奶牛粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的原核表达及其活性检测

为了表达奶牛粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)并对其活性进行检测.根据GenBank中登录的牛GM-CSF基因序列(U22385),设计一对特异性引物;采用RT-PCR方法,以LPS体外诱导的奶牛肺泡巨噬细胞为材料,从总RNA中扩增出奶牛GM-CSF cDNA基因,克隆到pGEM-T载体中,经酶切鉴定与序列测定,结果显示克隆的奶牛GM-CSF基因与GenBank中登录的牛GM-CSF基因序列的核苷酸和氨基酸的同源性分别为99.7%和99.3%.构建pET32a-GM-CSF原核表达重组质粒,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE结果显示重组蛋白大小约为35 ku.分别运用集落形成试验与MTT比色法测定重组蛋白活性,结果显示重组奶牛GM-CSF蛋白能够诱导粒细胞前体呈集落性生长并具有较强的体外增殖淋巴细胞的活性,为下一步临床试验奠定了基础.     

LPS诱导肺泡巨噬细胞法对奶牛GM-CSF的克隆与序列分析

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colonyst imulating fac- tor,GM-CSF)主要由T细胞和巨噬细胞产生,能够诱导粒细胞前体和巨噬细胞前体呈集落性生长(即形成集落).GM-CSF还具有种属特异性和造血,抗炎,增强中性粒细胞和巨噬细胞的吞噬功能,增强巨噬细胞的抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用,对粒细胞和巨噬细胞有直接的趋化等作用.试验旨在应用RT-PCR技术扩增奶牛GM-CSF基因,为进一步了解奶牛的GM-CSF基因和获得重组蛋白打下基础.     

rboGM-CSF结合庆大霉素治疗奶牛隐性乳房炎试验

利用rboGM-CSF(500μg/15mL)结合庆大霉素(15mL)进行奶牛隐性乳房炎治疗试验。乳内同时灌注rboGM-CSF与庆大霉素,治疗期为8d。试验结果显示,单独使用rboGM-CSF对轻度隐性乳房炎有一定疗效,但对重度隐性乳房炎效果不佳;联合庆大霉素灌注后,能明显提高二者单独使用的治愈率。说明rboGM-CSF具有潜在的治疗轻度奶牛乳房炎的功效。     

中西药结合治疗奶牛子宫内膜炎疗效观察

选取81头患有不同类型子宫内膜炎的奶牛做临床治疗试验,试验组用中药复方"益孕液"+乳酸环丙沙星,对照组用土霉素,结果表明:复方"益孕液"+乳酸环丙沙星的有效率为91.3%,痊愈率为87.0%,与对照组相比,治疗的有效率无显著差异(P>0.05),受胎率显著高于对照组(P﹤0.05)。试验结果说明,复方"益孕液"结合乳酸环丙沙星治疗奶牛子宫内膜炎,具有抗菌消炎、诱导发情和提高受胎率的作用。