连翘水提液体外对禽流感病毒增殖及炎症因子表达的抑制效应

旨在评估连翘体外抗H5N1和H9N2禽流感病毒（avian influenza viruses,AIVs）增殖及其介导炎症的效果,本试验制备了连翘水提液,首先采用CCK-8法测定了连翘水提液对DF-1细胞的安全浓度,并通过3种处理方法（药液预处理病毒后感染细胞、先感染病毒后给药、先给药后感染病毒）来筛选连翘水提液的最佳给药方式;在最佳给药方式下,使用TCID₅₀法检测禽流感病毒H5N1和H9N2的增殖情况,并采用qRT-PCR检测了炎症相关趋化因子和细胞因子的表达变化。结果显示,连翘水提液对DF-1细胞的最高安全浓度为4 mg·mL^-1;先感染病毒后给药是最佳的给药方式;在最佳给药方式下,连翘水提液能显著降低H5N1和H9N2 AIVs在各个时间点的病毒滴度,并呈剂量依赖性关系;与对照组相比,H5N1 AIV给药组中CX3CL1、IL8L1、CCL5、SCYA4、IL1β、IL-6和TNF-α的表达显著降低,H9N2 AIV给药组中CX3CL1、IL8L1、CCL5、IFN-β、IL-6和TNF-α的表达也有类似的下降趋势。这表明连翘能够抑制H5N1和H9N2 AIVs在DF-1细胞中的增殖,降低炎症相关细胞因子的表达,有良好的抗炎和抗病毒活性。     

CAPN3基因在草原红牛不同组织中的表达差异

钙激活中性蛋白酶（CAPN3）参与哺乳动物体内多种重要的生理生化过程,但是有关它的确切生理功能和作用机制研究较少。本研究采用实时荧光定量PCR技术检测CAPN3基因在草原红牛多种组织中的表达水平差异情况。试验结果表明,CAPN3基因在所检测草原红牛的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、十二指肠、瘤胃和背最长肌8种组织中均有表达,且在不同组织中的表达水平有所不同。草原红牛脾脏中的CAPN3基因表达量显著高于其他组织,十二指肠和瘤胃中的CAPN3基因表达量显著高于心脏、肝脏、肺脏、肾脏和背最长肌。本试验为肉牛肉质性状的改良提供了分子遗传学依据,并为深入研究草原红牛体内CAPN3基因的生物学作用及作用机制奠定了基础。     

利用下颌骨形态鉴别野生和饲养北美水貂的研究

当前,我国法律明令禁止对濒危野生动物进行猎杀、滥食以及非法交易,但鼓励人工饲养种群的规模化养殖和商业化利用。这引起一个重要问题:即从野外非法猎取的野生动物,会假借人工驯养繁殖的名义合法地进入市场,这对执法部门如何精准鉴定动物来源造成了极大的困扰。现有的依靠骨密度和头骨形态的鉴定方法不能满足需求。本研究以野外水貂(n=25)和人工驯养水貂(n=38)的下颌骨为对象,建立一个更为简便而有效的鉴别方法。下颌骨与咬肌构成一个杠杆系统,髁状突为支点,前臼齿和臼齿的齿尖为阻力点,各个齿尖到髁状突的距离为阻力臂。我们推测,野生水貂的食物质地较为坚硬,而人工饲养的动物食物柔软,因而野生水貂捕食和进食时需要更大的咬合力和咬合效率。这一差异在个体发育过程中很可能导致阻力臂结构发生变化。如果这种变化足够明显,就可以据此建立动物来源的判别指标。通过测定髁状突到前臼齿第3齿尖以及臼齿上的下原尖和下前尖的阻力臂、齿冠长及齿尖高等数据,建立了13个判别指标,利用这些指标分析野生与饲养个体间的差异并进行判别分析,以已知来源个体的正确回判率来评价其有效性。结果显示,与野生组相比,人工饲养水貂下颌咬合杠杆的阻力臂更长,支持了我们的推测。在13个判别指标中,H₂/L₂(臼齿下前尖高和其力臂长之比)和CosA(犬齿沿矢状面的倾角)无性别差异,二者联合使用时,已知来源个体的正确回判率可达到91.20%,具有很强的鉴别能力。由于水貂是典型的小型食肉动物,因此本研究的结果对其他小型食肉动物的鉴别也具有重要的参考意义。     

CAPN3基因在草原红牛不同组织中的表达差异

钙激活中性蛋白酶(CAPN3)参与哺乳动物体内多种重要的生理生化过程,但是有关它的确切生理功能和作用机制研究较少.本研究采用实时荧光定量PCR技术检测CAPN3基因在草原红牛多种组织中的表达水平差异情况.试验结果表明,CAPN3基因在所检测草原红牛的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、十二指肠、瘤胃和背最长肌8种组织中均有表达,且在不同组织中的表达水平有所不同.草原红牛脾脏中的CAPN3基因表达量显著高于其他组织,十二指肠和瘤胃中的CAPN3基因表达量显著高于心脏、肝脏、肺脏、肾脏和背最长肌.本试验为肉牛肉质性状的改良提供了分子遗传学依据,并为深入研究草原红牛体内CAPN3基因的生物学作用及作用机制奠定了基础.     

脂肪来源间充质干细胞条件培养基对小型猪腹腔镜肝损伤氧化应激反应的影响

旨在探究脂肪来源间充质干细胞条件培养基（adipose-derived mesenchymal stem cells-conditioned medium，ADSCs-CM）对小型猪肝损伤氧化应激反应的影响，作者选取24头健康小型猪，随机分为4组，每组6只，分别为模型组（IRI）、DMEM对照组（DMEM）、ADSCs-CM治疗组（CM）和ADSCs治疗组（ADSCs）。4组均通过腹腔镜技术建立小型猪肝缺血再灌注（ischemia reperfusion，IR）合并部分肝切除的肝损伤模型，IRI组移植生理盐水，DMEM组移植浓缩的基础培养基，CM组移植浓缩的脂肪来源间充质干细胞培养基，ADSCs组移植脂肪间充质干细胞。各组分别于术前、术后1、3、7 d采集血液与肝组织样本，使用肝功能检测试剂盒对血清中总胆红素（T-BIL）、乳酸脱氢酶（LDH）、总蛋白（TP）进行检测；使用氧化应激检测试剂盒对肝组织中丙二醛（MDA）、髓内过氧化物酶（MPO）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）进行检测。结果显示：术后1、3 d：模型组和对照组肝功能严重损伤，发生明显氧化应激反应，CM和ADSCs治疗组显著促进肝功能的恢复，且氧化应激相应指标较模型组和对照组表达明显下降。术后7 d，各组基本恢复到术前水平。结果显示：腹腔镜肝缺血再灌注合并肝部分切除损伤可致小型猪发生氧化应激反应，脂肪来源间充质干细胞及其条件培养基均可改善肝损伤后的氧化应激反应。     

人溶菌酶基因的密码子优化设计及生物信息学初步分析

对猪乳蛋白密码子使用偏好性进行了分析,并基于其使用规则,在不改变编码氨基酸序列的基础上对人溶菌酶基因hLYZ的密码子进行了优化设计和生物信息学初步分析。研究结果表明,人hLYZ基因与猪乳蛋白相关基因的密码子使用频率存在明显差异,优化前后猪乳蛋白偏好性hLYZ基因（LYZ-Cas）共改变了109个碱基,约占hLYZ基因碱基总数的24.38%,G＋C含量由47.0%下降至43.8%。改造前后hLYZ基因CDS序列所翻译的氨基酸序列比对结果显示,其氨基酸序列没有发生变化,二级结构预测及Nc值计算显示,其能够在猪乳中相对高效表达。本研究旨在分析并比较优化前后hLYZ基因密码子的生物信息学变化,使其在猪乳蛋白中高效表达,对于生产富含人溶菌酶的hLYZ转基因克隆猪具有重要的理论意义,并且对于提高仔猪成活率,防治哺乳动物乳腺炎,提高乳品质等方面具有巨大的应用潜力。     

草原红牛与中国荷斯坦牛GHR基因多态性及与产奶性状相关性分析

研究旨在分析生长激素受体(GHR)基因外显子10的多态性及其与奶牛产奶性状的相关性。选用30头草原红牛与145头中国荷斯坦牛为材料,采用PCR-RFLP的方法对该基因外显子多态性进行分析,并对突变位点用SPSS软件分析其与产奶性状的相关性。结果表明:GHR基因外显子10的扩增产物被限制性酶BsaH I酶切消化后表现出多态性,经电泳检测显现AA、AB、BB 3种不同的基因型。使用SPSS软件对所得基因型与产奶性状进行相关性分析发现,在中国荷斯坦牛群体中,AA型个体乳脂率显著高于BB型(P<0.05),AA型个体的体细胞数显著低于AB型个体(P<0.05),AA型为优势基因型,等位基因A可显著提高个体的乳脂率,降低个体体细胞数,为中国荷斯坦牛的早期选种选育、改善乳品质提供依据。     

苜蓿种子萌发和幼苗生长对盐碱胁迫的响应

为有效提高苜蓿种子在盐碱地中的萌发率,为盐碱地苜蓿重建提供参考.以"公农1号"紫花苜蓿种子为材料,研究了不同pH梯度盐碱土浸提液和盐碱土对苜蓿种子萌发及幼苗生长的影响[用非盐碱土(pH 7.48)和苏打盐碱土(pH 10.67)按不同比例配制得到],以及NaHC03和Na2C032种不同浓度梯度碱性盐(0,40,60,80,120,160mmol/L)对苜蓿幼苗生长的影响.结果表明:苜蓿种子在盐碱土浸提液胁迫下,当pH在8.0～8.6,电导率在1.0～1.5 mS/cm时,苜蓿种子萌发率＞80％,适宜苜蓿种子萌发;随着盐碱土 pH上升,盐碱胁迫增大,紫花苜蓿体内的游离脯氨酸含量、可溶性糖含量增加.在pH为8.57时,脯氨酸含量有所降低,株高达到最大值,存活率达到最大值,为50％;随着碱性盐浓度增加,植物体内的脯氨酸(Pro)含量、可溶性盐糖含量呈上升趋势,均在盐浓度为160 mmol/L时达到最大值,Na2C03胁迫对苜蓿幼苗的伤害要大于NaH-C03,"公农1号"紫花苜蓿对Na2C03耐受度为60 mmol/L,对NaHC03耐受度为80 mmol/L.     

脂肪间充质干细胞条件培养基对小型猪肝缺血再灌注合并肝部分切除炎症反应的影响

本研究旨在探究脂肪间充质干细胞条件培养基（adipose-derived mesenchymal stem cells-condition medium，ADSCs-CM）对小型猪肝缺血再灌注合并肝部分切除炎症反应的作用。基于腹腔镜技术对24头小型猪建立肝缺血再灌注（ischemia reperfusion，IR）合并肝部分切除模型，根据术后对肝移植4种不同物质：生理盐水、浓缩的基础培养基、浓缩的脂肪间充质干细胞培养基、脂肪间充质干细胞，将小型猪分为模型组（IRI）、DMEM组（DMEM）、ADSCs-CM组（CM）和ADSCs组（ADSCs）4组，每组6只。分别于术前、术后1、3、7 d采集血液与肝组织样本，通过病理组织学炎性细胞的观察，血液常规指标的检测，血清皮质醇（COR）、C反应蛋白（CRP）、透明质酸（HA）的ELISA检测，肝组织炎症相关基因IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10 mRNA的qRT-PCR检测综合评价ADSCs-CM对炎症反应的作用。结果显示：术后1和3 d：IRI组、DMEM组的病理切片出现较多炎性细胞，血常规和炎症相关基因结果也表明术后发生炎症反应，而CM组和ADSCs组显著减少组织中炎性细胞的浸润和血液中白细胞（WBC）、中性粒细胞（NE）、淋巴细胞（LY）的细胞数，降低组织中促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA的表达水平，并提高抗炎因子IL-10 mRNA的表达水平。术后7 d，各组基本恢复到术前水平。综上表明：肝缺血再灌注合并肝部分切除可致炎症的发生，ADSCs-CM和ADSCs均可改善肝缺血再灌注合并肝部分切除的炎症反应，ADSCs-CM移植有潜力成为未来治疗炎症反应的无细胞疗法。     

基于最大熵模型对蓝舌病病毒传播媒介库蠓在中国分布特征的研究

蓝舌病是由蓝舌病毒(BTV)引起的一种非接触性传染病,主要侵害反刍动物,库蠓是蓝舌病毒传播最重要的媒介生物。本研究基于尖喙库蠓地理分布数据及环境数据,利用最大熵生态位模型(MaxEnt)对尖喙库蠓在中国大陆的分布情况进行了预测,并评估了环境变量对尖喙库蠓分布的影响。结果显示,最适合尖喙库蠓生存的地区主要分布在中国的西北和东北部分地区,以及南方的大部分地区;Jackknife分析结果显示,土壤有效水含量(25%)、最冷月最低温(18.1%)、最干月降雨量(18%)、平均最大风速(13.2%)是影响尖喙库蠓分布最主要的4个环境因子,其中最干月降雨量是模型中影响尖喙库蠓分布的最重要环境变量。本研究首次将这种生态位模型用于预测中国库蠓的分布,为蓝舌病的预防控制工作提供参考依据,同时也为库蠓监测管理提供信息。