产提供理论依据和技术支撑。根据新型猪瘟耐热配方的热参数科学设计冻干程序,通过冻形、加速耐老化实验、残余水分等指标筛选冻干程序并进行工艺放大。结果表明,新型猪瘟耐热活疫苗溶液的共晶点为-26.4℃、塌陷温度-22.4～-20.4℃,筛选得到冻干程序3,当预冻温度为-42℃,主干燥温度为-10℃时为最优曲线。将程序3在0.15 m~2—0.5 m~2—2 m~2进行逐级工艺放大摸索,规模放大3倍(0.5 m~2)时程序可不变,放大到13倍(2 m~2)时需在主干燥阶段下调隔板温度、延长干燥时间。采用新型猪瘟耐热配方及程序3制备的冻干活疫苗产品可在37℃保存20 d、45℃保存14 d;动物实验安全。上述结果表明成功筛选出新型猪瘟耐热配方的配套冻干工艺,并实现了工艺的逐级放大。     

猪小肠上皮细胞分离培养与鉴定

为建立功能性永生化的猪小肠上皮细胞系,并为猪肠道营养吸收与免疫调控以及仔猪肠道疾病发病机制的研究提供细胞模型,本试验采用组织块培养法来分离纯化猪小肠上皮细胞,并通过细胞角蛋白18、细胞增殖曲线、核型分析来鉴定猪小肠上皮细胞。结果表明:1)采用组织块培养法能够成功培养猪小肠上皮细胞并稳定传11代。2)本试验获得的猪小肠上皮细胞角蛋白18抗原鉴定为阳性,染色体核型为二倍体。3)倒置显微镜下观察培养至第11代的猪小肠上皮细胞仍然保持着上皮细胞的特征,呈现"铺路石"和上皮样形态。培养11代后的猪小肠上皮细胞间隙开始变大,规则不明显,细胞开始凋亡。第15代的猪小肠上皮细胞则出现大量凋亡并从瓶底脱落,仅有很少细胞贴壁生长。综上所述,采用组织块培养法能够获得生物学功能稳定的猪小肠上皮细胞系并能正常传11代,可为细胞的永生化提供试验素材。